任志明 詹萍萍 母昌考① 李榮華 宋微微 楊春雷 王春琳

(1. 寧波大學(xué)應(yīng)用海洋生物學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 寧波 315211; 2. 浙江海洋高效健康養(yǎng)殖協(xié)同創(chuàng)新中心 寧波 315211;3. 象山鶴浦鎮(zhèn)人民政府海洋與漁業(yè)辦公室 象山 315733)

自工業(yè)革命以來, 人類大量燃燒化石燃料所產(chǎn)生的CO2排放至大氣中, 大氣中約1/3的CO2被海洋所溶解吸收。過量溶解的CO2破壞了海水原有的酸堿平衡, 導(dǎo)致海水酸度增加, 這種現(xiàn)象被稱為海洋酸化(ocean acidification, OA) (Caldeira et al, 2003; Doney et al, 2009)。自從2003年提出這一問題以來, 已經(jīng)引起世界各國的廣泛關(guān)注, 國內(nèi)外科研工作者已經(jīng)開展了廣泛而深入的研究(賀仕昌等, 2014; 趙信國等,2015)。

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)作為我國沿海重要的水產(chǎn)甲殼類動(dòng)物, 具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。海洋酸化給海洋環(huán)境帶來的影響主要在于降低海水 pH,擾亂海水碳酸平衡, 降低碳酸鈣的飽和度等(Feely et al, 2004; 劉再華等, 2005)。對(duì)于三疣梭子蟹來說, 其甲殼的主要組成成分為甲殼素和碳酸鈣(Roer et al,1984)。三疣梭子蟹一生要經(jīng)歷多次蛻殼, 每一次蛻殼都要經(jīng)歷甲殼的生物鈣化過程, 因此, 海洋酸化可能會(huì)對(duì)三疣梭子蟹的甲殼結(jié)構(gòu)和組成成分產(chǎn)生影響。本研究通過甲殼掃描電鏡觀察結(jié)合甲殼素及鈣鎂元素含量測(cè)定方法, 探討了海洋酸化對(duì)三疣梭子蟹幼蟹甲殼結(jié)構(gòu)和組成成分的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

三疣梭子蟹幼蟹取自寧波鑫億鮮活水產(chǎn)有限公司, 其發(fā)育階段為幼蟹Ⅴ期, C5。

各組幼蟹在實(shí)驗(yàn)條件下自行完成蛻殼, 并待各組蛻殼為 C6期的幼蟹甲殼完全硬化后(蛻殼后 48h),解剖獲取各組幼蟹背甲。每組至少收集3個(gè)背甲。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

增氧泵為惠科H8型可充電增氧泵。CO2加富器為青島艾科寶生物科技有限公司生產(chǎn)A001型CO2加富器。掃描電子顯微鏡為日立S-3400N型。

實(shí)驗(yàn)中使用的氫氧化鈉、鹽酸、碳酸鈉、無水乙醇、叔丁醇、戊二醛、雙氧水等試劑純度均為分析純(購自國藥試劑公司)。其中, 所使用的戊二醛為3%的海水稀釋溶液。

1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

本實(shí)驗(yàn)設(shè)置一個(gè)對(duì)照組, 兩個(gè)酸化脅迫組。每組設(shè)置3個(gè)平行。對(duì)照組使用的海水為正常沙濾、漂白粉加曝氣處理后充分靜置的潔凈海水, 通有自然新鮮空氣。實(shí)驗(yàn)組分別為OA1組和OA2組。OA1組所用初始海水與對(duì)照組相同, 通有經(jīng) CO2加富器混合高濃度CO2與空氣后穩(wěn)定輸出的混合氣體, CO2的體積分?jǐn)?shù)為 7.50×10–4。OA2組通入的混合氣體 CO2的體積分?jǐn)?shù)為 1.5×10–3。將養(yǎng)殖池中健康的 C5期幼蟹收集后, 在潔凈海水中靜止培養(yǎng) 24h, 然后將幼蟹隨機(jī)分配在對(duì)照組和OA1、OA2實(shí)驗(yàn)組中, 每組共放置18只, 連續(xù)酸化脅迫一個(gè)蛻殼周期后取樣。每日傍晚投喂新鮮雜魚肉, 并及時(shí)清理殘餌。

