林百豐 王鑫 唐鷺 張學(xué)志 陳麗

肺結(jié)核是一種嚴(yán)重危害人類健康的重大呼吸道傳染病。針對肺結(jié)核患者的檢測，我國大部分基層實(shí)驗(yàn)室仍以痰涂片和痰培養(yǎng)為主。痰涂片檢查雖然速度快、成本低，但檢出率低；痰培養(yǎng)檢查檢出率高、成本也不高，但是培養(yǎng)時間大約需要1個月。目前，有很多實(shí)驗(yàn)室將分子檢測技術(shù)應(yīng)用于臨床以發(fā)現(xiàn)活動性肺結(jié)核患者。筆者將GeneXpert MTB/RIF(簡稱“GeneXpert”)與傳統(tǒng)肺結(jié)核診斷技術(shù)(痰涂片和痰培養(yǎng))進(jìn)行對比分析，現(xiàn)報告如下。

資料和方法

一、研究對象

選取2015年8月至2017年1月黑龍江省縣級結(jié)核病防治所門診連續(xù)收集的未經(jīng)治療的1355例初診患者作為研究對象，包括活動性肺結(jié)核患者636例，非活動性肺結(jié)核患者719例。肺結(jié)核患者的診斷參照《WS 288—2008肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)》[1]。研究對象均留取痰標(biāo)本，由縣級實(shí)驗(yàn)室人員進(jìn)行檢測。

二、研究方法

1.標(biāo)本采集：參照文獻(xiàn)[2]的要求，收集合格的痰標(biāo)本，標(biāo)本量3～5 ml，對不合格的痰標(biāo)本要求患者重新留取。

2.痰涂片檢查：采用萋-尼抗酸染色法，參照文獻(xiàn)[2]要求進(jìn)行操作。

3.痰固體培養(yǎng)：對所有痰標(biāo)本采用簡單法培養(yǎng)，操作方法參照文獻(xiàn)[3]的要求。培養(yǎng)基購自珠海貝索生物技術(shù)有限公司。

4.藥物敏感性試驗(yàn)(簡稱“藥敏試驗(yàn)”)：采用比例法對培養(yǎng)陽性的標(biāo)本進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，操作要求參照文獻(xiàn)[4]。培養(yǎng)基購自珠海貝索生物技術(shù)有限公司。

5.GeneXpert：取1 ml合格的痰標(biāo)本放入帶螺旋蓋的無菌前處理管中，加入2倍體積試劑配備的痰標(biāo)本處理液，旋緊前處理管，在漩渦振蕩器上振蕩15～30 s，室溫靜置15 min，使痰液完全液化。打開試劑盒，用試劑配備的一次性吸管吸取液化的痰標(biāo)本到規(guī)定的刻度，加入到反應(yīng)盒的加樣孔，然后將反應(yīng)盒放入檢測模塊。儀器進(jìn)入倒計時自動檢測，當(dāng)反應(yīng)結(jié)束后讀取結(jié)果。儀器與試劑均購自美國賽沛公司。

三、統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料采用“率(%)”表示。計算GeneXpert的檢測效能指標(biāo)，指標(biāo)計算方法：敏感度=真陽性例數(shù)/(真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%；特異度=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù))×100%。

結(jié) 果

1355例患者包括活動性肺結(jié)核患者636例，非活動性肺結(jié)核患者719例。痰涂片檢測陽性173例，陰性1182例；痰培養(yǎng)陽性317例，陰性1038例；GeneXpert檢測陽性386例，陰性969例。以痰涂片檢查為標(biāo)準(zhǔn)，GeneXpert檢測的敏感度和特異度分別為98.3%(170/173)和81.7%(966/1182)。以痰培養(yǎng)為標(biāo)準(zhǔn)，GeneXpert檢測的敏感度和特異度分別為93.4%(296/317)和91.3%(948/1038)。以臨床診斷為標(biāo)準(zhǔn)，GeneXpert檢測的敏感度和特異度分別為58.0%(369/636)和97.6%(702/719)；痰涂片檢測的敏感度和特異度分別為27.2%(173/636)和100.0%(719/719)；痰培養(yǎng)的敏感度和特異度分別為48.4%(308/636)和98.7%(710/719)。

296例痰培養(yǎng)陽性患者經(jīng)比例法藥敏試驗(yàn)檢測對利福平敏感241例，耐藥55例；GeneXpert檢測敏感245例，耐藥51例；以比例法藥敏試驗(yàn)為標(biāo)準(zhǔn)，GeneXpert檢測對利福平耐藥的敏感度和特異度分別為85.5%(47/55)和98.3%(237/241)。

討 論

本次研究中GeneXpert檢測分別以痰涂片和痰培養(yǎng)為標(biāo)準(zhǔn)，其敏感度和特異度分別為98.3%、93.4%和81.7%、91.3%。國外有報道，GeneXpert檢測結(jié)核分枝桿菌的敏感度和特異度分別為92.2%和98.2%，檢測對利福平耐藥的敏感度和特異度分別為97.6%和98.1%[5]。國內(nèi)報道GeneXpert檢測以痰涂片、痰培養(yǎng)為標(biāo)準(zhǔn)的敏感度和特異度分別為93.27%、91.93%和91.6%、95.55%[6]。以上報道的研究對象均來源于結(jié)核病?？漆t(yī)院，而筆者本次研究選取的研究對象來源于縣級結(jié)核病防治所。?？漆t(yī)院的患者一般都是住院患者，患者的依從性較好，留取痰標(biāo)本的質(zhì)量有保證。本次研究GeneXpert檢測以痰涂片和痰培養(yǎng)為標(biāo)準(zhǔn)的特異度分別為81.7%和91.3%，特異度較高。

以臨床診斷為標(biāo)準(zhǔn)，痰涂片、痰培養(yǎng)和GeneXpert檢測的敏感度分別為27.2%、48.4%和58.0%，可見GeneXpert檢測的敏感度較高，這對于痰涂片檢測陰性，而培養(yǎng)還在等待時，在最短時間內(nèi)來確定排菌患者有很大意義，但此方法不能鑒別死菌與活菌；而痰涂片、痰培養(yǎng)和GeneXpert檢測特異度分別為100.0%、98.7%和97.6%，可見GeneXpert檢測特異度略低，但其檢測時間較短，可在2 h得出結(jié)果，這對臨床用藥有一定的指導(dǎo)作用。

GeneXpert檢測對利福平耐藥的敏感度和特異度分別為85.5%和98.3%，與趙冰等[7]報告的結(jié)果相一致。GeneXpert檢測對利福平耐藥敏感度只有85.5%，比較低。世界衛(wèi)生組織建議如果將GeneXpert檢測應(yīng)用于對利福平耐藥率較低的人群進(jìn)行耐藥檢測時，對于檢測為對利福平耐藥的患者需要使用傳統(tǒng)藥敏試驗(yàn)或其他分子生物學(xué)檢測進(jìn)一步驗(yàn)證，以避免假陽性[8]。

綜上，GeneXpert檢測的自動化程度、敏感度和特異度比較高，并且其檢測時間短，對實(shí)驗(yàn)室的生物安全及對工作人員的技術(shù)水平要求不高，因此，很適合在基層實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。但由于GeneXpert只能檢測是否對利福平耐藥，并且受基層實(shí)驗(yàn)室經(jīng)濟(jì)條件的影響，其應(yīng)用也受到了一定限制。