戚繼，孫濤，趙澎，任同

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院，北京100050)

腦膠質(zhì)瘤組織SPARC、p15表達(dá)及意義

戚繼，孫濤，趙澎，任同

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院，北京100050)

目的探討腦膠質(zhì)瘤組織富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)、p15蛋白表達(dá)變化及其臨床意義。方法采用免疫組化SP法檢測83例腦膠質(zhì)瘤患者(Ⅰ～Ⅱ級28例、Ⅲ級32例、Ⅳ級23例)腦膠質(zhì)瘤組織及瘤旁正常腦組織中SPARC、p15表達(dá)；分析不同臨床分期、不同存活時間患者瘤組織SPARC、p15陽性表達(dá)情況。結(jié)果瘤組織SPARC陽性表達(dá)率高于瘤旁組織,P<0.05；p15陽性表達(dá)率低于瘤旁組織，P<0.05。隨著臨床分級升高， 瘤組織SPARC表達(dá)升高(P<0.05)，p15表達(dá)下降(P<0.05)；存活不足5年者SPARC陽性表達(dá)率高于存活5年及以上者(P<0.05)，p15陽性表達(dá)率低于存活5年及以上者(P<0.05)。結(jié)論腦膠質(zhì)瘤組織中SPARC表達(dá)上調(diào)、p15表達(dá)下調(diào)。檢測腦膠質(zhì)瘤組織中SPARC、p15有助于判斷腦膠質(zhì)瘤患者病情及評估預(yù)后。

腦膠質(zhì)瘤；富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白；p15蛋白；臨床分級；存活時間

腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)腫瘤的高發(fā)類型[1，2]，患者預(yù)后較差[3]，其發(fā)生機(jī)制目前仍不明確。膠質(zhì)瘤早期沒有明顯的臨床癥狀，亦無明確的腫瘤標(biāo)記物輔助確診，因此早期確診率低。富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)曾被稱為骨連蛋白，參與發(fā)育、組織修復(fù)等多種生理過程，與黑色素瘤、胰腺癌、肺癌、卵巢癌等的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[5]。p15蛋白是一種細(xì)胞周期依賴性的蛋白激酶抑制因子，可與CDK4或CDK6結(jié)合抑制細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，使細(xì)胞周期停滯于G1期，p15蛋白表達(dá)缺失可以導(dǎo)致大量細(xì)胞進(jìn)入S期，細(xì)胞增殖異常活躍形成腫瘤[6，7]。本研究探討腦膠質(zhì)瘤組織SPARC、p15表達(dá)變化及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 研究對象為2011年1月～2012年1月于我院行手術(shù)治療的腦膠質(zhì)瘤患者83例，其中男34例、女49例，年齡20～59(41.5±9.2)歲。均經(jīng)術(shù)后病理學(xué)證實(shí)診斷。參照WHO 2007年版中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分級標(biāo)準(zhǔn)[8]，Ⅰ～Ⅱ級28例，Ⅲ級32例，Ⅳ級23例?；颊咝g(shù)前均未接受放化療及腫瘤免疫治療。排除患有其他部位惡性腫瘤的患者，排除患有心、肝、肺等嚴(yán)重臟器損傷的患者。術(shù)后存活不足5年者69例，5年及以上者14例。

1.2 瘤組織及瘤旁組織SPARC、p15表達(dá)檢測 取手術(shù)切除的腦膠質(zhì)瘤組織存檔蠟塊及其瘤旁正常腦組織存檔蠟塊。采用免疫組化SP法檢測SPARC、p15表達(dá)。以已知陽性切片為陽性對照，以PBS代替一抗為陰性對照。由兩位病理科醫(yī)師閱片。 采用染色強(qiáng)度評分和陽性細(xì)胞百分比評分[9]判斷結(jié)果。染色強(qiáng)度評分： 細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為SPARC陽性細(xì)胞，免疫組化SP染色后細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為p15陽性細(xì)胞。光鏡下細(xì)胞質(zhì)(核)無著色、淡黃色、棕黃色和棕褐色依次記為0、1、2、3分。陽性細(xì)胞百分比評分：計數(shù)5個400×高倍視野，每個視野計數(shù)100個細(xì)胞，計算陽性細(xì)胞百分比(陽性細(xì)胞數(shù)/500×100%)。陽性細(xì)胞百分比：0～5%為0分，>5%～25%為1分，>25%～50%為2分，>50%～75%為3分，>75%為4分。染色強(qiáng)度評分與陽性細(xì)胞百分比的乘積為0判為陰性，其余為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件。瘤組織、瘤旁組織SPARC、p15陽性表達(dá)率比較以及不同臨床分期、不同存活時間者瘤組織SPARC、p15陽性表達(dá)情況比較采用χ2檢驗(yàn)和Fisher確切概率法。瘤組織SPARC、p15陽性表達(dá)情況相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 瘤組織及瘤旁組織SPARC、 p15表達(dá) 瘤組織及瘤旁組織SPARC陽性表達(dá)率分別為81.9%(68/83)、24.1%(20/83),P<0.05；p15陽性表達(dá)率分別為25.3%(21/83)、50.6%(42/83)，P<0.05。