1.4 實(shí)驗(yàn)裝置

本研究所采用的實(shí)驗(yàn)裝置為自行設(shè)計(jì)的一套實(shí)驗(yàn)室模擬海洋酸化系統(tǒng)(任志明等, 2015), 由實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)箱系統(tǒng), CO2供氣系統(tǒng), 供水系統(tǒng), 水體凈化系統(tǒng)和水體加熱裝置組成。對(duì)照組系統(tǒng)與實(shí)驗(yàn)組系統(tǒng)的差別僅在于供氣系統(tǒng)所通氣體的不同。該酸化實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)可實(shí)現(xiàn)長時(shí)間穩(wěn)定運(yùn)行, 使實(shí)驗(yàn)所需的水體狀態(tài)維持穩(wěn)定, 并可防止因?qū)嶒?yàn)個(gè)體死亡造成水體惡化, 影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

此外, 使用雷磁PHBJ-260型便攜式pH計(jì)監(jiān)測(cè)水體pH。使用FC-100型水中二氧化碳測(cè)定儀測(cè)定水中溶解CO2的濃度。

1.5 幼蟹甲殼表面及斷面結(jié)構(gòu)掃描電鏡觀察

取蟹殼背甲鰓區(qū)部位約0.25cm2大小較平整的甲殼, 按照Chen等(2008)的方法進(jìn)行處理, 然后在日立S-3400N型掃描電子顯微鏡上觀察, 記錄甲殼表面及斷面結(jié)構(gòu)的變化情況。

1.6 幼蟹甲殼部分組成成分的測(cè)定

1.6.1 幼蟹甲殼中甲殼素含量的測(cè)定 取對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組甲殼樣品, 分別用純水清洗3次, 放入鼓風(fēng)干燥箱中 70℃充分干燥后電子天平稱重并作記錄。用手術(shù)剪將干燥后的甲殼破碎成小塊后, 放入干燥器中儲(chǔ)存。按照李婷等人甲殼素提取制備的方法提取各組樣品甲殼素(李婷等, 2014)。將獲得的對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的甲殼素成品分別置于電子天平上稱重。

甲殼素含量的計(jì)算公式如下: 甲殼素含量=m/M×100%, 其中m為最終獲得的甲殼素質(zhì)量(mg); M為甲殼素提取前干燥甲殼的質(zhì)量(mg)。

1.6.2 幼蟹甲殼中鈣、鎂元素含量的測(cè)定 甲殼中鈣、鎂元素含量由青島科標(biāo)檢測(cè)研究院有限公司測(cè)定完成。采用電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(Inductively coupled plasma mass spectrometry, ICP-MS 7700, 美國安捷倫公司)進(jìn)行元素含量測(cè)定。

1.7 數(shù)據(jù)處理與分析

借助Photoshop等圖像處理軟件對(duì)所采集的幼蟹甲殼結(jié)構(gòu)照片進(jìn)行分析處理, 包括甲殼厚度及結(jié)構(gòu)等。運(yùn)用Excel對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組甲殼素含量及鈣元素、鎂元素含量進(jìn)行均值處理并比較作圖。運(yùn)用SPSS 19.0進(jìn)行組間單因素方差(One-way ANOVA)分析酸化組和對(duì)照組間差異, P*＜0.05表示差異顯著,P**＜0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 酸化水體pH及水中CO2濃度的變化

自然海水經(jīng)人工模擬酸化處理后, 水體pH和水中CO2濃度變化情況如表1所示。

表1 酸化實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組水體pH和水中溶解CO2濃度變化情況Tab.1 The change of pH and the concentration of CO2 dissolved in seawater in control group and OA groups

實(shí)驗(yàn)水體經(jīng)含有一定濃度 CO2的混合氣體持續(xù)充分曝氣處理后, 酸化組水體 pH明顯下降: 正常海水pH為8.13±0.02, OA1組pH下降為7.98±0.02, OA2組 pH下降為7.75±0.03。水中CO2濃度也明顯升高,由對(duì)照組(26.6±1.2)×10–6, 上升到 OA1 組(45.2±3.6)×10–6, 再到 OA2 組(79.5±4.1)×10–6。

