耿龍潑 王鑫旺 黃路華 鄧基利 汪世華 張峰

（福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 福建省病原真菌與真菌毒素重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福州 350002）

黃曲霉是一種常見的腐生真菌，它在緯度為16°-35°的溫帶地區(qū)極易從土壤中分離得到［1］。黃曲霉能以菌核的形式存在于土壤中并且抵御極端環(huán)境，而后產(chǎn)生分生孢子在炎熱干旱的環(huán)境條件下爆發(fā)［2］。黃曲霉作為人、動(dòng)物和植物的共同病原菌，可引起人和動(dòng)物的曲霉病。有報(bào)道稱北美地區(qū)65%的兒童曲霉病是由黃曲霉引起的［3］。此外，黃曲霉還會(huì)侵染花生、玉米、棉籽、堅(jiān)果、茶葉等作物［4］。全世界約有25%的谷物因污染真菌而不可食用，其中以黃曲霉的污染較為嚴(yán)重［5］。

黃曲霉除了自身能引起曲霉病和污染糧食作物的危害外，其另一個(gè)主要的危害是在生長(zhǎng)發(fā)育的過程中產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物黃曲霉毒素（Aflatoxin，AFT）。黃曲霉毒素是聚酮化合物衍生的二呋喃香豆素，其合成由靠近3號(hào)染色體端粒處的一個(gè)含29個(gè)基因的基因簇調(diào)控［6］。黃曲霉毒素在酸性和中性條件下較為穩(wěn)定，難溶于水，而易溶于有機(jī)溶劑，且具有熒光特性［7］。常見的黃曲霉毒素有AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、AFM1、AFM2等， 其 中 AFB1可以耐高溫，并且AFB1也是毒性和致癌性較強(qiáng)的物質(zhì)［8-9］。研究表明，當(dāng)黃曲霉的分生孢子和菌核的發(fā)育受到影響時(shí)，菌株幾乎失去毒素合成的能力［10］。此外，當(dāng)黃曲霉的分生孢子產(chǎn)量增多時(shí)，菌株的毒素合成量也有所提高［11］。這暗示黃曲霉的生長(zhǎng)發(fā)育能夠影響其毒素的產(chǎn)生。

核糖體蛋白作為核糖體的主要組成成分，除了在細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)生物合成中發(fā)揮著重要作用外，還具有其他的生物學(xué)功能。有研究表明抗黃曲霉品種的花生種子在發(fā)育時(shí)核糖體蛋白L41的表達(dá)比敏感品種中多，說明核糖體蛋白與植物的抗逆境能力息息相關(guān)［12］。也有研究表明核糖體蛋白L13可以結(jié)合去乙?；窼irT1，促進(jìn)其泛素化，從而抑制細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡［13］。在蛋白質(zhì)組水平對(duì)黃曲霉可變剪接的檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，核糖體蛋白L32存在著不同的剪接方式，這暗示了黃曲霉核糖體蛋白的不同表達(dá)方式可能在細(xì)胞中擔(dān)負(fù)著不同的生物學(xué)功能［14］。利用穩(wěn)定的同位素標(biāo)記法對(duì)產(chǎn)毒和非產(chǎn)毒狀態(tài)的黃曲霉總蛋白進(jìn)行標(biāo)記，分析發(fā)現(xiàn)核糖體蛋白L27的表達(dá)量存在差異，說明黃曲霉特定核糖體蛋白的表達(dá)量與其產(chǎn)毒存在著重要聯(lián)系［15］。

基于此，我們通過熒光定量RT-PCR對(duì)黃曲霉各個(gè)發(fā)育時(shí)期的74個(gè)核糖體蛋白mRNA進(jìn)行定量，以期找出與黃曲霉生長(zhǎng)發(fā)育緊密聯(lián)系的核糖體蛋白，為今后揭示核糖體蛋白調(diào)控黃曲霉生長(zhǎng)發(fā)育的機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

