■ 耿英慧 （上海保碩生物科技有限公司）

乳酸菌用于養(yǎng)殖水體改良需要注意的幾個問題

■ 耿英慧 （上海保碩生物科技有限公司）

近年來，隨著光合細(xì)菌和芽孢桿菌在養(yǎng)殖水體改良上的泛濫應(yīng)用，乳酸菌作為一個新的品種使用日漸增多，但實際上不少養(yǎng)殖戶對如何使用好兼性厭氧的乳酸菌還有很多疑問。本文在諸多研究成果的基礎(chǔ)上，總結(jié)了乳酸菌用于處理養(yǎng)殖水體的依據(jù)和應(yīng)用中需要注意的幾個問題，為用戶提供參考。

外用于養(yǎng)殖水體的乳酸菌制劑主要通過以下3個方面對水環(huán)境和養(yǎng)殖動物產(chǎn)生作用。

1 代謝產(chǎn)物效應(yīng)

乳酸菌可以發(fā)酵碳水化合物，產(chǎn)生酸性物質(zhì)，主要代謝產(chǎn)物及中間產(chǎn)物包括乳酸、乙酸等有機酸（李鐵等，2002）。乳酸可以降低水環(huán)境的pH值，另外還可以通過直接和亞硝酸鹽的作用，間接為水體微生物（反硝化細(xì)菌）提供能量促進(jìn)反硝化作用，來降低水中亞硝酸鹽（宋蓉等，2012）。

乳酸菌代謝還可產(chǎn)生其它活性物質(zhì)包括乳桿菌素，乳酸鏈球肽，雙乙酰，過氧化氫等可以抑制腐敗菌和病原菌如金黃色葡萄球菌，產(chǎn)氣莢膜梭菌，海洋弧菌，沙門氏菌等。

2 在水體中活菌效應(yīng)

乳酸菌進(jìn)入水體后，在適宜的營養(yǎng)條件下，可代謝水中碳水化物，同時對氨氮亞硝酸鹽，藻密度有一定的作用。李卓佳等在實驗室條件下發(fā)現(xiàn)乳酸桿菌能有效的降低養(yǎng)殖廢水和飼料中的亞硝酸鹽、硝酸鹽，磷酸鹽，而使氨氮濃度提升。

3 進(jìn)入消化道和增強免疫效應(yīng)

據(jù)試驗研究養(yǎng)殖動物體表、消化道微生態(tài)與水環(huán)境微生態(tài)有著密切關(guān)系，張慶等通過池塘潑灑芽孢桿菌為主導(dǎo)菌的復(fù)合微生物制劑，能在斑節(jié)對蝦的胃與腸中檢測到芽孢桿菌，說明芽孢桿菌可以隨餌料進(jìn)入對蝦消化道，并在消化道中存活。那么潑灑進(jìn)入水中的乳酸菌，也會進(jìn)入養(yǎng)殖動物消化道，參與維持腸道菌群的微生態(tài)平衡，從而改善胃腸道功能。

乳酸菌在體外也可以增強養(yǎng)殖動物免疫力，呼吸爆發(fā)活力是魚類先天免疫防御中的一個重要指標(biāo)，如高溫滅菌德式乳酸桿菌、乳酸球菌在體外環(huán)境下仍可以提高金頭鯛（Sparus aurata）頭腎細(xì)胞的呼吸爆發(fā)活力（salinas等，2006）。溶菌酶活性是魚類先天免疫系統(tǒng)的重要殺菌酶，Taoka等2006研究表明，乳酸菌還可以提高羅非魚皮膚黏液溶菌酶的水平，并且加入水中比口服效果更顯著。

4 乳酸菌外用的實際應(yīng)用中應(yīng)注意的問題

通過以上介紹，可以看到乳酸菌外用于養(yǎng)殖水體確實可以改善養(yǎng)殖水環(huán)境和促進(jìn)養(yǎng)殖動物健康，在實際應(yīng)用中有哪些地方需要引起特別注意，從而更好的發(fā)揮乳酸菌的功能呢？以下5個問題希望與大家共同探討。

4.1 水中溶氧對乳酸菌的影響

我們知道在工業(yè)大生產(chǎn)上發(fā)酵乳酸菌一般是定期攪拌不通氧的靜置方式來完成的，養(yǎng)殖戶一般也是參照這個流程進(jìn)行乳酸菌的簡單培養(yǎng)，因此，很多養(yǎng)殖戶理所當(dāng)然的認(rèn)為乳酸菌最好在池塘溶解氧最低的時候使用效果最好，所以，很多養(yǎng)殖戶一般會選擇在傍晚使用。那么，在養(yǎng)殖水體增氧情況下會對乳酸菌效果產(chǎn)生影響嗎？周海平等采用MARS培養(yǎng)基，一株乳酸桿菌LH在溶氧高或低的條件下都能很好生長；作者也以3%滅菌紅糖水為培養(yǎng)基，250mL三角燒瓶裝液量50mL、100mL、150mL，接種0.4%100億/g的糞腸球菌，分別靜置和180rpm搖床培養(yǎng)12h，未見兩種培養(yǎng)方式培養(yǎng)液pH值的顯著差異。通過以上兩個試驗，我們發(fā)現(xiàn)至少乳酸桿菌和乳酸球菌，可以在分子氧存在的情況下進(jìn)行厭氧發(fā)酵，氧氣并未對其生長和生存產(chǎn)生毒副作用。