2.2 甲殼表面及斷面結(jié)構(gòu)掃描電鏡觀察結(jié)果

經(jīng)掃描電子顯微鏡觀察并獲得甲殼外表面結(jié)構(gòu)圖片, 對(duì)比分析如圖1所示, 在甲殼表面的微刺有一定的排列規(guī)律, 總體較為整齊。微刺的組合方式也有多種形式: (a) 單個(gè)獨(dú)立微刺, (b) 2個(gè)微刺聚集, (c) 3個(gè)微刺聚集, (d) 4個(gè)微刺聚集。對(duì)照組中, 單個(gè)微刺占(26.97±0.32)%, 2 個(gè)微刺聚集占(33.71±0.24)%,3—4個(gè)微刺聚集占(39.32±0.16)%。OA1組單個(gè)微刺占(77.42±0.22)%, 2個(gè)微刺聚集占(19.35±0.13)%, 3個(gè)微刺聚集占(3.32±0.06)%, 未發(fā)現(xiàn)4個(gè)微刺聚集。OA2組單個(gè)微刺占(88.81±0.31)%, 2個(gè)微刺聚集占(11.19±0.16)%, 未發(fā)現(xiàn)3或4個(gè)微刺聚集。

圖1 甲殼外表面結(jié)構(gòu)對(duì)比Fig.1 The comparison in structure of the carapacial external surface

掃描電子顯微鏡觀察結(jié)果表明, 三疣梭子蟹具有甲殼動(dòng)物典型的甲殼分層結(jié)構(gòu)(圖 2): 上表皮、外表皮和內(nèi)表皮(Roer et al, 1984)。掃描電子顯微鏡下對(duì)甲殼厚度進(jìn)行了測(cè)量(圖3和圖4), 對(duì)照組甲殼的厚度為90.20±4.85μm, OA1 組甲殼厚度為84.53±13.71μm, OA2組甲殼厚度為61.94±13.43μm。OA1組甲殼厚度較對(duì)照組有所降低, 但無顯著性差異(P=0.453)。OA2組甲殼的厚度極顯著低于對(duì)照組(P=0.000**)和OA1組(P=0.000**)。結(jié)果說明在酸化海水的影響下, 三疣梭子蟹甲殼的厚度變薄,且甲殼厚度隨著酸化程度的加重逐漸變薄。

通過圖5比較對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組甲殼各殼層的厚度, 發(fā)現(xiàn)OA1組與對(duì)照組上表皮層厚度無顯著性差異, OA2組相比對(duì)照組上表皮層厚度顯著降低(圖5a)。OA1組與對(duì)照組外表皮層厚度無顯著性差異, OA2組相比對(duì)照組外表皮層厚度極顯著降低(圖5b)。同時(shí), OA1組相比對(duì)照組內(nèi)表皮層厚度顯著降低, OA2組相比對(duì)照組內(nèi)表皮層厚度極顯著降低(圖 5c)。結(jié)果說明在高酸化程度的海水影響下, 三疣梭子蟹幼蟹甲殼上表皮層、外表皮層和內(nèi)表皮層厚度都有所降低, 其中以對(duì)內(nèi)表皮層的影響最為顯著, 其次是外表皮層, 影響最小的是上表皮層。

圖2 甲殼斷面結(jié)構(gòu)圖Fig.2 The morphology of cross-section of the carapace

圖3 甲殼斷面對(duì)比Fig.3 Comparison in micro-morphology of the carapace cross-section

圖4 甲殼厚度對(duì)比Fig.4 Comparison in thickness of the carapace

圖5 甲殼不同殼層厚度對(duì)比Fig.5 Comparison in thickness of different layers of the carapace注: a示組間甲殼上表皮層厚度比較結(jié)果; b示組間甲殼外表皮層厚度比較結(jié)果; c示組間甲殼內(nèi)表皮層厚度比較結(jié)果

2.3 幼蟹甲殼中甲殼素含量測(cè)定結(jié)果

通過圖6甲殼素含量對(duì)比圖進(jìn)行分析, 可以看出在海洋酸化的影響下, 兩個(gè)酸化實(shí)驗(yàn)組(OA1和OA2)幼蟹甲殼中甲殼素含量均極顯著高于對(duì)照組(P=0.000**), 而OA1與OA2之間無顯著性差異(P=0.248)。

