殷 榮 楊 琳 胡黎園 周文浩

·論著·

基于全外顯子組測序?qū)Σ∫虿幻髦滤佬蕴核[遺傳學(xué)病因的初步分析

殷 榮1)楊 琳2)胡黎園1)周文浩2)

目的 針對不明原因致死性胎兒水腫的患兒行全外顯子組測序，分析與胎兒水腫表型相關(guān)的潛在候選基因。方法 收集2011年1月1日至2017年6月1日復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院(我院)收治的不明原因致死性胎兒水腫并行全外顯子組檢測的病例，采集與致死性胎兒水腫有關(guān)的母親、圍生期和新生兒因素，按照我院轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)中心建立的高通量測序數(shù)據(jù)分析流程，采用ExAC數(shù)據(jù)庫、千人基因組數(shù)據(jù)庫和我院分子診斷中心已經(jīng)進(jìn)行建立的13 810例全外顯子組數(shù)據(jù)，行后續(xù)數(shù)據(jù)分析。結(jié)果 符合本文納入標(biāo)準(zhǔn)的不明原因致死性胎兒水腫患兒18例進(jìn)入本文分析，男、女各9例，胎齡(34±2)周，體重(2 935±911)g。2例患兒母親有因胎兒水腫或胸腔積液引產(chǎn)的不良孕產(chǎn)史，3例患兒為試管嬰兒。常見的臨床表型除胎兒水腫和羊水過多外，還包括心功能不全、休克和肺發(fā)育不全等。7例患兒檢測到符合罕見潛在致病標(biāo)準(zhǔn)的變異共9個。5例患兒檢測到的雜合變異，2個為有害變異(無義變異位于FOXF1基因，移碼變異位于RASA1基因)，3個錯義變異(位于FOXC2基因)。2例患兒檢測到的雜合變異，4個變異位于PIEZO1基因2個均為有害變異，位于DSP基因的2個變異均為錯義變異。上述基因進(jìn)行通路富集分析發(fā)現(xiàn)，多集中在心血管、血管和血管內(nèi)皮生長因子等通路上。結(jié)論 在病因不明的致死性胎兒水腫病例中檢測到罕見潛在致病變異，結(jié)合既往報道文獻(xiàn)，F(xiàn)LT4、SPTB、PIEZO1和FOXC2基因可考慮作為胎兒水腫候選基因；首次提出FOXF1、RASA1和DSP基因可能與胎兒水腫表型相關(guān)。

胎兒水腫； 致死性； 全外顯子技術(shù)

胎兒水腫是一種罕見的嚴(yán)重先天性疾病，發(fā)病率1/1 700～1/3 000[1]，治療效果差，病死率高達(dá)50%[2]。其病因復(fù)雜，各個系統(tǒng)疾病終末期都可能出現(xiàn)胎兒水腫。近年來，隨著染色體核型和單核苷酸多態(tài)性(SNP)等遺傳檢測方法在圍生期的應(yīng)用，臨床對胎兒水腫的病因有了更深入的認(rèn)識，但仍有15%～25%新生兒病因不明。病因不明是影響胎兒水腫預(yù)后的獨立危險因素[3-5]，診斷不明確導(dǎo)致臨床治療缺乏針對性，影響新生兒預(yù)后。本文針對病因不明致死性胎兒水腫患兒行全外顯子組測序(WES)，旨在發(fā)現(xiàn)可能的致病原因，建立初步候選致病基因與臨床表型的關(guān)聯(lián)性。

1 方法

1.1 胎兒水腫診斷標(biāo)準(zhǔn) 依據(jù)文獻(xiàn)[1,6]，胎兒超聲發(fā)現(xiàn)胎兒存在≥2處不同部位體腔液體異常聚集，或者存在一處體腔液體聚集合并皮膚水腫(皮膚水腫≥5 mm)。其中體腔積液包括胸腔積液、腹腔積液和/或心包積液。

