楊鳳莉
摘要:真菌毒素是真菌在其生長環(huán)境里所產(chǎn)生的次級毒性代謝產(chǎn)物,其會導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品大幅減產(chǎn),使農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)下降,阻礙農(nóng)產(chǎn)品出口。本文就如何使用酶標儀測定真菌毒素的原理及方法進行了論述,并特別提出了酶標儀使用注意事項,以提高測定樣品的精確度和工作效率。
關(guān)鍵詞:酶標儀;真菌毒素;檢測技術(shù)
1.引言
我國地域廣闊,北起黑龍江南至廣東各省份都可以種植糧油作物,雖然各地氣候差異巨大,耕作方式不同,但作物受到真菌毒素污染的現(xiàn)象十分普遍。它的污染可發(fā)生在農(nóng)作物(例如:玉米、花生、小麥等)的田間生長、收獲、貯藏、運輸、加工階段;食品藥品(例如:啤酒、咖啡、調(diào)味料、中草藥等)的加工、儲藏階段。被真菌毒素污染的農(nóng)產(chǎn)品被人誤食后會對人體健康造成危害,另外用被真菌毒素污染的作物制成飼料,再去喂養(yǎng)禽類、畜類、魚類等動物,真菌毒素可以由被污染的動物性食品,最終通過食物鏈危害到人的健康。真菌毒素嚴重影響著農(nóng)產(chǎn)品、食品藥品的質(zhì)量安全、品質(zhì),給人類和動物造成危害。目前,許多國家依據(jù)公共衛(wèi)生意義和商業(yè)目的,都制定了食品和飼料中真菌毒素的限量。因此需要靈敏、精確地對樣品進行分析的儀器,以確保其含量低于規(guī)定的限量。本文將介紹真菌毒素的種類、危害、以及酶標儀測定真菌毒素檢測技術(shù)的原理及注意事項。
2.真菌毒素的種類及危害
真菌食物中毒是指產(chǎn)毒霉菌寄生在糧油、食品、中藥或飼料上,在適宜條件下產(chǎn)生有毒代謝物,人畜攝食后導(dǎo)致的中毒。中毒沒有傳染性,根據(jù)作用的靶標器官或引起的病理現(xiàn)象,可將真菌毒素分為肝臟毒、腎臟毒、神經(jīng)毒等。食用被真菌毒素污染的食品有致癌、致畸、致突變的風(fēng)險。人畜進食被其污染的糧油食品可導(dǎo)致急、慢性真菌毒素中毒癥[1]。
2.1黃曲霉毒素
黃曲霉毒素早在1993年就被世衛(wèi)組織劃為一類致癌物。主要有B1、B2、G1、G2、M1、M2。它們的結(jié)構(gòu)式不同,其毒性及危害也有很大差異。其中,黃曲霉毒素B1的毒性及致癌性最強,對農(nóng)產(chǎn)品及食品的安全性影響很大,值得關(guān)注。
2.2赭曲霉毒素
在其眾多種類中,赭曲霉毒素A的毒性最強,其是自然界中的主要天然污染物。國際癌癥研究機構(gòu)(IARC)認為赭曲霉毒素A是一種人類可能的致癌劑。除此之外,赭曲霉毒素A對人體的免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)會造成危害以及可能致畸、致突變。
2.3展青霉毒素
展青霉毒素又叫棒曲霉毒素,是一種免疫抑制劑。展青霉毒素是一種神經(jīng)毒素,其能誘發(fā)實驗動物腫瘤,并對消化系統(tǒng)和皮膚組織具有損害作用,還具有致畸性、致突變性和致癌性。
2.4單端孢霉烯族化合物
這是一組生物活性和化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的有毒代謝產(chǎn)物。單端孢霉烯族化合物可影響動物的免疫系統(tǒng)使免疫力下降,抗感染能力降低。
2.5玉米赤霉烯酮(ZEA)
玉米赤霉烯酮(ZEA)又名F-2毒素,會引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)造成危害,中毒后會產(chǎn)生諸如惡心、發(fā)冷、頭痛的癥狀。
3.酶標儀測定真菌毒素檢測技術(shù)研究
3.1酶標儀
酶標儀即酶聯(lián)免疫檢測儀(ELISA Reader),是酶聯(lián)免疫吸附試驗的專用儀器??珊唵蔚胤譃榘胱詣雍腿詣觾纱箢?,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一個比色計,即用比色法來分析抗原或抗體的含量[2]。ELISA測定一般要求測試液的最終體積在250ul以下,用一般光電比色計無法完成測試。因此對酶標儀中的光電比色計有特殊要求。