本研究所用的黃曲霉菌株為Aspergillus flavusNRLL3357（由中山大學(xué)賀竹梅教授惠贈(zèng)）。將少量黃曲霉孢子接種于PDA（Difco）培養(yǎng)基上，于37℃黑暗恒溫培養(yǎng)5 d后收集孢子，制備成孢子懸液。取106個(gè)孢子均勻涂布于鋪有玻璃紙的Wickerham［16］培養(yǎng)基上，分別于37℃黑暗恒溫培養(yǎng)1 d、3 d、7 d后收集樣品，命名為菌絲期、孢子期、菌核期，每組3個(gè)平行，樣品收集后用液氮迅速冷凍，于-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

黃曲霉核糖體蛋白mRNA序列從NCBI（National Center for Biotechnology Information）網(wǎng)站獲得，熒光定量PCR引物設(shè)計(jì)使用軟件Primer 5.0，引物合成由北京六合華大基因科技股份有限公司完成。

1.2 方法

1.2.1 總RNA的提取 稱取0.15 g菌體，加入1 mL冰上預(yù)冷的Trizol（Invitrogene），再加入0.2 mL直徑1.5 mm的磁珠，在組織破碎儀上65 Hz震蕩破碎90 s，5 000 r/min低溫離心2 min。取上清，加入200 μL氯仿，劇烈震蕩1 min，冰上放置10 min，12 000 r/min低溫離心15 min。取500 μL上清液至新的EP（RNase free）管中，加入500 μL異丙醇，顛倒混勻，冰上放置10 min，12 000 r/min低溫離心15 min。棄上清，加入1 mL 75%的乙醇（DEPC水配制）洗滌沉淀，10 000 r/min低溫離心5 min。棄上清，靜置晾干沉淀，加入30 μL DEPC水溶解沉淀，使用瓊脂糖凝膠和Nanodrop 2000分光光度計(jì)檢測(cè)總RNA的質(zhì)量和純度，-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA 取2 μg的RNA加入2 μL oligo（dT）18（10 mmol/L）引物并用DEPC水補(bǔ)齊至15 μL，70℃變性5 min，迅速轉(zhuǎn)移至冰上，冷卻2 min。向上述溶液中加入 0.5 μL RTase（Promega）、0.2 μL RNase Inhibitor（TaKaRa）、1.5 μL dNTP、5 μL RT buffer 和 2.8 μL DEPC 水，混勻，42℃反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)2 h，即得到cDNA。

1.2.3 熒光定量RT-PCR 將上述反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA稀釋10倍用于熒光定量RT-PCR反應(yīng)，體系為 ：3 μL cDNA，1 μL 引物 F（5 μmol/L），1 μL 引物R（5 μmol/L），5 μL 2×SYBR Green Mix（ABI），總體積10 μL。熒光定量RT-PCR擴(kuò)增條件如下：預(yù)變性，95℃ 7 min；PCR 反應(yīng)，95℃ 15 s，56℃ 15 s，72℃ 45 s，循環(huán)40次。在72℃采集和記錄熒光。然后保持95℃ 15 s，60℃ 1 min，每10 s 加0.5℃直到95℃擴(kuò)增結(jié)束。反應(yīng)在ABI StepSnePlus 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上進(jìn)行。選擇β-tubulin作為內(nèi)參基因，每組樣品3個(gè)平行，目標(biāo)基因的相對(duì)表達(dá)量采用2-ΔΔCt法計(jì)算［17］。使用GraphPad Prism 5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和顯著性分析，Tukey多重比較用于顯著性分析，如果P＜0.05，則認(rèn)為顯著。

1.2.4 黃曲霉核糖體蛋白基因功能預(yù)測(cè) Gene Ontology功能分析數(shù)據(jù)在DAVID網(wǎng)站獲得（https://david.ncifcrf.gov/），GO功能富集分析使用OmicShare工具（www.omicshare.com/tools）。

2 結(jié)果

2.1 黃曲霉不同生長(zhǎng)時(shí)期的菌落形態(tài)

黃曲霉孢子在Wickerham培養(yǎng)基上37℃黑暗條件下培養(yǎng)1 d后，孢子在培養(yǎng)基上萌發(fā)生長(zhǎng)出白色的菌絲，為黃曲霉的菌絲期（圖1）。當(dāng)培養(yǎng)到第3天時(shí)，菌落呈現(xiàn)出綠色，顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)此時(shí)的菌絲會(huì)長(zhǎng)出分生孢子頭，為黃曲霉的孢子期（圖2）。當(dāng)培養(yǎng)到第7天時(shí)，培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分大部分被利用完，部分菌絲會(huì)凋亡，此時(shí)的菌落呈現(xiàn)出灰綠色。當(dāng)用75%的酒精噴洗掉菌落表面的孢子和菌絲，可以明顯看到形成的具有抗逆性的黑灰色菌核，為黃曲霉的菌核期（圖3）。

