任燕

摘 要：目的 探討手足口病患兒中血清淋巴細(xì)胞免疫分型水平變化，為診斷及治療手足口病提供臨床診治意義。方法 選取四川省宜賓市第一人民醫(yī)院2013年3月～2015年3月兒科手足口患兒 150例（分為重癥組54例，輕癥組96例）及行兒科保健健康兒童105例；采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行血清淋巴細(xì)胞免疫分型的水平檢測(cè)，并行組間比較。結(jié)果 重癥患兒血清淋巴細(xì)胞免疫分型水平較輕型低，輕型較健康兒童水平低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 手足口病患兒免疫功能較正常健康兒童呈降低趨勢(shì)，其中重癥患兒免疫功能更低，分析血清淋巴免疫細(xì)胞分型水平可作為手足口病患兒判斷疾病病情變化及臨床治療觀察的一種方法。

關(guān)鍵詞：手足口病；血清淋巴細(xì)胞免疫分型；T淋巴細(xì)胞

中圖分類(lèi)號(hào)：R725.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.01.029

文章編號(hào)：1006-1959（2018）01-0082-03

Serum Level of Lymphocyte Immunophenotype in Children with Hand-foot-mouth Disease and its Clinical Significance

REN Yan

（Department of Pediatrics，F(xiàn)ourth People's Hospital of Yibin，Yibin 644000，Sichuan，China）

Abstract：Objective To investigate the changes of serum immunocytotyping in children with hand foot and mouth disease and provide clinical diagnosis and treatment of hand foot and mouth disease.Methods From Yibin First People's Hospital of Sichuan Province in March 2013～March 2015 pediatric HFMD patients in 150 cases（54 cases in severe group and 96 cases in mild group）and 105 healthy children for pediatric care；The detection of serum lymphocyte immunophenotyping by flow cytometry，parallel comparison between groups.Results Serum levels of lymphocyte subsets in children with severe light level is low，low level light compared with healthy children，the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion The immune function of children with hand foot and mouth disease is lower than that of healthy children.The immune function of severe children is lower.The analysis of serum lymphoid immune cell typing level can be used as a way to diagnose the disease and to observe the clinical treatment of children with hand foot and mouth disease.

Key words：Hand foot and mouth disease；Serum lymphocyte immunophenotype；T lymphocyte

手足口病（hand foot and mouth disease，HFMD）作為丙類(lèi)傳染病，在學(xué)齡前期兒童發(fā)病率較高，尤其3歲兒童發(fā)病率最高，對(duì)兒童健康造成極大危害[1]，手足口病主要通過(guò)密切接觸、呼吸道等途徑進(jìn)行傳播，臨床表現(xiàn)為手、足、口腔黏膜可見(jiàn)皮疹（以斑疹、皰疹常見(jiàn)）以及發(fā)熱等癥狀；兒童手足口病分為普通型及重癥型；重癥型手足口病患兒可出現(xiàn)肺水腫、心肌炎、呼吸循環(huán)衰竭、神經(jīng)中樞癥狀（如意識(shí)障礙、昏迷、腦水腫表現(xiàn)）等癥狀[2]。近年來(lái)研究表明，機(jī)體免疫系統(tǒng)下降在手足口病發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸中發(fā)生重要作用；免疫功能變化表現(xiàn)為細(xì)胞免疫及體液免疫。T淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫中主要細(xì)胞免疫細(xì)胞，參與幾乎所有特異性免疫，可以直接抵抗各種細(xì)菌及病毒產(chǎn)生抗原，同時(shí)調(diào)節(jié)宿主體液免疫[3]。T淋巴細(xì)胞亞群之間的動(dòng)態(tài)平衡，對(duì)維持機(jī)體細(xì)胞免疫及體液免疫尤為重要。本文旨在研究血清中淋巴細(xì)胞免疫分型水平變化，探討手足口患兒免疫功能變化，為臨床治療提供診治依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料 選取四川省宜賓市第一人民醫(yī)院2013年3月～2015年3月兒科確診手足口病患兒150例，其中輕型患者96例，男50例，女46例，年齡1～7歲，平均年齡（3.1±1.04）歲；重型患者54例，男28例，女26例，年齡1～7歲，平均年齡（2.0±1.14）歲。手足口病患兒輕型表現(xiàn)：發(fā)熱體溫37.5～39 ℃，咳嗽、干咳為主，體征：手足口可見(jiàn)皰疹及斑疹；重型表現(xiàn)：患者發(fā)熱體溫維持在39℃以上，伴有頭痛、嘔吐、手抖，一過(guò)性癱瘓；查體：血壓下降，手足口可見(jiàn)斑疹及皰疹，偶有肝脾腫大，神經(jīng)系統(tǒng)、心血管受累等表現(xiàn)，意識(shí)障礙、心肌酶異常等）。兒科保健健康兒童105例，其中男75例，女30例，年齡1～7歲，平均年齡（3.0±1.04）歲。各組患者一般資料差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），有可比性。endprint