圖6 甲殼素含量對(duì)比Fig.6 Comparison in chitin content of the carapace

2.4 幼蟹甲殼鈣鎂元素含量測(cè)定結(jié)果

由圖7和圖8可以看出, 在OA2組中, 幼蟹甲殼鈣元素和鎂元素的含量均相對(duì)于對(duì)照組有所上升,但差異不顯著(P＞0.05), OA1組均無明顯變化(P＞0.05)。兩個(gè)酸化組之間無顯著性差異(P＞0.05)。由圖9可以看出,對(duì)照組的鈣鎂比為14.12±0.13, OA1組和OA2組的鈣鎂比分別為13.88±0.85、13.77±1.00, 酸化組幼蟹甲殼鈣鎂比與對(duì)照組無顯著性差異(P＞0.05), 兩個(gè)酸化組之間也無顯著性差異(P＞0.05)。

3 討論

圖7 甲殼鈣元素相對(duì)含量對(duì)比Fig.7 Comparison in calcium content of the carapace

圖8 甲殼鎂元素相對(duì)含量對(duì)比Fig.8 Comparison in magnesium content of the carapace

圖9 甲殼鈣鎂比對(duì)比Fig.9 Comparison in Ca/Mg ratio of the carapace

在已有報(bào)道中, 蟹類甲殼某些部位外表皮表面通常分布有微小刺狀突起, 一般稱之為微刺, 也有認(rèn)為是剛毛(Watling, 1989; Garm, 2004)。三疣梭子蟹也不例外, 在背甲上表皮的外側(cè)有密集的微刺分布(圖1), 且存在一定排列規(guī)律。在酸化海水的影響下, 對(duì)照組與海洋酸化組微刺排列方式出現(xiàn)一定差別: 對(duì)照組中, 微刺的排列組合方式中除了單個(gè)微刺(26.97±0.32)%以外, 主要以2個(gè)或3個(gè)微刺組合的方式, 占約 72%以上, 還發(fā)現(xiàn)少數(shù) 4個(gè)微刺聚集的現(xiàn)象。OA1組主要為單個(gè)微刺的形式存在(77.42±0.22)%,還有少量2個(gè)或3個(gè)微刺聚集, 未發(fā)現(xiàn)4個(gè)微刺聚集。而OA2組中微刺主要以單個(gè)微刺的形式存在(88.81±0.31)%, 少量為 2個(gè)微刺組合的方式 (11.19±0.16)%,未發(fā)現(xiàn)3或4個(gè)微刺聚集。海洋酸化顯著地影響了甲殼外表面微刺的排列方式, 酸化使微刺的排列趨于簡單化。通常認(rèn)為微刺不具有化學(xué)感知和機(jī)械刺激性感知的功能, 而是起結(jié)構(gòu)支撐和防御的功能(Watling,1989; Garm, 2004), 因此海洋酸化可能會(huì)減弱三疣梭子蟹甲殼結(jié)構(gòu)強(qiáng)度和穩(wěn)定性, 甚至減弱對(duì)敵害生物的防御能力。

三疣梭子蟹甲殼結(jié)構(gòu)主要分為: 上表皮、外表皮和內(nèi)表皮(圖 2)。內(nèi)表皮層厚度最大, 其次是外表皮,上表皮的厚度最小。甲殼主要由甲殼素、碳酸鈣和蛋白質(zhì)等物質(zhì)組成, 還由蛋白多糖、脂質(zhì)及其他無機(jī)礦物等輔助組成(Nagasawa, 2012)。其中, 在內(nèi)表皮和外表皮層, 碳酸鈣主要以方解石晶體的形式結(jié)合在甲殼素纖維周邊, 而在上表皮層碳酸鈣則主要是球形方解石顆粒以脂蛋白基質(zhì)包裹的形式存在(Roer et al,1984)。在外表皮和內(nèi)表皮層, 甲殼素-蛋白質(zhì)纖維則以螺旋夾板的形式多層堆積, 再結(jié)合有方解石晶體形式的碳酸鈣(Chen et al, 2008), 從斷面觀察, 呈規(guī)則片狀結(jié)構(gòu)分布(Roer et al, 1984)。