1.2 病例納入標(biāo)準(zhǔn) 病因不明的非免疫性胎兒水腫死亡患兒，患兒死亡前在征得家長知情同意后進(jìn)行了WES。需要說明的是，本文所指的病因不明的非免疫性胎兒水腫是指排除了：①已經(jīng)明確病因的胎兒水腫死亡患兒，包括由自身免疫性溶血引起的免疫性水腫(Rh溶血和ABO溶血)，②非免疫性胎兒水腫包括染色體異常(染色體核型分析或SNP分析)，先天性心臟疾病(包括宮內(nèi)原發(fā)的心律失?；驈?fù)雜性先天性心臟病)，先天性乳糜胸/腹(胸水或腹水檢測乳糜陽性或單核細(xì)胞>0.80)，宮內(nèi)感染(病原學(xué)證實病毒感染)，胎胎輸血(胎兒B超診斷)。

1.3 臨床資料采集 回溯病歷，采集納入病例的母親、圍生期和新生兒影響因素。①母親因素：疾病診斷胎齡、宮內(nèi)胸腔引流、妊娠高血壓癥、妊娠糖尿病、胎膜早破和羊水過多；②圍生期因素：胎兒胎齡、體重、性別、生產(chǎn)方式和Apgar評分(1 和5 min)；③新生兒因素：機(jī)械通氣、血管活性藥物、一氧化氮(NO)吸入和肺泡表面活性物質(zhì)的應(yīng)用。宮內(nèi)胸腔引流定義：胎兒胸腔穿刺和/或胎兒胸腔羊膜腔分流；妊娠高血壓癥：孕母懷孕20周后出現(xiàn)高血壓(收縮壓>140 mmHg和/或舒張壓>90 mmHg)；妊娠糖尿?。悍现腥A醫(yī)學(xué)會圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)分會推薦的妊娠合并糖尿病臨床診斷指南標(biāo)準(zhǔn)；胎膜早破：胎兒出生前胎膜破水時間>18 h；羊水過多為：胎兒超聲單個羊膜腔≥8 cm或羊水指數(shù)≥24 cm；胎齡根據(jù)末次月經(jīng)結(jié)合胎兒超聲結(jié)果決定。

1.4 基因檢測

1.4.1 DNA提取及全外顯子組捕獲 采用德國QIAGEN公司mini blood全血試劑盒提取基因組DNA，用美國ThermoFisher公司生產(chǎn)的NanoDrop紫外光分光度儀測定樣本的濃度及定量。參照美國Agilent公司SureSelect Human All Exon試劑盒說明書，基因組DNA經(jīng)過超聲打斷、末端修復(fù)、接頭連接和雜交捕獲。捕獲文庫采用美國Illumina公司HiSeq2000平臺進(jìn)行序列檢測。

1.4.2 WES及數(shù)據(jù)篩選流程 原始圖像文件經(jīng)Illumina base calling Software 1.7進(jìn)行圖像識別(Base calling)；Clean reads采用Burrows-Wheeler Aligner(BWA)軟件v.0.5.9-r16，以人類基因組hg19(GRCh37)為參考序列進(jìn)行比對；采用SAMtools軟件v.0.1.16，對生成的BAM文件進(jìn)行排序、合并、去除重復(fù)；采用SOAPsnp軟件 v.1.05進(jìn)行SNV分析；按照復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院(我院)轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)中心建立的高通量測序數(shù)據(jù)流程[7]，外部數(shù)據(jù)庫采用ExAC數(shù)據(jù)庫(http://exac.broadinstitute.org/)及千人基因組數(shù)據(jù)庫(http://phase3browser.1000genomes.org/)，內(nèi)部數(shù)據(jù)庫采用我院分子診斷中心已經(jīng)建立的13 810例全外顯子組數(shù)據(jù)，進(jìn)行后續(xù)數(shù)據(jù)分析。

