鄭州地區(qū)犬真菌性皮膚病發(fā)病情況調(diào)查與病原分離鑒定

李陽楓　常麗燁

摘要：為了了解鄭州地區(qū)犬真菌性皮膚病的發(fā)病情況和主要致病病原菌，對鄭州地區(qū)不同區(qū)域共計55家寵物醫(yī)院2015年1—12月497例首診犬真菌性皮膚病病例進(jìn)行調(diào)查，并對其中100只患犬進(jìn)行病原分離鑒定。結(jié)果顯示，鄭州地區(qū)真菌性皮膚病患犬發(fā)病率前三的品種是金毛犬、貴賓犬和松獅；發(fā)病率較高的年齡段為0～3歲，0～1歲犬最易感染真菌性皮膚??；雌性犬和雄性犬?dāng)?shù)量之比為1.15 ∶1；真菌性皮膚病多發(fā)季為夏、秋兩季，8月份為發(fā)病高峰，其中背部、四肢和腹部發(fā)病率位居前三；病犬患部分離出的真菌有犬小孢子菌、須毛癬菌、石膏樣小孢子菌和絮狀表皮癬菌，以犬小孢子菌感染為主。

關(guān)鍵詞：犬；真菌性皮膚病；調(diào)查；病原分離

中圖分類號： S858.292.75文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號：1002-1302（2017）15-0143-04

真菌是一種在自然界中廣泛存在、種類繁多的真核生物，目前已被描述的約有12萬種，通常分為酵母菌、霉菌和蕈菌三大類。真菌性皮膚病是指致病性真菌黏附并侵入機(jī)體皮膚、毛發(fā)或指甲的角蛋白組織，在一定條件下引起器質(zhì)性病變，從而引起的皮膚疾病，俗稱“癬”[1]。犬真菌性皮膚病在犬皮膚病臨床病例中約占16.86%[2]，是一種傳染性較強(qiáng)的人獸共患病，該病不僅可引起犬局部或全身脫毛、脫屑、紅斑等癥狀，嚴(yán)重影響犬的美觀和健康，其病原還可感染人，引起人的頭癬、體癬及甲癬，其中老人和兒童較易感染。

為了解河南省鄭州地區(qū)犬真菌性皮膚病的發(fā)病情況和主要致病病原菌，本研究對鄭州地區(qū)不同區(qū)域共計55家寵物醫(yī)院2015年1—12月497例首診犬真菌性皮膚病（單純真菌感染和混合感染）病例進(jìn)行調(diào)查（品種、性別、年齡、癥狀、飲食情況、飼養(yǎng)條件、發(fā)病時間等），并對其中100只患犬進(jìn)行病原分離鑒定。旨在了解鄭州地區(qū)犬真菌性皮膚病的病原，為該病的臨床診療以及預(yù)防人獸互傳提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1病例來源

2015年1—12月，鄭州8個行政區(qū)域（金水區(qū)、二七區(qū)、管城區(qū)、中原區(qū)、惠濟(jì)區(qū)、上街區(qū)、鄭東新區(qū)、經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)）內(nèi)55家寵物醫(yī)院497例首診單一真菌感染引起的皮膚病病例以及細(xì)菌和真菌混合感染、真菌和寄生蟲混合感染的病例，對其中100例患犬患部皮膚樣本做病原分離鑒定。

1.2主要試劑與儀器

沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA），購自青島海博生物技術(shù)有限公司；乳酸酚棉藍(lán)染色液，購自青島捷世康生物科技有限公司；伍德氏燈，購自上海吉米寵物用品有限公司；普通光學(xué)顯微鏡，購自重慶奧特光學(xué)儀器有限公司；超凈工作臺，購自上海賀德試驗設(shè)備廠；恒溫培養(yǎng)箱，購自上海精密儀器儀表有限公司；75%乙醇，購自新鄉(xiāng)市三偉消毒制劑有限公司。

1.3臨床病例調(diào)查

詢問主人病犬的發(fā)病史，記錄病犬品種、性別、年齡、發(fā)病時間、發(fā)病癥狀（疼痛、瘙癢、脫毛、紅斑、丘疹、出血、腫脹、鱗屑、膿等癥狀）、發(fā)病部位及飼養(yǎng)環(huán)境。

