梁新強(qiáng)，寧淑芳，劉海洲，王海燕，唐亞梅，張力圖，崔 英，利基林*

（廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，1.實(shí)驗(yàn)研究部；2.教務(wù)科，廣西 南寧 530021）

原發(fā)性肝癌（primary liver cancer，PLC）是我國甚至全世界最常見的惡性腫瘤之一，據(jù)我國2010年腫瘤登記資料統(tǒng)計(jì)，廣西肝癌的發(fā)病率和死亡率分別為43.76/10萬和38.52/10萬，均高于全國的28.71/10萬和26.04/10萬水平[1]，肝癌的發(fā)生是多因素、多步驟的過程，其最主要的生物危險(xiǎn)因素是乙型肝炎病毒（HBV）感染[2-3]。在廣西肝癌高發(fā)區(qū)，我們應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)715例人員外周血淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)水平和NK細(xì)胞活性，同時(shí)以100例健康人作為對(duì)照，以了解高發(fā)區(qū)人群的免疫狀態(tài)，對(duì)肝癌的防治提供參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

715例肝癌高發(fā)區(qū)人員為廣西扶綏縣城鄉(xiāng)居民，男459例，女256例，28～61歲，平均45.1±8.2歲，其中有HBV感染者574例，無HBV感染者141例。100例健康對(duì)照者為同期獻(xiàn)血人員，男61例，女39例，25～55歲，平均42.5±7.9歲。組間性別構(gòu)成比和年齡，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 儀器與試劑

流式細(xì)胞儀為Epics XL型，COULTERQ-PREP型自動(dòng)溶血儀，ABC溶血素，鼠抗人單克隆抗體CD 45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD（16+56）/CD19/CD3，上述儀器與試劑均為美國Beckman coulter公司生產(chǎn)；血清HBsAg檢測(cè)使用上?？迫A生物有限公司生產(chǎn)的試劑盒。

1.3 方法

分別于清晨空腹抽取肘靜脈血5 mL，其中2.5 mL置于含乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na2）的抗凝管中，另外2.5 mL置于普通生化管中。從抗凝管中吸取100 μl全血分別與熒光素標(biāo)記的鼠抗人單克隆抗體CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD（16+56）/CD 19/CD3 20μl混勻、同型對(duì)照IgG各20 μL混勻，避光反應(yīng)（室溫）30 min，溶血后1 h內(nèi)上機(jī)完成檢測(cè)。上機(jī)后圈出擬測(cè)定的淋巴細(xì)胞群，每次捕獲取10000個(gè)細(xì)胞，雙參數(shù)分析淋巴細(xì)胞表面標(biāo)記，計(jì)算出CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK和CD3+CD19+細(xì)胞的百分比含量；分離出生化管中的血清，用于檢測(cè)HBsAg，嚴(yán)格按說明書操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，計(jì)量資料以“±s”表示，采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 肝癌高發(fā)區(qū)人員外周血淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平和NK細(xì)胞活性與健康人比較

與健康人比較，高發(fā)區(qū)人員外周血CD3+/CD8+升高，CD3+/CD19+下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；CD3+、CD3+/CD4+和NK細(xì)胞活性，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 肝癌高發(fā)區(qū)人員外周血淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平和NK細(xì)胞活性與健康人比較（±s，%）

表1 肝癌高發(fā)區(qū)人員外周血淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平和NK細(xì)胞活性與健康人比較（±s，%）

組別nCD3+CD3+/CD4+CD3+/CD8+NKCD3+/CD19+高發(fā)區(qū)人員71569.31±11.8935.11±10.2329.28±11.6015.70±8.303.02±2.68健康人對(duì)照10069.63±10.5335.70±7.2924.69±6.0616.97±5.2213.62±3.90 t 0.25550.55713.8821.4894.967 P 0.79840.57760.0010.13690.0000

2.2 肝癌高發(fā)區(qū)人員有無HBV感染者外周血淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)水平和NK細(xì)胞活性比較

在高發(fā)區(qū)人群中，有感染乙型肝炎者和無感染乙型肝炎者比較，各項(xiàng)指標(biāo)的，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 肝癌高發(fā)區(qū)人員有無HBV感染者外周血淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)水平和NK細(xì)胞活性比較（x±s，%）

3 討 論

肝癌的發(fā)生是多因素、多基因、多階段作用的結(jié)果，至今病因尚未完全確認(rèn)。有研究[2-3]表明，HBV、黃曲霉毒素B1攝入和飲用水源污染等是肝癌的主要危險(xiǎn)因素，HBV感染人員患肝癌的危險(xiǎn)性是陰性人員的25～37倍，肝癌高發(fā)區(qū)人群HBsAg陽性率高達(dá)17.83%，遠(yuǎn)高于全國9.09%的平均水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

乙型肝炎免疫應(yīng)答的主要途徑是以CD8淋巴細(xì)胞為主導(dǎo)的細(xì)胞免疫，T細(xì)胞清除實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，CD8 T細(xì)胞是與病毒清除直接有關(guān)的細(xì)胞亞群，在清除病毒過程中起到關(guān)鍵的作用，慢性乙型肝炎患者CD3+/CD8+T細(xì)胞百分率顯著上升，與肝炎病毒的復(fù)制密切相關(guān)。本研究顯示，肝癌高發(fā)區(qū)人群外周血CD3+/CD8+升高，CD3+/CD19+下降，表面機(jī)體感染HBV后，由于病毒復(fù)制，從而導(dǎo)致CD3+/CD8+T細(xì)胞百分率上升，而對(duì)血液中HBV的殺滅，又使得CD3+/CD19+下降。但CD3+/CD8+升高和CD3+/CD19+下降卻與機(jī)體是否感染HBV無關(guān)，對(duì)非HBV感染者如何解析？是什么因素導(dǎo)致該地區(qū)人群外周血普遍CD3+/CD8+升高，值得我們進(jìn)一步研究。

[1] 左婷婷,鄭榮壽,曾紅梅,等.中國肝癌發(fā)病狀況與趨勢(shì)分析[J].中華腫瘤雜志,2015,37(9):691-696.

[2] 高 蕊,劉中景,陳 菲,等.乙型肝炎相關(guān)性原發(fā)性肝癌相關(guān)危險(xiǎn)因素的Logistic回歸分析[J].臨床肝膽病雜志,2014,30(4):370-372.

[3] 薛萬江,馮 盈,李 鵬,等.肝細(xì)胞癌組織中Ras相關(guān)結(jié)構(gòu)域家族1A基因甲基化與環(huán)境因素的關(guān)系[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2012,29(4):650-652.