1.4.3 罕見潛在致病變異的條件 ①該變異所在基因?qū)е碌募膊?，與患兒表型相符合或部分相符合。②在顯性遺傳疾病的致病基因上檢測到雜合變異，或在隱性遺傳疾病的致病基因上檢測到純合或復(fù)合雜合變異，或在男性檢測到X連鎖隱性遺傳疾病的致病基因的雜合變異。③已經(jīng)報道的明確致病變異，或與已知致病變異位點相同但堿基及氨基酸改變不同，或在功能缺失為已知致病機(jī)制的基因上檢測到有害變異(無義變異、移碼變異、剪接位點+/-1或2、起始密碼子變異、單個或多個外顯子缺失)，或在陰性家族史檢測到新發(fā)變異，或在家系內(nèi)患病成員攜帶相同變異。④對于顯性致病基因，篩選變異頻率在ExAC數(shù)據(jù)庫及千人基因組數(shù)據(jù)庫未見記錄，內(nèi)部數(shù)據(jù)庫中<2(頻率<0.01%)；對于隱性致病基因，篩選變異頻率在ExAC數(shù)據(jù)庫及千人基因組數(shù)據(jù)庫、內(nèi)部數(shù)據(jù)庫中均<0.1%。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 2011年1月1日至2017年6月1日我院收治的胎兒水腫75例，符合本文病例納入標(biāo)準(zhǔn)的不明原因的致死性胎兒水腫18例(24.3%)進(jìn)入本文分析，病例排除流程見圖1。表1總結(jié)和歸納了胎兒母親、圍生期和新生兒因素相關(guān)資料。18例中男女各9例，胎齡30～38(34±2)周，體重1 850～4 800(2 935±911)g。2例患兒母親有因胎兒水腫或胸腔積液引產(chǎn)的不良孕產(chǎn)史，3例患兒為試管嬰兒。均有羊水過多，9例行產(chǎn)前干預(yù)，除胎兒水腫外，常見的臨床表型還包括心功能不全、休克和肺發(fā)育不全等(表1)。

圖1 病例篩選流程圖

2.2 WES結(jié)果 在納入的18例患兒中，7例檢測到符合罕見潛在致病條件的變異共9個(表2)。

5例(例1、2、3、6、7)患兒檢測到的雜合變異位于常染色體顯性遺傳致病基因，5個變異中，2個為有害變異(1個無義變異位于FOXF1基因 c.1073C>A(p.S358X)，1個移碼變異位于RASA1基因c.1478_1479delTA)，3個錯義變異(1個為HGMD：http://www.hgmd.cf.ac.uk收錄的致病變異位于FOXC2 基因PMID 19760751)。

2例患兒(例4和5)檢測到的雜合變異位于常染色體隱性遺傳致病基因，4個變異中，位于PIEZO1基因2個均為有害變異(c.7049+1G>C； c.5368_5368delinsAGC)；位于DSP基因的2個變異均為錯義變異，其中c.4175G>A(p.R1392Q) 為HGMD收錄的致病變異PMID 26406308，c.665G>A(p.R222Q) 為HGMD收錄的致病相關(guān)變異。

2.3 檢測罕見潛在變異基因的通路富集分析 圖2顯示，采用STRING(https://string-db.org/)在線分析軟件進(jìn)行基因通路富集分析發(fā)現(xiàn)，2.2中的基因多集中在心血管、血管和血管內(nèi)皮生長因子等通路上。其中，F(xiàn)OXC2、FLT4和RASA1富集在血管內(nèi)皮生長因子受體通路中；FOXC2、FOXF1、FLT4和RASA1富集在血管形態(tài)及血管發(fā)生通路中；FOXC2、FOXF1、FLT4和RASA1、DSP富集在心血管系統(tǒng)發(fā)育及循環(huán)系統(tǒng)發(fā)育通路中。

表1 致死性胎兒水腫患兒的臨床表型

病例胎齡/周出生體重性別母親孕產(chǎn)史臨床表型1343065女無胎兒水腫,肺出血,房間隔缺損2363240男無羊水過多,胎兒水腫,新生兒驚厥,心功能不全3322370女第3胎1)胎兒水腫,氣胸,肺動脈高壓,彌散性血管內(nèi)凝血,血小板減少4341950男第3胎2)胎兒水腫,休克,多器官功能衰竭,凝血障礙,彌散性血管內(nèi)凝血,帽狀腱膜下出血5332825女無胎兒水腫,先天性肺發(fā)育不全,肺動脈高壓6322040女流產(chǎn)3)胎兒水腫,四肢肌張力低下,多器官功能衰竭7332560女無胎兒水腫,心包積液,低血糖,嗜酸細(xì)胞異常8354800男無胎兒水腫,多器官功能衰竭9352640男試管嬰兒胎兒水腫,心功能不全,房撲10374730女無胎兒水腫,多器官功能衰竭11353150女無胎兒水腫,貧血,白細(xì)胞減少12353340男流產(chǎn)3)胎兒水腫,房間隔缺損13363045男無胎兒水腫,肺發(fā)育不全14332530女無胎兒水腫,面容異常(頸短,耳位低),肺動脈高壓15301980男無胎兒水腫,房間隔缺損,肺動脈高壓16384400男無胎兒水腫,多器官功能衰竭17331850男試管嬰兒胎兒水腫,先天性肺發(fā)育不良18322330女試管嬰兒胎兒水腫,凝血障礙,房間隔缺損