1.4真菌性皮膚病的診斷

1.4.1伍德氏燈檢查

先將伍德氏燈預(yù)熱5～10 min以得到穩(wěn)定波長，再將病犬置于暗室，在伍德氏燈下觀察是否有熒光，出現(xiàn)熒光者即可判為陽性，未出現(xiàn)熒光則采用直接鏡檢檢查。

1.4.2直接鏡檢

采用刮刀法用乙醇棉球擦拭患病部位皮膚邊緣處，自然風(fēng)干后用消毒后的鈍性刀片與皮膚呈45°輕刮取患病部位皮膚表層，至皮膚呈輕微出血狀。采用刮取法取得皮膚樣品至于載玻片上，滴加1～2滴10% KOH溶液，蓋上蓋玻片，在火焰上輕微加熱，使角蛋白溶解，然后壓緊蓋玻片，用濾紙吸去多余液體[3-4]；將玻片置于光學(xué)顯微鏡下，先用低倍鏡檢查是否有菌絲和孢子，再用高倍鏡觀察孢子和菌絲形態(tài)[5]，若觀察到菌絲和孢子，即可診斷為陽性。

1.5病原分離鑒定

1.5.1真菌培養(yǎng)

用無菌棉拭子對100例病犬的發(fā)病部位進(jìn)行皮膚樣本的采集并做好記錄，然后以劃線法[6]將樣本接種在沙氏葡萄糖培養(yǎng)基上，25 ℃培養(yǎng)2～3周，待菌落出現(xiàn)后用釣菌環(huán)挑取菌落中部新生菌絲至沙氏葡萄糖培養(yǎng)基進(jìn)行純培養(yǎng)，每日觀察菌落的顏色、生長速度、表面狀態(tài)、背部顏色并記錄[4]。

1.5.2乳酸酚棉藍(lán)染色鏡檢

用釣菌環(huán)挑取菌落邊緣與中部之間菌絲置于玻片上，滴加1滴乳酸酚棉藍(lán)染色液，蓋上蓋玻片，輕壓使標(biāo)本平鋪，然后將玻片置于光學(xué)顯微鏡下，先用低倍鏡檢查是否有菌絲和孢子，再用高倍鏡觀察孢子和菌絲形態(tài)，根據(jù)菌落培養(yǎng)性狀和鏡檢結(jié)果，確定真菌的屬種并記錄結(jié)果。

2結(jié)果

2.1病例調(diào)查結(jié)果

本研究調(diào)查的497例真菌性皮膚病患犬中39例為單純真菌感染，289例為真菌和細(xì)菌混合感染，169例為寄生蟲和真菌混合感染?；既霈F(xiàn)不同程度、不同范圍的脫毛、脫屑、痂皮，多數(shù)犬有癢感（圖1至圖4）。

2.2犬真菌性皮膚病與年齡的關(guān)系

本次調(diào)查的497例真菌性皮膚病病犬中，1歲及以下病例共計146例，占總數(shù)的29.4%；2歲犬病例數(shù)為127例，占總數(shù)的25.6%；3歲犬病例數(shù)為45例，占總數(shù)的9.1%；4歲犬病例數(shù)為42例，占總數(shù)的8.5%；5歲犬病例數(shù)為22例，占總數(shù)4.4%；6歲犬病例數(shù)為15例，占總數(shù)的3.2%；7歲犬病例數(shù)為14例，占總數(shù)的2.8%；8歲犬病例數(shù)為9例，占總數(shù)的1.8%；9歲犬病例數(shù)為37例7.4%；10歲犬病例數(shù)為40例，占總數(shù)的8.0%（表1、圖5）。發(fā)病率較高的年齡段為0～3歲和9～10歲。在497例患犬中年齡最小的為2月齡，最大的為10歲，而0～1歲則是犬真菌性皮膚病的發(fā)病高峰期年齡。