1.2儀器與試劑 用BD（Becton-Dick-inson）公司生產(chǎn)的FACSCaLibur流式細(xì)胞儀檢測(cè)儀器測(cè)定淋巴細(xì)胞免疫分型水平：淋巴細(xì)胞數(shù)（L）、T淋巴細(xì)胞百分比（CD3%）、CD8淋巴細(xì)胞百分比（CD8%）、CD4淋巴細(xì)胞百分比（CD4%）、CD4CD8均陽(yáng)比例（CD4+CD8+%）、NK細(xì)胞百分比（CD16%）、B淋巴細(xì)胞百分比（CD19%）、T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（CD3）、CD8淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（CD8）、CD4淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（CD4）、CD4CD8均陽(yáng)計(jì)數(shù)、NK細(xì)胞計(jì)數(shù)（CD16）、B淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（CD19）、CD4/CD8。

1.3收集血清樣本方法 抽取實(shí)驗(yàn)兒童外周靜脈血2.5 ml，放置在加用肝素抗凝真空試劑管中，充分混勻抗凝。放置在室內(nèi)，避光放置。抽取樣本采用Multiset四色免洗淋巴細(xì)胞亞群的絕對(duì)數(shù)方法，具體方法：①每個(gè)樣本取2支Trucount管，分別標(biāo)號(hào)A和B管；②分別在A管中加入10 μl的CD3/CD8/CD4/CD5抗體，B管中加入10 μl的CD3/CD16+CD56/CD45/CD19抗體；③用反向加樣法分別向A、B管中加入50 μl顛倒混勻的抗凝全血，然后渦旋混勻，室溫下避光15 min；④分別向A、B管中加入450 μl 1×FACS溶血素，充分混勻，室溫下放置10 min；⑤24 h內(nèi)上述樣本上機(jī)檢測(cè)，用Mutiset軟件檢測(cè)分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS18對(duì)采集得出數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用（x±s）表示，同時(shí)對(duì)其數(shù)據(jù)行正態(tài)性檢驗(yàn)，組間統(tǒng)計(jì)資料符合正態(tài)分布采用t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布采用方差分析檢驗(yàn)，以P<0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

重癥組中淋巴細(xì)胞數(shù)（L）、T淋巴細(xì)胞百分比（CD3%）、CD8淋巴細(xì)胞百分比（CD8%）、CD4淋巴細(xì)胞百分比（CD4%）、CD4CD8均陽(yáng)比例（CD4+CD8+%）、NK細(xì)胞百分比（CD16%）、B淋巴細(xì)胞百分比（CD19%）、T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（CD3）、CD8淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（CD8）、CD4淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（CD4）、CD4CD8均陽(yáng)計(jì)數(shù)、NK細(xì)胞計(jì)數(shù)（CD16）、B淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（CD19）、CD4/CD8值均低于輕癥組，輕癥組較健康組低，見(jiàn)表1～表4。根據(jù)方差分析得出差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3討論