注 1)第1胎流產(chǎn)，第2胎21周因胸腔積液引產(chǎn)；2)第1胎36周胎兒水腫出生后死亡，第2胎女孩體??；3)不明原因流產(chǎn)

圖2 罕見潛在變異基因的通路富集分析

2 討論

胎兒水腫是圍生期嚴(yán)重疾病，病因復(fù)雜，臨床處理困難，是新生兒復(fù)蘇和管理的難點。胎兒或新生兒任何一個系統(tǒng)的嚴(yán)重疾病都有可能影響到血管的毛細(xì)血管壓和組織靜水壓，以及血漿和組織液體膠體滲透濃度的平衡，最終導(dǎo)致組織和體腔內(nèi)液體集聚，形成胎兒水腫。

胎兒水腫的病因多樣[8-10]。2015年美國非免疫胎兒水腫臨床指南指出胎兒水腫的病因包括 ：①心血管系統(tǒng)疾病，如先天性心臟病或心律失常，②染色體異常如21三體綜合征等，③血液系統(tǒng)疾病，如地中海貧血等，④細(xì)菌或病毒感染，⑤胎胎輸血綜合征，⑥淋巴回流受阻如乳糜胸等，⑦不明病因。本研究排除因免疫性原因引起的胎兒水腫，排除已經(jīng)明確病因的非免疫性免疫水腫包括染色體疾病，如21三體綜合征，7號染色體異常，Turner綜合征；先天性心血管畸形，如Ebstein畸形，左心室發(fā)育不良，心肌炎；心律失常，如陣發(fā)性室上速；先天性乳糜胸/腹；宮內(nèi)感染，如CMV，HSV和微小病毒引發(fā)的胎兒水腫；胎糞性腹膜炎和胎胎輸血。納入本研究的病例為臨床不能判定病因的病例，排除可能的環(huán)境因素對疾病的影響，考慮患兒的遺傳背景可能是疾病的潛在病因。

近2年來WES技術(shù)應(yīng)用于檢測圍生期不明原因死亡患兒，獲得初步進(jìn)展。研究報道，合并B超檢查異常宮內(nèi)死亡患兒，應(yīng)用WES技術(shù)異?；虻臋z出率為10%～57%[11-13]。WES技術(shù)不僅將臨床表型和已知的基因型相聯(lián)系，還發(fā)現(xiàn)人類新的基因型。本研究納入18例病因不明的非免疫性致死性胎兒水腫，行WES。針對檢測到的罕見潛在致病變異進(jìn)行分析，旨在為這類疾病探索可能的遺傳學(xué)病因。其中7例患兒檢測到了罕見潛在致病變異。通過通路富集分析，發(fā)現(xiàn)上述基因較集中地富集于血管內(nèi)皮生長因子受體通路、血管形態(tài)及血管發(fā)生通路、心血管系統(tǒng)發(fā)育及循環(huán)系統(tǒng)發(fā)育通路中，故該類型通路上的基因發(fā)生突變可能造成患兒水腫表型。

