譚真+王善宗+葛運(yùn)貞

【摘要】 目的：探討肺癌組織中HMGN5基因的表達(dá)水平及與臨床病理特征的相關(guān)性，為肺癌的診斷和治療提供依據(jù)。方法：采用RT-PCR法檢測(cè)HMGN5基因在觀察組45例肺癌組織及對(duì)照組35例癌旁正常組織中的表達(dá)，分析HMGN5基因的表達(dá)水平與肺癌組織臨床病理特征相關(guān)性。結(jié)果：觀察組肺癌患者HMGN5基因轉(zhuǎn)錄mRNA水平明顯高于對(duì)照組的癌旁正常組織，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。肺癌組織中HMGN5基因與性別、年齡以及肺癌的病理類型無(wú)顯著相關(guān)性（P>0.05）；與患者的病理分級(jí)和分期以及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有著顯著的相關(guān)性（P<0.05）。結(jié)論：肺癌組織中HMGN5基因的表達(dá)水平與臨床病理特征顯著相關(guān)，并與病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期呈顯著有關(guān)，這可能提示HMGN5基因的表達(dá)水平與肺癌的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系。

【關(guān)鍵詞】 肺癌； HMGN5基因； 臨床病理特征； 相關(guān)性

Expression of HMGN5 Gene in Lung Cancer and Its Correlation with Clinicopathological Features/TAN Zhen，WANG Shan-zong，GE Yun-zhen.//Medical Innovation of China，2017，14（10）：122-125

【Abstract】 Objective：To explore the expression of HMGN5 gene in lung cancer and its correlation with clinicopathological features，and to provide the basis for the diagnosis and treatment of lung cancer.Method：RT-PCR

was used to detect the expression of HMGN5 gene in observation group of 45 cases with lung cancer tissues and control group of 35 cases with corresponding non-tumor normal lung tissue.The correlation between HMGN5 gene expression and clinicopathological features of lung cancer were analyzed.Result：The expression of HMGN5 mRNA in observation group was significantly higher than that in the control group，the difference was statistically significant（P<0.05）.HMGN5 gene in observation group of gender，age and pathological types had no significant correlation（P>0.05）；pathological grading，clinical staging，and whether there was lymph node metastasis were significantly correlated（P<0.05）.Conclusion：The expression level of HMGN5 gene in lung cancer is significantly correlated with clinicopathological features of pathological grading，lymph node metastasis and clinical stage.This may suggest that the expression level of HMGN5 gene has a close relationship with the occurrence and development of lung cancer.

【Key words】 Lung cancer； HMGN5 gene； Clinicopathological features； Relevance

First-authors address：Linyi in Shandong Province Economic and Technological Development Zone Peoples Hospital，Linyi 276023，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.10.034

隨著全球環(huán)境改變及霧霾天氣的加劇，肺癌的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)?，F(xiàn)有數(shù)據(jù)表明，傳統(tǒng)化療、放療和手術(shù)等手段對(duì)肺癌的療效都較為有限[1]。但早期診斷和治療，在某種程度上可延長(zhǎng)患者長(zhǎng)期生存率，故如何早期發(fā)現(xiàn)及診斷是醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)所在[2]。研究證實(shí)，核小體結(jié)合蛋白-1（HMGN5）在胞質(zhì)內(nèi)定位和含量高低與細(xì)胞增殖周期有著顯著的相關(guān)性[3-5]，而肺癌患者已被證實(shí)其惡性增殖細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制明顯異常，故通過(guò)檢測(cè)肺癌組織中HMGN5基因的表達(dá)水平可能對(duì)肺癌的診斷有著一定的作用。本組研究通過(guò)肺癌組織及癌旁組織中HMGN5基因的表達(dá)與臨床病例特征相關(guān)性進(jìn)行研究，為肺癌早期診斷及治療提供相關(guān)依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選取本院2014年12月-2016年6月經(jīng)病理證實(shí)的肺癌標(biāo)本45例（術(shù)前均未接受放、化療）為觀察組，男32例，女13例；年齡48～76歲，平均（63.2±4.9）歲；病理分型：鱗癌26例，小細(xì)胞肺癌12例，腺癌7例；解剖分型：中央型肺癌24例，周圍型肺癌21例，其中32例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期21例，Ⅲ～Ⅳ期24例。同時(shí)選取肺癌癌旁正常組織35例為對(duì)照組，男23例，女12例；年齡47～75歲，平均（63.4±4.8）歲；病理分型：鱗癌19例，小細(xì)胞肺癌11例，腺癌5例；解剖分型：中央型肺癌19例，周圍型肺癌16例，其中28例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期13例，Ⅲ～Ⅳ期12例。兩組患者TMN分期及病理分型等資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 總RNA的提取 觀察組患者術(shù)后切除大小為0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm腫瘤組織，放入凍存管中進(jìn)行液氮保存。對(duì)照組患者切除同樣大小的癌旁正常組織塊進(jìn)行對(duì)照，同樣方法保存。將腫瘤組織和正常組織各100 mg研磨至勻漿離心后棄去上清液，提取總RNA。采用TrizoI一步法，但在總RNA提取過(guò)程中，需要保持RAase-free進(jìn)行操作，并且由同一人進(jìn)行操作[6]。