本研究中, 在酸化海水的影響下, 高酸化程度OA2組三疣梭子蟹幼蟹的甲殼厚度明顯變薄, 且與對(duì)照組存在顯著性差異, 中等酸化程度 OA1組甲殼的厚度有所降低, 但無顯著性差異(圖 3與圖 4)。Taylor等(2014)的研究結(jié)果表明海洋酸化對(duì)加利福尼亞巖蝦(Lysmata californica)的甲殼總厚度沒有顯著影響。由于物種差異, 蝦類甲殼要比蟹類甲殼薄很多,碳酸鈣等無機(jī)礦物含量更少, 甲殼素等有機(jī)物的相對(duì)含量也更高, 這與其快速游動(dòng)以躲避敵害生物的特性有關(guān), 因此其甲殼更為輕便(Bo?elmann et al,2007)。海洋酸化對(duì)蝦類與蟹類甲殼的影響存在差異,在海洋酸化影響下, 蝦類甲殼不易變薄, 而蟹類的甲殼在酸化脅迫下可能會(huì)使碳酸鈣沉積量、碳酸鈣晶體構(gòu)型、甲殼素纖維的排列方式等發(fā)生變化, 最終導(dǎo)致甲殼的厚度變薄。

在本研究中, 通過比較分析對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組甲殼不同殼層的厚度, 結(jié)果表明高酸化程度 OA2組酸化海水會(huì)導(dǎo)致三疣梭子蟹幼蟹甲殼上表皮、外表皮和內(nèi)表皮厚度的顯著性降低。中等酸化程度 OA1組酸化海水僅顯著降低了內(nèi)表皮層的厚度, 而對(duì)上表皮和外表皮沒有顯著性影響。如前面甲殼殼層組成部分的討論, 上表皮主要是由脂蛋白包裹的球形方解石顆粒組成(Roer et al, 1984), 且相對(duì)致密, 此種碳酸鈣的存在形式可能不易受到酸化的影響。而結(jié)構(gòu)相對(duì)疏松的內(nèi)表皮層和外表皮層, 由于甲殼素纖維的排列呈疏松的蜂窩狀(Raabe et al, 2006), 且碳酸鈣呈堆積方解石晶體的形式存在(Dillaman et al, 2005), 導(dǎo)致海洋酸化對(duì)其影響更為顯著。Taylor等(2014)研究表明海洋酸化對(duì)加利福尼亞蝦各殼層厚度沒有顯著影響, 這可能同樣與物種差異有關(guān)。

甲殼素作為甲殼動(dòng)物甲殼的主要組成成分, 起到了結(jié)構(gòu)支撐的重要作用, 同時(shí)蛋白質(zhì)、碳酸鈣晶體等物質(zhì)也有規(guī)律的附著在甲殼素纖維的周邊, 共同使甲殼表現(xiàn)出一定特有的物理和生理特性(Roer et al,1984)。在目前已有海洋酸化對(duì)甲殼動(dòng)物的影響研究報(bào)道中, 很少涉及甲殼素相對(duì)含量變化的研究。在本研究中, 海洋酸化導(dǎo)致幼蟹甲殼中甲殼素相對(duì)含量顯著升高(圖6), 而Mustafa等(2015)發(fā)現(xiàn)海洋酸化會(huì)顯著降低凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)甲殼中甲殼素的含量。同時(shí), Mustafa等(2015)認(rèn)為是海洋酸化導(dǎo)致蝦體酸中毒, 顯著干擾了蝦體內(nèi)的甲殼素合成酶、幾丁質(zhì)水解酶及激素等物質(zhì)的平衡, 在綜合因素的影響下, 甲殼素含量降低。由于物種差異, 蟹類要比蝦類具有更強(qiáng)的內(nèi)環(huán)境調(diào)節(jié)能力(Small et al,2010), 因此, 三疣梭子蟹在海洋酸化的影響下, 甲殼素含量的升高原因還需要進(jìn)一步研究, 可通過對(duì)甲殼素合成酶及幾丁質(zhì)水解酶基因表達(dá)的變化方面進(jìn)行研究。