2.2 熒光定量RT-PCR分析結(jié)果

對(duì)提取的各時(shí)期的總RNA檢測(cè)顯示完整性好且質(zhì)量符合要求后，反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，用于熒光定量RT-PCR檢測(cè)。熒光定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明，在所有檢測(cè)的核糖體蛋白基因中，沒有一個(gè)基因的表達(dá)量在3個(gè)時(shí)期是恒定的。如果以菌絲期作為參照，在孢子期共有54個(gè)核糖體蛋白基因的表達(dá)量上調(diào)，而在菌核期有57個(gè)核糖體蛋白基因的表達(dá)量上調(diào)，其中在孢子期、菌核時(shí)期表達(dá)量均上調(diào)的基因有42個(gè)（圖4-A）。但是，與菌絲期相比，只有2個(gè)核糖體蛋白的基因表達(dá)量在孢子期下調(diào)，而在菌核期表達(dá)量下調(diào)的核糖體蛋白基因有12個(gè)，在孢子期、菌核時(shí)期表達(dá)量均下調(diào)的基因有2個(gè)（圖4-B）。由此可見，黃曲霉核糖體蛋白的表達(dá)量與菌株的生長(zhǎng)發(fā)育密切相關(guān)，且在孢子期參與生命活動(dòng)的核糖體蛋白數(shù)目最多，菌核期次之，菌絲期最少。

圖1 黃曲霉菌絲時(shí)期的菌落形態(tài)

圖2 黃曲霉孢子時(shí)期的菌落形態(tài)

圖3 黃曲霉菌核時(shí)期的菌落形態(tài)

通過進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，多數(shù)核糖體蛋白基因從菌絲期發(fā)展到孢子期和菌核期后發(fā)生了明顯上調(diào)，且大致可以分為以下兩類：（1）在孢子期和菌核期有42個(gè)基因的表達(dá)量均上調(diào)，且存在顯著差異（P＜0.05）。它們可以分為3種情況：第一種情況是相比菌絲期表達(dá)量上調(diào)，但在孢子期、菌核期之間表達(dá)量無顯著差異的基因有9個(gè)，其中核糖體大亞基蛋白基因有2個(gè)，核糖體小亞基蛋白基因有7個(gè)（圖5-A）。第二種情況是在孢子期的表達(dá)量比菌核期多的基因有9個(gè)，其中核糖體大亞基蛋白基因有4個(gè)，核糖體小亞基蛋白基因有5個(gè)（圖5-B）。第3種情況是在菌核期的表達(dá)量比孢子期多的基因共有24個(gè)，其中核糖體大亞基蛋白基因有15個(gè)（圖5-C），核糖體小亞基蛋白基因有9個(gè)（圖5-D）。值得一提的是，大亞基L9、L25p、L27、L31的表達(dá)量是菌絲期的數(shù)十倍。（2）共有27個(gè)核糖體蛋白基因的表達(dá)量只在孢子期或菌核期單一時(shí)期上調(diào)，且存在顯著差異（P＜0.05）。有12個(gè)基因的表達(dá)量只在孢子期出現(xiàn)上調(diào)（圖6-A），有15個(gè)基因的表達(dá)量只在菌核期出現(xiàn)上調(diào)（圖6-B）。有趣的是，這15個(gè)只在菌核期表達(dá)上調(diào)的基因在菌絲期、孢子期的表達(dá)量都沒有明顯的差異。

圖4 差異表達(dá)基因在不同時(shí)期的分布

此外，與菌絲期相比，L13、S0在孢子期、菌核期的表達(dá)量均有所降低，且存在顯著差異（P＜0.05）。雖然L17、S2、S10在菌絲期、孢子期的表達(dá)量沒有明顯差異，但在菌核期的表達(dá)量卻有所降低，且存在顯著差異（P＜0.05）（圖7）。除了這5個(gè)基因之外，L2、L5、L7、L8、L12、S3、S6等7個(gè)基因在孢子期表達(dá)上調(diào)，但是在菌核期明顯下調(diào)，且存在顯著差異（P＜0.05）。