2.3犬真菌性皮膚病與品種的關(guān)系

本次調(diào)查的497例真菌性皮膚病患犬中有金毛犬（Golden Retriever）73只（14.7%），貴賓犬（Poodle）59只（11.9%），博美犬（Pomeranian）18只（3.6%），松獅犬（Chow Chow）40只（8.0%），京巴犬（Pekingese）29只（5.8%），哈士奇（Siberian Husky）37只（7.4%），蘇格蘭牧羊犬（Scottish Collie）19只（3.8%），德國牧羊牧（German Shepherd）38只（7.6%），邊境牧羊犬（Border Collie）21只（4.2%），薩摩耶犬（Samoyed）31只（6.2%），比熊犬（Bichons Frises）19只（3.8%），小鹿犬（Minlature Pinscher）9只（1.8%），藏獒（Tibetan Mastiff）8只（1.6%），臘腸犬（Dachshund）8只（1.6%），蘇格蘭梗（Scottish Terrier）2只（0.4%），拉布拉多（Labrador Retriever）16只（3.2%），雪納瑞犬（Schnauzer）17只（3.4%），吉娃娃（Chihuahua）11只（2.2%），喜樂蒂（Shetland Sheepdog）3只（0.6%），古牧犬（Old English Sheepdog）2只（0.4%），沙皮犬（SharPei）1只（0.2%），大麥町（Dalmatian）1只（0.2%），西施犬（Shih Tzu）1只（0.2%），可卡犬（Cocker spaniel）2只（0.4%），斗牛犬（Bulldog）2只（0.4%），銀狐犬（Japanese Spitz）1只（0.2%），雜犬29只（5.8%）（表2）。發(fā)病率最高的犬種是金毛犬，其次是貴賓犬和松獅。endprint

2.4犬真菌性皮膚病與性別的關(guān)系

本研究統(tǒng)計的497個真菌性皮膚病病例中雌性犬266只，雄性犬231只，雌性和雄性之比為1.15 ∶1，雌性略高于雄性（圖6）。

2.5犬真菌性皮膚病與季節(jié)的關(guān)系

本次調(diào)查結(jié)果（表3、圖7）顯示，鄭州地區(qū)犬真菌性皮膚病發(fā)病數(shù)隨溫度的升高逐漸增多，夏、秋多發(fā)，在6—9月份發(fā)病率較高，其中8月份為發(fā)病高峰期；而在春、冬寒冷季節(jié)發(fā)病率低，其中1月份和12月份發(fā)病率為0。

2.6犬真菌性皮膚病發(fā)病部位調(diào)查

由圖8可知，本次調(diào)查的497例病例的發(fā)病部位有面部（67例）、耳部（43例）、頸部（29例）、背部（134例）、腹部（89例）、四肢（124例）和尾部（8例），此外還有細(xì)菌和真菌混合感染全身病例3例。其中背部發(fā)病率最高（27.0%），其次是四肢（24.9%）和腹部（17.9%）。

2.7病原分離鑒定

對本研究選取的100只病犬患部皮膚樣本進(jìn)行真菌分離鑒定，其中61只犬分離出皮膚癬菌，檢出率61%；分離出的皮膚癬菌包含犬小孢子菌31例、須癬毛癬菌7例、 石膏樣小

[TPLYF88.tif]

孢子菌18例、絮狀表皮癬菌5例，未分離到馬拉色菌和紅色毛癬菌，各種皮膚癬菌培養(yǎng)特性和鏡檢結(jié)果如下：

犬小孢子菌（Microsporum gypseum）在SDA培養(yǎng)基上 25 ℃ 時，生長速度較快，菌落開始呈黃白色絨毛樣，培養(yǎng)約2周時逐漸形成羊毛樣，菌落中央趨向粉末化，正面呈橘黃色，背面為紅棕色。鏡檢可見紡錘形大分生孢子和少量小分生孢子，臂較厚，表面粗糙有小顆粒，有4～8個隔。

石膏樣小孢子菌（Microsporum gypseum）在SDA培養(yǎng)基上 25 ℃ 培養(yǎng)，初呈白色絨毛狀，隨后逐漸變?yōu)榘咨恋攸S色粉末狀，菌落中心有圓環(huán)，周圍有短且不齊的紋溝。鏡檢可見大分生孢子為紡錘形、壁薄，有3～6個隔，外壁光滑，可見結(jié)節(jié)狀菌絲。

