許銀鳳　蔡葦

摘要：目的建立高效液相色譜法測(cè)定珠子參中人參皂苷Re含量的方法。方法

選用XTerra MS C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），以0.05%磷酸-乙腈（55.45）為流動(dòng)相，流速1.0ml/min，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm。結(jié)果 在0.992-11.904μg范圍內(nèi)，人參皂苷Re呈良好的線性關(guān)系，r=0.9999。得平均回收率為96.41%，RSD=1.59%（n=6）。不同產(chǎn)地珠子參中人參皂苷Re的含量不同，其中麗江產(chǎn)的含量最高，德欽產(chǎn)的次之。結(jié)論本法準(zhǔn)確、分離度高，可用于珠子參中人參皂苷Re的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：珠子參；人參皂苷Re；高效液相色譜法

中圖分類號(hào)：R284 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1007-2349（2017）03-0075-02

珠子參，別名珠兒參、野三七、鈕子七、疙瘩七等。為五加科植物人參屬珠子參Panax japonicus C.A.May.vat.major（Burk.）C.Y.Wu et K.M.Feng或羽葉三七PanaxjaponicusC.A.May.vat.bipinnatifidus（Burk.）C.Y.Wu et K.M.Feng的干燥根莖。味苦、甘，微寒。歸肝、肺、胃經(jīng)。具有補(bǔ)肺，養(yǎng)陰，活絡(luò)，止血之功。用于氣陰兩虛，煩熱口渴，虛勞咳嗽，跌打損傷，關(guān)節(jié)疼痛，咳血，吐血，外傷出血。在云南民間代三七使用。主產(chǎn)云南、四川、陜西等地。具有較高的藥用價(jià)值。傳統(tǒng)習(xí)用珠子參根莖中的膨大節(jié)，而對(duì)其細(xì)小的節(jié)間少用或限用，而對(duì)于地上部分更是棄之不用，而同科同屬的人參、三七等藥材早已充分利用地上部分并建立相應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。為了充分利用植物資源，本文選取珠子參地下部分和地上部分中均含有人參皂苷Re這一成分，對(duì)不同產(chǎn)地的珠子參地上部分及地下部分進(jìn)行定量分析比較。目前，用高效液相色譜法測(cè)定珠子參中人參皂苷Re的文獻(xiàn)報(bào)道不多，本文建立了相應(yīng)的測(cè)定方法，為進(jìn)一步開發(fā)利用植物資源提供了理論依據(jù)及實(shí)際指導(dǎo)意義。

1儀器與試藥

1.1儀器 LC-2010A日本島津高效液相色譜儀，LCsolution工作站；FA2004N電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司，精度0.1 mg）。

1.2試藥 人參皂苷Re對(duì)照品（批號(hào)：110754-201324，含量測(cè)定用）購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所。珠子參藥材由云南省藥物研究所制藥廠提供，采收于云南德欽、大姚、麗江。經(jīng)云南省藥物所究所天然藥物資源研究中心高麗正高級(jí)工程師鑒定為五加科植物人參屬珠子參Panax japonicusC.A.May.vat.major（Burk.）C.Y.Wu et KM.Feng或羽葉三七Panax japonicus C.A.May.vat.bipinnatifidus（Burk.）c.Y.Wu et K.M.Feng的干燥根莖。甲醇、乙睛為色譜純（美國(guó)Fisher公司），其他試劑均為分析純。水為超純水（18.21）Pa），0.45微米濾膜（安捷倫公司），磷酸及其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件 Waters XTerra MS C18（4.6 mm x250mm，5 tun）；流動(dòng)相為0.05%磷酸：乙腈=體積比55：45；流速1.0 mlVmin，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm；進(jìn)樣量為10μL；理論塔板數(shù)按人參皂苷Re計(jì)算應(yīng)不低于6000（見圖1）。

2.2對(duì)照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Re對(duì)照品0.01984 g，置于10 mL容量瓶中加甲醇稀釋至刻度，得濃度為1.984 mg/m1的人參皂苷Re對(duì)照品儲(chǔ)備液，備用。使用前過(guò)0.45 μm的微孔濾膜。