3.2酶標儀測定的原理
在特定波長下,檢測被測物的吸光值。光通過被檢測物,前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量,特定波長下,同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。檢測單位用OD值表示,OD是optical delnsity(光密度)的縮寫,OD=1og(1/trans),其中trans為檢測物的透光值。根據(jù)蘭伯―比爾定律,OD值與光強度成下述關(guān)系:E=OD=logΙ0/Ι,其中:E表示被吸收的光密度;Ι0為在檢測物之前的光強度;Ι為從被檢測物出來的光強度。
OD值由下述公式計算:E=OD=C×D×E其中:C為檢測物的濃度;D為檢測物的厚度;E為摩爾因子。
3.3 ELISA實驗原理
用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗體的微孔中依次加入標本或者標準品、生物素化的抗體,HRP標記的親和素,經(jīng)過徹底洗滌后用底物顯色。底物在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標蛋白呈正相關(guān)。用酶標儀在(450nm)波長下測定測定吸光度,計算樣品濃度[3]。
3.4酶標儀的使用注意事項
標儀是一種精密的光學(xué)儀器,因此良好的工作環(huán)境不僅能確保其準確性和穩(wěn)定性,還能夠延長其使用壽命。
①儀器應(yīng)放置在無磁場和干擾電壓的位置;
②儀器應(yīng)放置在低于40分貝的環(huán)境下;
③為延緩光學(xué)部件的老化,應(yīng)避免陽光直射;
④操作時環(huán)境溫度應(yīng)在15℃-40℃之間,環(huán)境濕度在15%-85%之間;
⑤操作電壓應(yīng)保持穩(wěn)定;
⑥操作環(huán)境空氣清潔,避免水汽,煙塵。保持干燥、干凈、水平的工作臺面,以及足夠的操作空間。
3.5操作注意事項
酶標儀的功能是用來讀取酶聯(lián)免疫試劑盒的反應(yīng)結(jié)果,因此要得到準確結(jié)果,試劑盒的使用必須規(guī)范。在酶標儀的操作中應(yīng)注意以下事項:
①使用移液器加液,移液頭不能混用;
②洗板要洗干凈。如果條件允許,使用洗板機洗板,避免交叉污染;
③嚴格按照試劑盒的說明書操作,反應(yīng)時間準確;
④請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部,操作完成后請洗手;
⑤如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學(xué)害,請嚴格按照試劑盒的操作說明,以防對操作人員造成損害;
⑥不要在測量過程中關(guān)閉電源;
⑦對于因試劑盒問題造成的測量結(jié)果的偏差,應(yīng)根據(jù)實際情況及時修改參數(shù),以達到最佳效果;
⑧使用后蓋好防塵罩。
4.總結(jié)
真菌毒素嚴重影響著農(nóng)產(chǎn)品、食品藥品的質(zhì)量安全、品質(zhì),給人類和動物造成危害。目前,許多國家依據(jù)公共衛(wèi)生意義和商業(yè)目的,都制定了食品和飼料中真菌毒素的限量。因此需要靈敏、精確地對樣品進行分析的儀器,以確保其含量低于規(guī)定的限量。本文介紹了真菌毒素的種類、危害、以及如何利用酶標儀測定真菌毒素的原理及注意事項,具有一定的實際意義。
參考文獻:
[1]王紅星,桃正國.飼料中的真菌毒素的危害性及其防治措施[J].獸藥與飼料添加劑,2005(03):19-20.
[2]李萌萌,關(guān)二旗,卞科,崔貴金.真菌毒素的輻照降解及產(chǎn)物解析研究進展[J].糧食與飼料工業(yè),2013,(01).
[3]胡娜,徐玲.真菌毒素檢測方法研究進展[J].食品科學(xué),2007(08).endprint