在海洋酸化的影響下, OA2組中甲殼鈣元素和鎂元素含量較對(duì)照組均有所上升, 但差異不顯著。在OA1組中, 鈣、鎂元素含量均未出現(xiàn)明顯變化。兩個(gè)酸化組甲殼鈣鎂比均無明顯變化。Taylor等(2014)研究發(fā)現(xiàn), 在酸化的影響下, 加利福尼亞巖蝦甲殼中鈣元素含量顯著升高, 而鎂元素含量有所上升, 但無顯著性差異, 鈣鎂比則顯著升高。Long等(2013b)研究了海洋酸化對(duì)堪察加擬石蟹(Paralithodes camtschaticus)和拜氏雪蟹(Chionoecetes bairdi)生物鈣化的影響。結(jié)果表明海洋酸化使堪察加擬石蟹幼體鈣元素含量升高, 但無顯著性差異; 而海洋酸化顯著降低了拜氏雪蟹幼蟹甲殼的鈣元素含量。此外, 在Long等(2013a)更早前對(duì)堪察加擬石蟹雌性幼蟹甲殼的研究中, 發(fā)現(xiàn)在海洋酸化條件下新形成的甲殼中, 鈣元素、鎂元素含量低于實(shí)驗(yàn)初始時(shí)甲殼中的鈣鎂元素含量, 但差異不顯著, 而鈣鎂比則顯著降低(Long et al,2013a)。上述報(bào)道中, 結(jié)果都表明海洋酸化會(huì)致使海洋甲殼動(dòng)物甲殼中鈣、鎂元素含量及鈣鎂比在不同物種中出現(xiàn)不同程度的上升或下降的變化, 存在明顯的物種差異。Ries(2011)認(rèn)為酸化海水中, 過量溶解的 CO2與蟹類內(nèi)在生物鈣化的過程相作用, 共同導(dǎo)致了在酸化海水環(huán)境中形成的甲殼鈣元素含量升高。因?yàn)樾奉愒谏镡}化過程中, 會(huì)提高鈣化位置的 pH,這就致使碳酸鈣的大量沉積, 鈣化率提高(Small et al,2010)。對(duì)于這一觀點(diǎn), Pane等(2007)的研究表明許多蟹類(如: 首黃道蟹 Metacarcinus magister)可以比其他海洋鈣化生物更好地調(diào)節(jié)體內(nèi) pH。同時(shí), 甲殼中高鈣元素沉積與生物體中鈣化有關(guān)的基因表達(dá)有一定關(guān)聯(lián)(Todgham et al, 2009)。

鈣元素在甲殼中主要以碳酸鈣的形式存在, 而鎂元素在甲殼中的存在形式及作用還不完全明確,有研究認(rèn)為鎂元素是以碳酸鎂的形式作為鈣元素的替代物存在于甲殼中(Andersson et al, 2008)。目前,普遍認(rèn)為鈣鎂比對(duì)甲殼的強(qiáng)度存在比例對(duì)應(yīng)的關(guān)系,比如低鈣鎂比會(huì)使甲殼的強(qiáng)度增加(Magdans et al,2004)。而本研究中的鈣鎂比基本沒有變化, 這與酸化對(duì)藍(lán)蟹(Callinectes sapidus)、美國龍蝦(Homarus americanus)等甲殼類生物影響的研究中鈣鎂比無明顯變化的結(jié)果相近(Ries, 2011)。

4 結(jié)論

綜上所述, 本研究發(fā)現(xiàn)海洋酸化對(duì)三疣梭子蟹幼蟹的甲殼結(jié)構(gòu)和部分組成成分具有一定影響, 具體表現(xiàn)在: (1) 在海洋酸化的影響下, 三疣梭子蟹幼蟹甲殼上表皮的外表面微刺排列趨于簡單化, 對(duì)甲殼結(jié)構(gòu)強(qiáng)度和抵御敵害方面可能會(huì)產(chǎn)生一定消極影響; (2) 在海洋酸化的影響下, 三疣梭子蟹幼蟹的甲殼厚度變薄, 并且有隨海洋酸化程度的加重甲殼厚度變得更薄的趨勢(shì); (3) 在海洋酸化的影響下, 三疣梭子蟹幼蟹甲殼中甲殼素含量顯著上升, 可能與甲殼素合成酶、幾丁質(zhì)水解酶及激素的合成水平變化有關(guān); (4) 海洋酸化對(duì)三疣梭子蟹幼蟹的甲殼鈣鎂元素含量的影響較小。

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