2.3 黃曲霉核糖體蛋白基因功能富集分析

圖5 孢子期和菌核期表達(dá)量均上調(diào)的核糖體蛋白基因的表達(dá)分析

圖6 孢子期或菌核期表達(dá)量上調(diào)的核糖體蛋白基因的表達(dá)分析

圖7 表達(dá)量下調(diào)的核糖體蛋白基因的表達(dá)分析

對(duì)黃曲霉核糖體蛋白基因進(jìn)行GO分類，得到包括分子功能，細(xì)胞組分和生物過程3部分，共9個(gè)類別的結(jié)果（表1）?？偣哺患玫?種分子功能，即結(jié)構(gòu)分子活性功能（6個(gè)基因）和結(jié)合功能的（3個(gè)基因），其中S15既具有結(jié)構(gòu)分子活性又具有結(jié)合功能。富集得到包含細(xì)胞、細(xì)胞部分、大分子復(fù)合物、細(xì)胞器和細(xì)胞器部分的5種細(xì)胞組分，其中L17、S0、S1、S15、S20在這5種細(xì)胞組分中均有出現(xiàn)。富集得到包括細(xì)胞過程和代謝過程在內(nèi)的2種生物過程，P1、P2、L12、L21、L27、L34、S12、S24均參與這2種生物過程。值得注意的是，L21在所得到的分類中均有出現(xiàn)，而S15同時(shí)出現(xiàn)在分子功能和細(xì)胞組分的分類中。這暗示上述兩種核糖體蛋白可能具有較為重要的作用。

3 討論

核糖體蛋白作為核糖體的主要組成成分，除了在細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)生物合成中發(fā)揮著重要作用外，還具有其他的核糖體外生物學(xué)功能。為了探究黃曲霉核糖體蛋白與其生長(zhǎng)發(fā)育之間的關(guān)系，我們利用熒光定量RT-PCR對(duì)黃曲霉菌絲期、孢子期、菌核期的74個(gè)核糖體蛋白基因的表達(dá)量進(jìn)行分析，結(jié)果表明在黃曲霉生長(zhǎng)發(fā)育的不同時(shí)期，核糖體蛋白基因的表達(dá)量存在明顯差異。

熒光定量RT-PCR結(jié)果表明，以菌絲期作為參照，共有54個(gè)核糖體蛋白基因的表達(dá)量在孢子期出現(xiàn)上調(diào)，在菌核期表達(dá)量上調(diào)的核糖體蛋白基因也有57個(gè)，且都存在顯著差異（P＜0.05）。引起這一現(xiàn)象的原因可能是黃曲霉完成其初始生長(zhǎng)階段，以孢子的形成為代表的發(fā)育階段開始進(jìn)行，菌體的發(fā)育及代謝的增多需要多種效應(yīng)基因的響應(yīng)，因而在孢子期和菌核期表達(dá)量上調(diào)的基因數(shù)量增多。如GO功能分析得到的分子功能中發(fā)揮結(jié)合功能的L1、L9、S15的表達(dá)量在孢子期或菌核期出現(xiàn)上調(diào)，這些核糖體蛋白的增多能夠結(jié)合rRNA形成更多的核糖體來發(fā)揮功能。參與細(xì)胞過程和代謝過程的P1、P2、L12、L21、L27、L34、S12、S24的表達(dá)量在孢子期或菌核期也出現(xiàn)上調(diào)。此外，有研究表明糖體蛋白L11、L23、S7能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［18-20］，這3個(gè)基因的表達(dá)量在黃曲霉的孢子期和菌核期均出現(xiàn)上調(diào)，可能與菌體的逐漸衰老凋亡有關(guān)。

