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      在體DRG鈣成像技術(shù)在疼痛研究中的應(yīng)用

      2018-01-12 03:17:35王佳昕
      中國疼痛醫(yī)學(xué)雜志 2018年2期
      關(guān)鍵詞:傷害性指示劑神經(jīng)元

      軀體感覺涉及的細胞類型多并且環(huán)路復(fù)雜,因此,保證神經(jīng)元所處的生理環(huán)境,從群體水平觀察神經(jīng)元的活動非常重要。近年來,隨著敏感的基因編碼的鈣離子指示劑(GECIs)的發(fā)展,科學(xué)家們可以同時監(jiān)測群體細胞中瞬時的Ca2+變化,從而間接的觀察神經(jīng)元的電活動。本篇綜述主要介紹:在體DRG鈣成像(In vivo DRG calcium imaging)在疼痛外周機制研究中的應(yīng)用。GCaMP,屬于GECIs的一員,由綠色熒光蛋白(GFP)、鈣調(diào)蛋白(CaM)和肌球蛋白輕鏈激酶(M13)融合而成。當(dāng)Ca2+缺少時,熒光蛋白處于極弱的熒光狀態(tài)。當(dāng)Ca2+結(jié)合CaM時,CaM發(fā)生構(gòu)象變化,其鉸鏈區(qū)可以結(jié)合M13,致使GFP發(fā)出強烈的熒光。通過構(gòu)建Pirt-GCaMP3小鼠,使得GCaMP3在傷害性神經(jīng)元中表達,科學(xué)家可以利用在體DRG鈣成像的方法,深入研究疼痛傳遞的外周機制。使用這種方法,科學(xué)家們可以同時觀察大量的DRG神經(jīng)元中Ca2+的瞬時變化(>1600神經(jīng)元 / DRG神經(jīng)元,約總DRG神經(jīng)元的15%)。進一步研究發(fā)現(xiàn),損傷之后,神經(jīng)元之間通過縫隙連接的耦合(couping)度增加。這種耦合現(xiàn)象可以發(fā)生在不同直徑的神經(jīng)元之間,如大直徑神經(jīng)元(傳遞非傷害性信息)和小直徑神經(jīng)元(傳遞傷害性信息)之間。因此,非傷害性刺激在激活大直徑神經(jīng)元的同時,還可以激活小直徑神經(jīng)元,從而導(dǎo)致機械痛敏。另外,炎癥刺激可以明顯增加對機械刺激有反應(yīng)的DRG神經(jīng)元的數(shù)量。除了DRG以外,目前該技術(shù)還用于脊髓的研究。以GCaMP為新型鈣離子指示劑的在體DRG鈣成像技術(shù),在保證初級感覺神經(jīng)元系統(tǒng)生物完整性的狀態(tài)下,同時監(jiān)測大量的神經(jīng)元的活動,將幫助科學(xué)家們深入研究疼痛的機制。

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