2.2 不同臨床分級、存活時間者瘤組織SPARC、p15表達(dá)，隨著臨床分級升高，瘤組織SPARC表達(dá)升高(P<0.05)、p15表達(dá)下降(P<0.05)；存活不足5年者SPARC陽性表達(dá)率高于存活5年及以上者(P<0.05)，存活不足5年者p15陽性表達(dá)率低于存活5年及以上者(P<0.05)；見表1。Spearman等級相關(guān)分析結(jié)果顯示，瘤組織SPARC、p15表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.810，P<0.01)。

表1 不同臨床分級及存活時間者瘤組織SPARC、p15表達(dá)

3 討論

腦膠質(zhì)瘤在腦部呈浸潤性生長，通常與正常的腦組織沒有明確的界限，且不局限于一個腦葉[10]?；颊咴缙跊]有明顯癥狀，常規(guī)影像學(xué)、血常規(guī)等無創(chuàng)檢查手段不能確診。SPARC蛋白的編碼基因SPARC定位于染色體5q31～32，SPARC蛋白相對分子質(zhì)量32 kD,是一種富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白，是一種非結(jié)構(gòu)性糖蛋白，又稱為骨連接素或基膜40。SPARC蛋白廣泛分布于人體組織，通過于細(xì)胞外基質(zhì)不同蛋白的相互作用，參與人組織的生成及結(jié)構(gòu)維持、細(xì)胞增殖、細(xì)胞遷移等多種生理過程。SPARC與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。但是SPARC與腫瘤的關(guān)系存在異質(zhì)性，如其在乳腺癌、黑色素瘤組織中表達(dá)上調(diào)，而在胰腺癌組織中表達(dá)下調(diào)。這可能是由于不同腫瘤組織內(nèi)含有的蛋白水解酶對SPARC的剪切位點(diǎn)不同，產(chǎn)生的蛋白水解片段也不相同，不同的蛋白水解片段產(chǎn)生的生物學(xué)效果也不相同；另外不同腫瘤的受體表達(dá)情況不同，這也可能導(dǎo)致不同腫瘤對SPARC的反應(yīng)不同[12～15]。本研究結(jié)果顯示，膠質(zhì)瘤組織中SPARC 陽性表達(dá)率高于瘤旁組織，表明腦膠質(zhì)瘤組織中SPARC表達(dá)上調(diào)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，瘤組織SPARC表達(dá)隨臨床分期而升高，表明檢測腦膠質(zhì)瘤組織SPARC表達(dá)有助于判斷患者病情。本研究結(jié)果顯示，存活不足5年者SPARC陽性表達(dá)率高于存活5年及以上者。提示瘤組織SPARC表達(dá)有助于腦膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后判斷。腦膠質(zhì)瘤惡性程度較高，不同臨床分期的腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤治療方案和預(yù)后差距較大。對腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤的分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行改進(jìn)以獲得準(zhǔn)確的臨床分期和最恰當(dāng)?shù)闹委煼桨敢恢笔巧窠?jīng)外科努力的方向。本研究結(jié)果為神經(jīng)外科工作者今后的研究提供了方向。

p15基因又稱細(xì)胞周期依賴性激酶抑制基因，是一種和多種腫瘤相關(guān)的抑癌基因，定位于9p21，與編碼的p15蛋白和p16蛋白一起，通過結(jié)合CDK4或CDK6(p15/p16-CDK4/CDK6-Rb通路)抑制細(xì)胞增殖，抑制腫瘤[16～20]。本研究結(jié)果顯示，瘤組織p15陽性表達(dá)率低于瘤旁組織；提示瘤組織p15表達(dá)下降可能參與了腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生過程；臨床分期越晚，瘤組織p15表達(dá)越低。提示檢測瘤組織p15表達(dá)有助于判斷病情。本研究結(jié)果顯示，存活不足5年者p15陽性表達(dá)率低于存活5年及以上者。提示檢測瘤組織p15表達(dá)有助于膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后判斷。細(xì)胞周期調(diào)控主要通過p53通路和Rb通路。p15是Rb通路的重要組成部分。p15可以通過調(diào)控CDK4蛋白的表達(dá)影響Rb的磷酸化，進(jìn)而發(fā)揮細(xì)胞周期調(diào)控作用，p15表達(dá)缺失與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。本研究結(jié)果表明，腦膠質(zhì)瘤組織中p15蛋白表達(dá)缺失可能是腦膠質(zhì)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化為腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的重要原因，檢測腦膠質(zhì)瘤組織中p15蛋白表達(dá)可能助于判斷腦膠質(zhì)瘤患者的病情，并有助于醫(yī)師確定治療方案和評估預(yù)后。

SPARC、p15均參與了腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展過程。SPARC發(fā)揮作用可能通過調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞因子表達(dá)、局部血管生成、細(xì)胞外基質(zhì)合成、上皮細(xì)胞間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化等多種途徑，這些途徑可能與p15有交叉，故腦膠質(zhì)瘤組織中SPARC、p15表達(dá)存在相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示，腦膠質(zhì)瘤組織中SPARC、p15表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，驗(yàn)證了筆者的推測。

綜上所述，腦膠質(zhì)瘤組織中SPARC表達(dá)上調(diào)、p15表達(dá)下調(diào)。檢測腦膠質(zhì)瘤組織中SPARC、p15有助于判斷腦膠質(zhì)瘤患者的病情及評估預(yù)后。但是本研究樣本量較小，今后需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量以驗(yàn)證本研究結(jié)果的正確性。

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