在7例患兒中，5例無母親胎兒水腫孕產(chǎn)史。其中，例1臨床主要表型為孕30周B超發(fā)現(xiàn)胎兒水腫，檢測到FLT4基因的錯義變異c.2425A>C(p.K809Q)。FLT4基因是遺傳性淋巴水腫(MIM:153100)的致病基因[14]，表現(xiàn)為由于淋巴流動的改變導(dǎo)致四肢腫脹，并出現(xiàn)局部感染和身體損傷，OMIM數(shù)據(jù)庫(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/omim/?term=FLT4)檢索到的2個研究均在胎兒水腫患兒檢測到該基因的變異，且相同變異在家族內(nèi)有高度異質(zhì)性[15]。例2臨床主要表型為胎兒水腫合并心功能不全，檢測到SPTB基因錯義變異c.6697G>C(p.E2233Q)，該基因突變可導(dǎo)致紅細(xì)胞形態(tài)異常和溶血。既往有2例胎兒嚴(yán)重水腫檢測到該基因純合變異[16-17]。例5臨床表現(xiàn)為胎兒水腫，合并先天性肺發(fā)育不全，檢測到PIEZO1基因2個變異c.7049+1G>C和c.5368_5368delinsAGC。PIEZO1基因可導(dǎo)致遺傳性淋巴水腫(MIM:616843)，可表現(xiàn)為廣泛淋巴管發(fā)育不良，淋巴水腫，影響全身，包括腸和/或肺淋巴管擴(kuò)張、胸腔積液、乳糜胸和/或心包積液[18]。2015年首次報道該基因可導(dǎo)致胎兒水腫[19]。例6主要表現(xiàn)為胎兒水腫，伴多器官功能衰竭，檢測到FOXC2基因變異c.361C>T(p.R121C)，該基因是淋巴水腫-雙行睫綜合征(MIM:153400)的致病基因[20]。主要表現(xiàn)為肢體淋巴性水腫、雙行睫毛，還可以表現(xiàn)為角膜炎、角膜潰瘍、畏光、上瞼下垂、靜脈曲張、唇裂和腭裂等。有研究報道在一個胎兒水腫家系中檢測到FOXC2基因無義突變。例7主要表現(xiàn)為胎兒水腫及心包積液，檢測到FOXF1基因無義變異c.1073C>A(p.S358X)，該基因是肺靜脈毛細(xì)血管發(fā)育不良(MIM:265380)的致病基因[21]。該疾病呈常染色體顯性遺傳，是新生兒持續(xù)性肺動脈高壓的一種罕見原因，其特征是肺部毛細(xì)血管系統(tǒng)發(fā)育異常?？杀憩F(xiàn)為呼吸困難、多種先天性異常，累及心血管、胃腸道、泌尿生殖系統(tǒng)和肌肉骨骼系統(tǒng)等。尚無明確胎兒水腫報道。

在7例患兒中，2例母親有胎兒水腫孕史。其中，例4系G3P3，G1P136周胎兒水腫出生后死亡，G2P2女孩體健，例4主要表現(xiàn)為嚴(yán)重胎兒水腫、休克、多器官功能衰竭和凝血障礙，檢測到DSP基因2個罕見變異c.665G>A(p.R222Q)，c.4175G>A(p.R1392Q)，DSP可導(dǎo)致常染色體隱性遺傳的大皰表皮松解癥致死性皮膚棘層松解型(MIM:609638)和常染色體顯性遺傳的致心律失常性右室發(fā)育不良(MIM:607450))等[22,23]；例3系G3P1，G1P0為自然流產(chǎn)(原因不詳)，G2P0因孕21周發(fā)現(xiàn)胸腔積液引產(chǎn)，例3主要表現(xiàn)為嚴(yán)重胎兒水腫和凝血功能障礙。檢測到RASA1基因移碼變異c.1478_1479delTA，RASA1基因為導(dǎo)致毛細(xì)血管畸形(MIM:608354)的致病基因[24,25]。可表現(xiàn)為非典型性毛細(xì)管畸形，與動靜脈畸形、動靜脈瘺或韋伯綜合征有關(guān)。DSP和RASA1尚無明確報道可導(dǎo)致胎兒水腫，基因的功能分析可能存在相關(guān)性，有待進(jìn)一步研究。同時，對于原因不明的反復(fù)出現(xiàn)胎兒水腫的家系，如檢測到顯性致病基因，警惕先證者父母生殖細(xì)胞嵌合可能。

本研究，針對可能導(dǎo)致嚴(yán)重致死性胎兒水腫的遺傳學(xué)病因進(jìn)行初步探索，檢測到罕見可能致病變異。上述變異所累及的基因中，通過通路富集分析發(fā)現(xiàn)，較集中地富集于血管內(nèi)皮生長因子受體通路、血管形態(tài)及血管發(fā)生通路、心血管系統(tǒng)發(fā)育及循環(huán)系統(tǒng)發(fā)育通路中，故該類型通路上的基因發(fā)生突變，可能造成胎兒水腫表型?？勺鳛楹蜻x基因。結(jié)合既往報道文獻(xiàn)，F(xiàn)LT4、SPTB、PIEZO1和FOXC2基因僅在胎兒水腫患兒中有罕見報道，尚未建立明確的表型基因型關(guān)聯(lián)性，且在家族內(nèi)均有明顯的異質(zhì)性。