因此我們在使用乳酸菌時，更多的關(guān)注池塘水體是否滿足乳酸菌的營養(yǎng)需求，不必刻意選擇使用時機。

4.2 關(guān)注乳酸菌易衰亡特性

相比芽孢的強抗逆性，不論液體還是粉劑狀態(tài)的乳酸菌制劑，都存在一個活菌易于衰亡的問題。儲存溫度、氧化作用、光照、滲透壓、營養(yǎng)成份以及保護(hù)劑的種類等都對活菌的穩(wěn)定性產(chǎn)生重要影響。魏宏宇等研究了酸奶中乳酸菌數(shù)消長規(guī)律，室溫20℃下，初始菌數(shù)17.5億個/mL，放置1個月僅剩下0.18億個/mL。袁玲（2010）研究發(fā)現(xiàn)格氏乳桿菌制劑和肉雞全價料混合均勻后，15℃儲存30d，活菌數(shù)量級沒有變化，60d后存活率為8.05%；30℃儲存7d后菌數(shù)下降一個數(shù)量級，60d后存活率僅為0.32%。微生物衰亡是一個普遍的現(xiàn)象，但是，只要存在一定數(shù)量的菌種，當(dāng)給予適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)條件，菌量可以快速增殖。

因此，對我們的養(yǎng)殖用戶而言，使用乳酸菌前最好進(jìn)行簡單的擴(kuò)大培養(yǎng)，使菌數(shù)增殖到一定數(shù)量，可以增強使用效果。同時要根據(jù)廠家提供的參數(shù)進(jìn)行擴(kuò)培或活化，防止雜菌感染對養(yǎng)殖動物造成不必要的危害。

4.3 關(guān)注池塘水體的C/N比

在養(yǎng)殖中后期，高蛋白飼料的使用必然引起水體氮的大量積累，導(dǎo)致C/N比失衡，結(jié)果是菌相和藻相紊亂，給養(yǎng)殖水體污染控制和養(yǎng)殖動物健康維持增加了難度。碳元素和氮元素是細(xì)菌生長所必需的基本元素，二者的水平直接決定了細(xì)菌生長和繁殖能力。高磊等研究發(fā)現(xiàn)較高的C/Nw比（≥10）不僅促進(jìn)芽孢桿菌和乳酸菌的快速生長，而且可以有效抑制弧菌的繁殖（弧菌適合較低的C/N比）。

因此，對我們的養(yǎng)殖用戶而言，在使用乳酸菌時，要根據(jù)水體的營養(yǎng)狀況，適當(dāng)添加碳源、調(diào)節(jié)水體的C/N比，將碳源添加技術(shù)和乳酸菌使用技術(shù)結(jié)合起來，以促進(jìn)有益菌的繁殖，優(yōu)化養(yǎng)殖水體菌相，平衡藻相。

4.4 關(guān)注乳酸菌的用量

作為海水養(yǎng)殖水體的土著菌，弧菌等異養(yǎng)細(xì)菌生長優(yōu)勢明顯，在生態(tài)系統(tǒng)中天然占有重要的地位。外源的乳酸菌要對整個微生物群體形成的動態(tài)體系產(chǎn)生影響，必須要達(dá)到一定的數(shù)量。陳營等通過飼料添加乳酸菌，監(jiān)測隨糞便排入水體的乳酸菌數(shù)量，實驗初期水體菌量在103cfu/mL，在30d后菌量維持在104～105cfu/mL，對弧菌有一定的控制作用，但不是很明顯；周海平等采用乳酸桿菌LH與哈維氏弧菌在自配滅菌飼料水溶液中共培養(yǎng)的方法，采用103cells/mL接種量即可取得較好的抑菌效果；王昊等研究結(jié)果也表明不同生物量的乳酸桿菌在養(yǎng)殖水體中的變化存在差異，水體菌量103cells/mL，3d降低到0，菌量106cells/mL7d降低到0，盡管如此，乳酸桿菌對3種微藻（微綠球藻，隱藻，顫藻）的抑制或促進(jìn)作用仍很明顯。

因此，對我們的養(yǎng)殖用戶而言，乳酸菌制劑要對水體弧菌和藻相產(chǎn)生影響，含量至少要達(dá)到103cells/mL，若產(chǎn)品菌數(shù)在10億cfu/mL，要到達(dá)水體中含有103cells/mL，使用濃度為1g/m3（忽略增殖因素），并且至少要3d使用1次，若考慮到產(chǎn)品在運輸儲存過程的衰亡因素，還需要增加用量。

4.5 關(guān)注乳酸菌使用配伍問題

乳酸菌生長多以單糖和雙糖等碳水化合物為基質(zhì)，還輔助一些維生素、氨基酸等。養(yǎng)殖水體有機污染包括殘餌，糞便，藻類以及動植物殘骸，主要成份多為大分子結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，纖維素，淀粉等，這些物質(zhì)對乳酸菌來說有點力不從心了。李卓佳等在實驗室條件下發(fā)現(xiàn)乳酸桿菌能有效的降低養(yǎng)殖廢水和飼料中的亞硝酸鹽、硝酸鹽，磷酸鹽，而使氨氮濃度提升，對COD沒有明顯作用。

所以對熱衷于乳酸菌的養(yǎng)殖戶，要從微生物對污染物降解的特性出發(fā)，合理搭配有益微生物的種類，讓污染物的分解和物質(zhì)循環(huán)得以順暢進(jìn)行，最終使有機污染礦化為無機狀態(tài)。（參考文獻(xiàn)略）