須癬毛癬菌（Trichophyton mentagrophytes） 在SDA培養(yǎng)基上25 ℃培養(yǎng)，菌落生長迅速，菌落中心有結(jié)節(jié)狀突起，菌落上有不規(guī)則放射狀溝紋，表面呈白色，背面呈微黃色。鏡檢可見大量圓形小分生孢子和棒狀大分生孢子，有2～6個隔，分隔處孢子變狹、壁薄，且具有不同形態(tài)的菌絲。

絮狀表皮癬菌（Epidermophyton floccosum）在SDA培養(yǎng)基上25 ℃培養(yǎng)，初期生長緩慢，菌落質(zhì)地由膜狀變?yōu)樘籂?，表面黃綠色至土黃色且具有不規(guī)則褶皺，背面棕黃色。鏡下可見豐富的棒狀大分生孢子，頂端鈍圓、壁厚、光滑，無小分生孢子，結(jié)節(jié)菌絲和螺旋菌絲亦不多見。

3討論

3.1犬真菌性皮膚病發(fā)病情況

健康動物體表亦常攜帶致病性真菌，這類真菌在機(jī)體免疫力下降或皮膚表層理化性質(zhì)改變時可引發(fā)皮膚病，而幼小和年老動物，以及體弱和營養(yǎng)不良動物免疫力較低，且皮膚表層理化性質(zhì)易發(fā)生改變，因此許多研究表明真菌性皮膚病的發(fā)病年齡大多為1～4歲。本研究結(jié)果顯示，鄭州地區(qū)犬真菌性皮膚病主要發(fā)病年齡為0～3歲，1歲為發(fā)病高峰。本研究調(diào)查的497例真菌性皮膚病患犬年齡為2月齡至10歲。其中0～2歲犬發(fā)病率較高，并隨著年齡的增長，發(fā)病率逐漸下降，但9～10歲犬發(fā)病率略有上升。朱重偉調(diào)查了2011—2012年洛陽地區(qū)417例真菌性皮膚病患犬的發(fā)病年齡，結(jié)果顯示1歲犬發(fā)病率高達(dá)37.17%，且發(fā)病率隨年齡的增加而降低，至10歲以上犬發(fā)病率有所回升[7]。

不同地區(qū)犬真菌性皮膚病發(fā)病品種多為松獅、金毛、貴賓、京巴等長毛犬，分析原因是由于長毛犬毛發(fā)內(nèi)濕度較大，缺乏空氣流通，真菌易寄生在此類犬皮膚表面，此外調(diào)查結(jié)果與當(dāng)?shù)仞B(yǎng)犬愛好者對寵物犬品種的喜好和飼養(yǎng)數(shù)量有關(guān)。本研究對鄭州地區(qū)497只真菌性皮膚病患犬的調(diào)查結(jié)果顯示，發(fā)病率居于前三的是金毛犬、貴賓犬和松獅，筆者分析原因可能與鄭州地區(qū)此3種犬的數(shù)量較多有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，雌性犬真菌性皮膚病的發(fā)病率高于雄性犬，一方面是因為性激素對皮脂腺分泌的影響，另一方面可能是鄭州地區(qū)雌性犬的養(yǎng)殖數(shù)量大于雄性犬所致。筆者查閱了相關(guān)文獻(xiàn)，不同地區(qū)真菌性皮膚病患犬雌雄無明顯差異，對于犬真菌性皮膚病與性別的關(guān)系尚無明確的結(jié)論，結(jié)果的差異可能與調(diào)查范圍有關(guān)。