本文結(jié)果顯示，上述4個基因可考慮作為胎兒水腫候選基因；并首次提出FOXF1、RASA1和DSP基因可能與胎兒水腫表型相關(guān)，有待進(jìn)一步研究加以明確。對于臨床相對較為常見的表型—胎兒水腫，尤其是嚴(yán)重致死性胎兒水腫，分子遺傳學(xué)病因認(rèn)識尚不充分，分析原因可能與以下因素有關(guān)：①既往研究多采用單基因一代測序，患兒尚無相應(yīng)疾病特征性表型，所以未進(jìn)行相應(yīng)基因檢測；②本研究納入的患兒病情危重，疾病進(jìn)展快，早期死亡，造成在此類疾病中，尚未進(jìn)行相關(guān)分子遺傳學(xué)檢測。

本研究僅為針對嚴(yán)重致死性胎兒水腫病因?qū)W的初步探索，尚需進(jìn)一步的家系內(nèi)驗證和擴(kuò)大樣本量進(jìn)行驗證，并進(jìn)一步進(jìn)行功能學(xué)研究，才能建立明確的致病基因關(guān)聯(lián)性。

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Pilot study of genetic etiology in neonates with agnogenic lethal fetal hydrops using whole-exome sequencing

YINRong1),YANGLin2),HULi-yuan1),ZHOUWen-hao2)

(Children'sHospitalofFudanUniversity,Shanghai201102,China; 1)DepartmentofNeonatology, 2)MolecularDiagnosticCentre)

YANG Lin, E-mail: yanglin_fudan@163.com

ObjectiveTo investigate potential candidate genes related to phenotype of agnogenic lethal hydrops using whole-exome sequencing.MethodsData of neonates with agnogenic lethal hydrops were collected from Jan 1st 2011 to June 1st 2017 in Children's hospital of Fudan University (our hospital) and WES was employed to analyze their genotype. Maternal, perinatal and neonatal risk factors were also collected from each neonate. We used next-generation sequencing data analysis pipeline established by Translational Medical Center, Children's Hospital of Fudan University. Public databases were used including the exome aggregation consortium (ExAC), and the 1000 Genome Project, as well as in-house database including 13 810 WES data for variants annotation and filtering.ResultsEighteen neonates with agnogenic lethal hydrops were included in this study, and half of them were male. Their gestational ages were among 34±2 weeks and birth weight was around (2 935±911) g. There were 2 patients' mothers with history of induced abortion because of hydrops or thoracic effusion fetus and 3 patients were IVF (In-Vitro Fertilization) infants. Besides hydrops and polyhydramnios, the other common clinical phenotypes were cardiac dysfunction, shock and pulmonary dysplasia. Nine variants in 7 patients were identified fitting our criteria for rare and likely pathogenic, including 5 heterozygous variants in 5 genes and 4 compound heterozygous variants in 2 genes. Among the 5 heterozygous variants, 2 variants were deleterious (one nonsense inFOXF1 gene and one frameshift inRASA1 gene), 3 variants were missense inFOXC2,FLT4 andSPTBgene. Among the 4 compound heterozygous variants, both variants inPIEZO1 gene were deleterious (one splicing site and one frameshift), other two variants inDSPgene were missense. The pathway enrichment analysis showed that these genes identified in the 7 patients focused on blood vessel, cardiovascular system development and vascular endothelial growth factor receptor signaling pathway.ConclusionSeven rare potential pathogenic gene variants were detected in agnogenic lethal hydrops neonates. Combined with previous literature,FLT4,SPTB,PIEZO1 andFOXC2 might be considered as candidate genes of fetal hydrops. Our study was the first report that suggestedFOXF1,RASA1 andDSPgenes could be related to the phenotype of fetal hydrops.

Fetal hydrops; Lethal; Whole-exome sequencing

2017-07-12

2017-08-18)

(本文編輯：張崇凡，孫晉楓)

復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院 上海，201102；1)新生科，2)分子診斷中心

楊琳，E-mail: yanglin_fudan@163.com

10.3969/j.issn.1673-5501.2017.04.008