2.3供試品溶液的制備 取藥材粉末約1 g，精密稱定，加25 mL水飽和的正丁醇使充分溶解，水浴回流1.5 h。濾過(guò)提取液，濾液蒸干，殘?jiān)舆m量的甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中搖勻，定容，用0.45 nm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4線性關(guān)系的考察 精密吸取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液1、4、8、12、16μl按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)X，峰面積（A）為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=1E+06X+16376，r=0.9999，（n=6）。結(jié)果表明，人參皂苷Re在0.992-11.9041.Lg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5精密度試驗(yàn) 精密吸取同一濃度的人參皂苷Re對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，分別測(cè)定峰面積值，得峰面積平均值為6562712，RSD=0.36%（n=6），精密度良好。

2.6重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批藥材5份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別測(cè)定人參皂苷Re的含量。結(jié)果樣品平均含量為1.3475%，RSD為0.3660%（n=6）。結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于制備后的0、2、4、6、8、12 h依法測(cè)定其含量，結(jié)果人參皂苷Re的平均含量為1.3220%，RSD=1.6451%（n=6）。表明該溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8加樣回收率試驗(yàn) 取6份已知含量的同一批藥材各約0.1 g，精密稱定，分別加入一定量的人參皂苷Re對(duì)照品溶液，按“2.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件測(cè)定。得平均加樣回收率為96.41%，RSD=1.59%（n=6）。說(shuō)明該方法準(zhǔn)確可靠。見表1。

2.9樣品測(cè)定 取珠子參樣品按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依照“2.1”色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表2。

3討論

3.1流動(dòng)相的選擇 參照各參考文獻(xiàn)對(duì)人參皂苷Re的高效液相測(cè)定，對(duì)流動(dòng)相水、0.1%磷酸溶液、0.05%磷酸溶液、乙腈組合進(jìn)行優(yōu)選，并對(duì)其比例進(jìn)行調(diào)整，結(jié)果0.05%磷酸：乙腈=55：45能很好的將其分離。

3.2提取方法的篩選 筆者對(duì)本試驗(yàn)的樣品提取方法進(jìn)行了單因素考察，分別就提取回流時(shí)間、提取方法、提取溶劑進(jìn)行了篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)回流時(shí)間1h和1.5h所得人參皂苷Re含量相差不大，但對(duì)于前面的雜質(zhì)峰回流時(shí)間越長(zhǎng)峰越小，故最終選擇了1.5h的回流時(shí)間；提取方法方面考察了冷浸法、熱回流法、超聲+回流法，結(jié)果熱回流法人參皂苷Re含量明顯高于其他兩種方式；其次，還分別考察了以甲醇、95%乙醇、75%乙醇、水飽和的正丁醇、三氯甲烷為提取溶劑的人參皂苷Re的含量測(cè)定，75%乙醇溶液的提取率最高，但其分離度差，雜質(zhì)峰較多，水飽和的正丁醇提取率次之，但分離度較好，故選用水飽和的正丁醇做溶媒。故最終將回流時(shí)間定為1.5h，提取方法為熱回流法，提取溶劑為水飽和的正丁醇。

3.4產(chǎn)地及不同藥用部位的對(duì)比 通過(guò)測(cè)定各個(gè)產(chǎn)地珠子參藥材中的人參皂苷Re的含量，結(jié)果顯示，無(wú)論是根莖中的節(jié)和節(jié)間，還是地上部分與地下部分之間的含量差異都很小。從各產(chǎn)地情況看，麗江產(chǎn)的含量最高，德欽次之，另外兩個(gè)產(chǎn)地石林與楚雄的相差不大。這可能與各地的氣候、溫度及生長(zhǎng)環(huán)境等有關(guān)。其次，但在實(shí)際生活中，人們習(xí)慣用其膨大的節(jié)間，而對(duì)其細(xì)長(zhǎng)的節(jié)間是限用或不用。就人參皂苷Re的含量來(lái)看，其節(jié)及節(jié)間相差不大，可以充分利用其節(jié)間入藥，以擴(kuò)大藥用部位及有效利用自然資源。

人參皂苷Re是珠子參的有效成分之一，且在珠子參的地上及地下部分均含有。采用高效液相色譜法對(duì)該成分進(jìn)行了測(cè)定，方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，對(duì)擴(kuò)大藥用部位，合理開發(fā)藥用植物資源提供了理論依據(jù)及實(shí)際指導(dǎo)意義。

（收稿日期：2016-11-28）