致病性皮膚癬菌最適生長溫度為22～28 ℃，因此真菌性皮膚病發(fā)病具有明顯季節(jié)性，在溫暖、潮濕的季節(jié)多發(fā)。丁明星、劉拂曉研究表明在10月至次年2月為犬小孢子菌病的發(fā)病高峰[8-9]；7—11月為石膏樣小孢子菌病的發(fā)病高峰；須發(fā)毛癬菌全年發(fā)病，11—12月為其發(fā)病高峰。安錫忠等分析了2013年河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)院犬單一真菌性皮膚病病例，結(jié)果顯示由犬小孢子菌感染引起的病例占53.23%[10]。趙熠群對2009年1—12月上海地區(qū)15家寵物醫(yī)院真菌性皮膚病患犬的調(diào)查結(jié)果顯示，真菌性皮膚病主要發(fā)生在5—9月份，原因可能是上海地區(qū)氣候潮濕，適宜真菌孳生[11]。本研究對497例真菌性皮膚病患犬發(fā)病時間的統(tǒng)計結(jié)果顯示，鄭州地區(qū)犬真菌性皮膚病多發(fā)季為夏、秋兩季，7月份為發(fā)病高峰，分析原因可能是鄭州地區(qū)春季較為干燥，而6—9月份多雨，且夏、秋兩季犬外出時間增多，與致病性真菌接觸的幾率增大，以及夏季寵物洗澡較勤，影響了皮膚對真菌的抵抗力。

筆者查閱相關(guān)文獻(xiàn)，犬真菌病皮膚病發(fā)病部位主要有面部、背部、四肢、腹部等容易與真菌接觸的部位。由于犬天性喜嗅，因此面部真菌性皮膚病主要發(fā)生在鼻周圍，背部、四肢等主要是通過與真菌直接接觸感染；腹部則是由于犬喜臥，腹部直接接觸真菌，且腹部較為潮濕，適宜真菌孳生。此外李天偉對健康犬真菌攜帶情況調(diào)查結(jié)果顯示，耳內(nèi)真菌攜帶量也較高[12]。本研究調(diào)查的497例患犬的發(fā)病部位全身均有分布，其中背部、四肢和腹部發(fā)病率位居前三。endprint

3.2病原分離鑒定

KOH法和乳酸酚棉藍(lán)染色法均可用于淺部真菌的直接鏡檢，這2種方法取材簡單、操作方便，在動物皮膚病和人皮膚病中廣泛應(yīng)用。KOH的濃度一般取10%～20%，乳酸酚棉藍(lán)染液的配方為石炭酸20 mL、乳酸20 mL、甘油40 mL、蒸餾水20 mL，上述混合物加熱溶解后加入棉藍(lán)50 mg，混勻過濾即可[5]。本研究采用沙氏培養(yǎng)基（配方：蛋白胨10 g，葡萄糖40 g，瓊脂粉20 g）對樣本進(jìn)行病原分離鑒定，且在培養(yǎng)基中添加氯霉素（0.05 mg/mL）以防止細(xì)菌和其他霉菌生長，培養(yǎng)時間2～3周，但氯霉素并不能完全抑制酵母和霉菌的生長[13]。

本研究中病原分離結(jié)果顯示，鄭州地區(qū)犬真菌性皮膚病的病原主要是犬小孢子菌（50.8%），與朱重偉、吳清波的研究結(jié)果[7，14]一致。在犬真菌性皮膚病臨床病例中，雖然由須毛癬菌引起的真菌性皮膚病少于犬小孢子菌，但研究表明須毛癬菌毛發(fā)穿孔所需的時間較犬小孢子菌短，且對毛發(fā)的損傷作用比犬小孢子菌更為嚴(yán)重[15]。絮狀表皮癬菌可引起犬、貓、兔等動物的皮膚真菌病和人類體癬和疣狀增生[16]。

對于犬真菌性皮膚病的預(yù)防關(guān)鍵是要注重平時的防護(hù)，對寵物洗澡不易過頻，因為過度頻繁的洗澡會損傷犬皮膚的角質(zhì)層，使其失去對皮膚的保護(hù)作用，從而更易發(fā)生皮膚病。此外，給犬洗澡時應(yīng)使用寵物專用香波，切不可使用人用沐浴露。平時應(yīng)注重寵物飲食營養(yǎng)均衡，因為營養(yǎng)不良會導(dǎo)致皮脂腺分泌不足，使得毛發(fā)干枯易斷；營養(yǎng)過剩則導(dǎo)致皮脂腺分泌物中脂類成分增加，而缺乏維生素B則會引起掉毛、皮屑以及毛發(fā)色素沉著不足[17]。一旦出現(xiàn)病癥應(yīng)及時就醫(yī)，對病犬暫時隔離，防止造成人員感染。

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