山玉蘭花中辛夷脂素高效液相色譜含量測(cè)定方法的建立與優(yōu)化

廖汝丹+周青梅

摘要：目的建立系統(tǒng)、科學(xué)的山玉蘭花中辛夷脂素的提取和含量測(cè)定的方法，為科學(xué)評(píng)價(jià)和有效控制山玉蘭花的質(zhì)量提供了可靠的方法。方法采用高效液相色譜法，色譜柱為Agilent ZORBAX C18柱（5μm，250 × 4.6 mm），流動(dòng)相為甲醇 -水（60∶40），流速為 1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為 278 nm，柱溫為30℃。 結(jié)果山玉蘭花中辛夷脂素的峰得到有效的分離，HPLC 檢測(cè)條件、方法的專屬性、線性、重復(fù)性、精密度、穩(wěn)定性、回收率良好，該方法可以用于辛夷脂素的含量測(cè)定。結(jié)論該方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速，適用于山玉蘭花中辛夷脂素的含量分析，可為山玉蘭花藥材及其制劑的質(zhì)量控制提供參考。

關(guān)鍵詞：山玉蘭花；辛夷脂素；高效液相色譜法

中圖分類號(hào)：R284文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B文章編號(hào)：1007-2349（2018）01-0077-02

山玉蘭花為木蘭科植物山玉蘭（Magnolia delavayi Franch）.的干燥花及花蕾，為彝族地區(qū)習(xí)用藥材，微苦、澀，溫。歸胃、肺經(jīng)。理氣和胃，行氣消食，止咳化痰。用于脘腹脹滿，大便秘結(jié)，咳嗽痰多。目前《中國(guó)藥典》尚未收載山玉蘭花的含量測(cè)定方法，關(guān)于測(cè)定含量的文獻(xiàn)報(bào)道較少，本研究擬采用高效液相色譜法，測(cè)定山玉蘭花中辛夷脂素的含量，并對(duì)分析方法進(jìn)行優(yōu)化，為山玉蘭花藥材及其制劑的質(zhì)量控制方法研究提供參考。

1材料

安捷倫1100 高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent 公司 真空在線脫氣機(jī)、四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、UV 檢測(cè)器），賽多利斯BSA224S-CW 電子天平，賽多利斯BP211D 電子天平，KQ-500E 型超聲波清洗器，YS-04A 小型高效粉碎機(jī)，Millipore 溶劑過(guò)濾系統(tǒng)。

辛夷脂素（由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，批號(hào)111561-201403，供含量測(cè)定用），甲醇為色譜純，水為超純

水，其余試劑均為分析純。

山玉蘭花藥材購(gòu)買于云南紅河州石屏縣，植物標(biāo)本經(jīng)中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所鑒定為木蘭科植物山玉蘭Magnolia delavayi Franch.的干燥花及花蕾。

2方法與結(jié)果

2.1高效液相色譜條件色譜柱為Agilent ZORBAX C18柱（5μm，250 × 4.6 mm），流動(dòng)相為甲醇-水（60∶40），流速1.0 mL·min-1，柱溫為30℃，進(jìn)樣量20 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)278 nm，理論塔板數(shù)按辛夷脂素峰計(jì)算不低于 4 000，在此條件下各組分得到良好分離，液相色譜圖見(jiàn)圖 1、圖2 。

2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取辛夷脂素對(duì)照品10.00 mg，置 25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，即得。

2.3供試品溶液的制備取山玉蘭花藥材粗粉約 0.25 g，精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加甲醇 25 mL，稱重，浸泡過(guò)夜后超聲提取 30 min，放置至室溫，再稱重，并用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，再過(guò) 0.45 μm 微孔濾膜，取續(xù)濾液即得。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取辛夷脂素對(duì)照品溶液（0.4 mg·mL-1）稀釋成濃度為 0.02、0.04、0.08、0.16、0.32 mg·mL-1的系列對(duì)照品溶液。按上述色譜條件，分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，以色譜峰面積 A 為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度 C 為橫坐標(biāo)，計(jì)算得辛夷脂素的線性回歸方程：A=10.787 C+25.274，r=0.999 7，結(jié)果表明辛夷脂素在 20 ～320 μg·mL-1進(jìn)樣濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取辛夷脂素對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣 20 μL，重復(fù)進(jìn)樣 6 次，依據(jù)上述色譜條件進(jìn)樣并計(jì)算。結(jié)果表明：辛夷脂素峰面積平均值為3975.53500，RSD 為 0.12%，表明精密度良好。

2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密稱取山玉蘭花粗粉 6 份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按樣品測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定并計(jì)算。測(cè)得辛夷脂素的平均含量為 14.32 mg/g，RSD 為0.46%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)在上述色譜條件下，精密吸取同一供試品溶液6 份，在室溫下分別于 0、2、4、6、8、12、24 h 進(jìn)樣 20 μL，測(cè)定并計(jì)算，結(jié)果測(cè)得，辛夷脂素含量的 RSD 為 0.89%，表明山玉蘭花供試品溶液在 24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.8加樣回收率實(shí)驗(yàn)取已測(cè)定含量的山玉蘭花樣品 0.1 g 共 6 份，分別精密加入辛夷脂素對(duì)照品溶液（1.403 mg/mL）1 mL，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下測(cè)定，結(jié)果辛夷脂素的平均加樣回收率為 93.75%，RSD 為1.24%，表明本實(shí)驗(yàn)供試品溶液制備方法具有較好的回收率結(jié)果見(jiàn)表1。

2.9樣品含量測(cè)定按照“2.3”項(xiàng)下方法制備山玉蘭花供試品溶液3份，分別進(jìn)樣 20 μL，按照上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中辛夷脂素的含量。結(jié)果見(jiàn)表 2。

3討論

山玉蘭花的化學(xué)成分復(fù)雜，而針對(duì)山玉蘭花的化學(xué)成分研究未見(jiàn)報(bào)道，我們從該科植物的成分進(jìn)行研究，該科植物主要含有木脂素、倍半萜、二萜、酚苷類化合物，經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)研究確定山玉蘭花中含辛夷脂素成分。本實(shí)驗(yàn)建立并優(yōu)化了 HPLC 法測(cè)定山玉蘭花中辛夷脂素的含量，其樣品制備方法簡(jiǎn)單，分離效果理想，分析快速準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，精密度高，重現(xiàn)性較好，因此本方法可為山玉蘭花藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定或提高提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。[1-4]

參考文獻(xiàn)：

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).《中國(guó)藥典》2010年版 一部 北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：169.

[2]于宗淵，張希林，劉青，等.HPLC法測(cè)定望春花花蕾中辛夷脂素的含量[J].中藥材；2005：10.

[3]曹緯國(guó)，陶燕鐸，顏學(xué)偉，等.辛夷中辛夷脂素與木蘭脂素高效液相色譜含量測(cè)定方法的建立與優(yōu)化[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2014，（7）：30.

[4]徐麗華，崔保國(guó)，于宗淵.RP-HPLC法測(cè)定辛夷中木蘭脂素與辛夷脂素的含量[J].藥物分析雜志，2003，（10）：20.

（收稿日期：2017-11-20）endprint