表1 黃曲霉核糖體蛋白基因GO分類

與菌絲期相比，有2個(gè)核糖體蛋白基因的表達(dá)量在孢子期是下調(diào)的，而到了菌核時(shí)期表達(dá)量下調(diào)的核糖體蛋白基因有12個(gè)。引起這一變化的原因可能是隨著發(fā)育的進(jìn)行菌體內(nèi)活性氧水平逐漸升高，高水平的活性氧促進(jìn)了菌核的形成，但菌體中的氧化應(yīng)激引起了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，在核糖體蛋白基因的表達(dá)上表現(xiàn)出效應(yīng)［21-22］，因而使得在表達(dá)的核糖體蛋白基因減少。此外，有實(shí)驗(yàn)表明核糖體蛋白L7的表達(dá)量下調(diào)明顯與細(xì)胞的衰老有關(guān)［23］。黃曲霉進(jìn)入菌核期后，核糖體蛋白L7的表達(dá)量出現(xiàn)明顯下調(diào)，可能與該時(shí)期菌體的衰老有關(guān)。李紅艷［24］發(fā)現(xiàn)核糖體蛋白S3的表達(dá)減少導(dǎo)致細(xì)胞凋亡而引起果蠅幼蟲發(fā)育的遲緩。當(dāng)黃曲霉進(jìn)入生長(zhǎng)發(fā)育的孢子期，核糖體蛋白S3的表達(dá)量明顯比菌絲期上調(diào)，而進(jìn)入生長(zhǎng)發(fā)育緩慢的菌核期后，核糖體蛋白S3的表達(dá)量明顯下調(diào)，暗示了核糖體蛋白S3在果蠅和黃曲霉中可能發(fā)揮相同的作用。

用可引起DNA損傷的重金屬鎘處理香魚肝細(xì)胞，熒光定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明核糖體蛋白P0的表達(dá)增加，表明核糖體蛋白P0與DNA的損傷修復(fù)有關(guān)［25］。黃曲霉進(jìn)入菌核期后，核糖體蛋白P0的表達(dá)量明顯上調(diào)，可能是這一時(shí)期菌體中高水平的活性氧引起DNA的損傷，因而使得具有修復(fù)功能的蛋白P0的表達(dá)量上調(diào)。在應(yīng)激條件下，去乙酰化酶SirT1可以增強(qiáng)細(xì)胞的自我修復(fù)，延長(zhǎng)細(xì)胞壽命，而核糖體蛋白L13可以結(jié)合SirT1，促進(jìn)其泛素化降解［13］。在黃曲霉的孢子期和菌核期，核糖體蛋白L13的表達(dá)量逐漸出現(xiàn)下調(diào)，可能與響應(yīng)應(yīng)激及延長(zhǎng)菌體壽命有關(guān)。

雖然本研究從轉(zhuǎn)錄水平證實(shí)了黃曲霉核糖體蛋白與其生長(zhǎng)發(fā)育之間存在著緊密聯(lián)系，但每個(gè)核糖體蛋白在生長(zhǎng)發(fā)育過程中的具體作用還有待進(jìn)一步的鑒定。

4 結(jié)論

本研究通過對(duì)黃曲霉菌絲期、孢子期、菌核期的74個(gè)核糖體蛋白基因的表達(dá)量分析發(fā)現(xiàn)，沒有一個(gè)被檢測(cè)的核糖體蛋白基因的表達(dá)量在三個(gè)時(shí)期都是恒定的。分析結(jié)果表明在孢子期參與生命活動(dòng)的核糖體蛋白數(shù)目最多，菌核期次之，菌絲期最少。對(duì)黃曲霉核糖體蛋白基因進(jìn)行GO功能分析表明，9個(gè)基因富集于2種分子功能，10個(gè)基因富集于5種細(xì)胞組分，有8個(gè)基因參與到細(xì)胞過程和代謝過程的生物過程中?？梢姾颂求w蛋白與黃曲霉的生長(zhǎng)發(fā)育具有緊密聯(lián)系，而其在生長(zhǎng)發(fā)育中具體的調(diào)控機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究。

［1］ Scheidegger KA, Payne GA. Unlocking the secrets behind secondary metabolism：A review ofAspergillus flavusfrom pathogenicity to functional genomics［J］. Journal of Toxicology-Toxin Reviews,2003, 22（2-3）：423-459.

［2］ Amaike S, Keller NP.Aspergillus flavus［J］. Annu Rev Phytopathol, 2011, 49：107-133.