手足口病在我國(guó)處于高發(fā)狀態(tài)，患兒感染如柯薩奇病毒等腸道病毒后，常見(jiàn)在口腔與皮膚上出現(xiàn)皰疹及丘疹，但是隨著病情的進(jìn)展可出現(xiàn)全身炎癥反應(yīng)綜合征，嚴(yán)重可導(dǎo)致多器官功能衰竭。免疫低下患兒感染，常迅速發(fā)展為重型手足口??；因此檢測(cè)患者免疫功能尤為重要[1，3，5]。機(jī)體免疫功能在手足口患兒疾病發(fā)生發(fā)展以及病情進(jìn)展中發(fā)生常見(jiàn)作用，隨著大量臨床研究顯示，淋巴細(xì)胞亞群改變導(dǎo)致機(jī)體免疫功能受損可能同手足口病情進(jìn)展有相關(guān)性。目前研究最多是T細(xì)胞亞群[2，4，6-8]。

血清中T淋巴細(xì)胞來(lái)源骨髓，成熟器官為胸腺。T淋巴細(xì)胞的特有標(biāo)志為T(mén)CR-CD3[T細(xì)胞（抗原）受體與CD3分子復(fù)合物]。T淋巴細(xì)胞根據(jù)其表面標(biāo)志和功能特性，可以分為CD3+CD8+的抑制性T淋巴細(xì)胞（CTL）以及CD3+CD4+的輔助性T淋巴細(xì)胞（CD4+Th）。CTL細(xì)胞通過(guò)分泌顆粒酶、穿孔素、通過(guò)FasL途徑等導(dǎo)致靶細(xì)胞的分解機(jī)凋亡[2，6，8-10]。CD4+Th細(xì)胞可繼續(xù)分化為分泌型的Th細(xì)胞亞群：Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞、Th3細(xì)胞和Th17細(xì)胞。正常狀態(tài)下，T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量處于一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡并且相互調(diào)節(jié)的狀態(tài)。其值降低說(shuō)明機(jī)體處于免疫抑制狀態(tài)，易受細(xì)菌及病毒、原蟲(chóng)、真菌等因素感染[6，9，10-14]。

此臨床研究顯示，重癥組患兒血清中L、CD3%、CD8%、CD4%、CD16%、CD19%、CD3、CD8、CD4、CD16、CD19、CD4/CD8值明顯低于輕癥組，較健康組低，輕癥組較健康組低，說(shuō)明病情隨著病情加重，細(xì)胞免疫功能處于明顯抑制狀態(tài)。其機(jī)制為：①當(dāng)機(jī)體遭受手足口病毒感染，如柯薩奇病毒等后，T淋巴細(xì)胞對(duì)病毒抗原刺激無(wú)增殖性反應(yīng)，T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生分裂及凋亡。使大量活化的T淋巴細(xì)胞遭到清除，并且誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞克隆無(wú)反應(yīng)，機(jī)體特異性免疫受到抑制[9，11，12-15]；②T淋巴細(xì)胞分化異常，CTL及CD4+Th不處于動(dòng)態(tài)平衡，從而使分泌細(xì)胞因子及炎癥介質(zhì)，如IL-1、6、8、10，干擾素等分泌減少，使體液免疫功能受損，結(jié)果使機(jī)體清除病原體無(wú)力，病情惡化[1，5，9，12]。本研究還顯示，重癥組比輕癥組免疫功能障礙更嚴(yán)重，從而說(shuō)明患者病情越嚴(yán)重，機(jī)體的免疫功能抑制越嚴(yán)重，患者的預(yù)后更差。當(dāng)然，由于條件所限，未能同時(shí)進(jìn)行如免疫球蛋白，補(bǔ)體等的檢測(cè)是本研究的不足之處，如能進(jìn)行，將會(huì)對(duì)患兒的免疫功能監(jiān)測(cè)更客觀和全面。

綜上所述，盡早對(duì)血清淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)，對(duì)患兒病情的判斷、臨床治療的指導(dǎo)具有重要意義。

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收稿日期：2017-3-29；修回日期：2017-6-18

編輯/楊倩endprint