1.2.2 HMGN5基因mRNA表達(dá)水平檢測(cè) 采用Real-time PCR法檢測(cè)肺癌組織和癌旁正常組織，取2 μL cDNA模板和20 μL的反應(yīng)體系以HMGN5和β-actin特異引物擴(kuò)增相應(yīng)基因，引物退火溫度均為60 ℃。取2.0 μg RNA和1 μL Oligo加入離心管中，補(bǔ)充去離子水，將其充分混勻后，72 ℃水10 min；取出后立即放置在0 ℃冰水浴中，使模板和Oligo退火；再將其放置在42 ℃水浴中1 h，通過(guò)72 ℃水浴對(duì)RT酶進(jìn)行滅活處理，水浴10 min。以逆轉(zhuǎn)錄制備cDNA行Real-time PCR反應(yīng)，程序?yàn)椋?5 ℃預(yù)變性2 min，95 ℃變性15 s，60 ℃變性1 min，循環(huán)45次；95 ℃變性1 min，變性后冷卻至55 ℃，讀取CT值，計(jì)算RNA相對(duì)表達(dá)量[7]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用率（%）表示，比較采用 字2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Person，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者HMGN5基因轉(zhuǎn)錄mRNA水平的表達(dá)比較 觀察組肺癌患者HMGN5基因轉(zhuǎn)錄mRNA水平明顯高于對(duì)照組癌旁正常組織，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 HMGN5基因mRNA表達(dá)與肺癌臨床病理特征的相關(guān)性 本組研究對(duì)肺癌患者年齡、性別、病理類型、病理分級(jí)、分期、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)肺癌組織中HMGN5基因與性別、年齡、肺癌病理類型無(wú)顯著相關(guān)性（P>0.05），但與患者的病理分級(jí)、分期、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有著顯著的相關(guān)性（P<0.05），見表2。

3 討論

肺癌的發(fā)病率及死亡率均位居我國(guó)各種惡性腫瘤之首，以非小細(xì)胞肺癌最為常見，占肺癌的80%左右[8-9]。目前針對(duì)肺癌的治療無(wú)較好的療法，其遠(yuǎn)期生存率較低，故早期診斷及早期治療對(duì)肺癌的預(yù)后有顯著意義[1-10]。

研究證實(shí)，HMG參與多種腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移，在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起重要作用，HMGN5為HMG成員，在乳腺癌、膀胱癌等組織中表達(dá)水平顯著升高，HMGN5基因重排、斷裂與胃腸道腫瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤及生殖系統(tǒng)腫瘤等發(fā)生密切相關(guān)[11-12]。研究還發(fā)現(xiàn)，采用RNA干擾沉默HMGN5基因，可明顯抑制肺癌細(xì)胞增殖，因此抑制HMGN5基因表達(dá)可能是治療肺癌的有效療法[13-14]。故探討肺癌組織中HMGN5基因的表達(dá)水平及與臨床病理特征的相關(guān)性有重要意義。

本組研究發(fā)現(xiàn)，肺癌組織中HMGN5基因轉(zhuǎn)錄mRNA水平明顯高于對(duì)照組癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與目前文獻(xiàn)[15]報(bào)道類似。

文獻(xiàn)[16]報(bào)道，影響肺癌療效及遠(yuǎn)期生存率的因素較多，如TNM分期、病理分級(jí)、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等，還有如基礎(chǔ)疾病、吸煙等患者自身因素。但研究發(fā)現(xiàn)，影響肺癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素主要為肺癌的病理分級(jí)和分期以及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等[17-18]。

為進(jìn)一步探討肺癌組織中HMGN5基因的表達(dá)水平及與臨床病理特征的相關(guān)性，本組研究對(duì)肺癌患者年齡、性別、病理類型、病理分級(jí)、分期，是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肺癌組織中HMGN5基因與性別、年齡、病理類型無(wú)顯著相關(guān)性（P>0.05）；但與病理分級(jí)和分期及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著相關(guān)性（P<0.05），與目前文獻(xiàn)[19]報(bào)道類似。

綜上所述，肺癌組織中HMGN5基因的表達(dá)水平及與臨床病理特征顯著相關(guān)，并與病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期呈顯著有關(guān)，這可能提示HMGN5基因的表達(dá)水平與肺癌的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系[20]。

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