［3］ Steinbach WJ. Pediatric aspergillosis：disease and treatment differences in children［J］. Pediatr Infect Dis J, 2005, 24（4）：358-364.

［4］ Fountain JC, Scully BT, Ni X, et al. Environmental influences on maize-Aspergillus flavusinteractions and aflatoxin production［J］.Front Microbiol, 2014, 5：40.

［5］ 羅自生, 秦雨, 徐艷群, 等. 黃曲霉毒素的生物合成、代謝和毒性研究進(jìn)展［J］. 食品科學(xué), 2015, 36（3）：250-257.

［6］ 王后苗, 廖伯壽, 雷永, 等. 黃曲霉菌主要真菌毒素次級(jí)代謝與調(diào)控的研究進(jìn)展［J］. 微生物學(xué)通報(bào), 2014, 41（7）：1425-1438.

［7］ 勞文艷, 林素珍. 黃曲霉毒素對(duì)食品的污染及危害［J］. 北京聯(lián)合大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版, 2011, 25（1）：64-69.

［8］ Roze LV, Hong SY, Linz JE. Aflatoxin biosynthesis：current frontiers［J］. Annu Rev Food Sci Technol, 2013, 4 ：293-311.

［9］ 沈青山, 周威, 莫海珍, 等. 黃曲霉毒素污染控制的研究進(jìn)展［J］. 食品科學(xué) , 2016, 37（09）：237-243.

［10］ Cary JW, Harris-Coward PY, Ehrlich KC, et al. NsdC and NsdD affectAspergillus flavusmorphogenesis and aflatoxin production［J］. Eukaryot Cell, 2012, 11（9）：1104-1111.

［11］Chang PK, Scharfenstein LL, Luo M, et al. Loss of msnA, a putative stress regulatory gene, inAspergillus parasiticusandAspergillus flavusincreased production of conidia, aflatoxins and kojic acid［J］. Toxins（Basel）, 2011, 3（1）：82-104.

［12］ 嚴(yán)海燕, 宗成志, 馬國(guó)華, 等. 核糖體蛋白L41與黃曲霉抗性的關(guān)系［J］. 華北農(nóng)學(xué)報(bào), 2011, 26（6）：16-19.

［13］ 鄭怡. 核糖體蛋白L13與去乙酰化酶SirT1之間的關(guān)系及其生物學(xué)功能的研究［D］. 上海：華東師范大學(xué), 2013.

［14］ Chang K, Georgianna D, Heber S, et al. Detection of alternative splice variants at the proteome level inAspergillus flavus［J］. J Proteome Res, 2010, 9（3）：1209-1217.

［15］ Georgianna DR, Hawkridge AM, Muddiman DC, et al. Temperaturedependent regulation of proteins inAspergillus flavus：whole organism stable isotope labeling by amino acids［J］. J Proteome Res, 2008, 7（7）：2973-2979.

［16］ Chang PK, Scharfenstein LL, Mack B, et al. Deletion of theAspergillus flavusorthologue ofA. nidulansfluGreduces conidiation and promotes production of sclerotia but does not abolish aflatoxin biosynthesis［J］. Appl Environ Microbiol, 2012, 78（21）：7557-7563.

［17］ Livak KJ, Schmittgen TD. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2（-Delta Delta C（T））Method［J］. Methods, 2001, 25（4）：402-408.

［18］ Calvo AM, Cary JW. Association of fungal secondary metabolism and sclerotial biology［J］. Front Microbiol, 2015, 6：62.

［19］ Zhang Y, Wolf GW, Bhat K, et al. Ribosomal protein L11 negatively regulates oncoprotein MDM2 and mediates a p53-dependent ribosomal-stress checkpoint pathway［J］. Mol Cell Biol, 2003, 23（23）：8902-8912.

［20］ Zhang Y, Shi Y, Li X, et al. Inhibition of the p53-MDM2 interaction by adenovirus delivery of ribosomal protein L23 stabilizes p53 and induces cell cycle arrest and apoptosis in gastric cancer［J］. J Gene Med, 2010, 12（2）：147-156.

［21］ Chen D, Zhang Z, Li M, et al. Ribosomal protein S7 as a novel modulator of p53-MDM2 interaction：binding to MDM2,stabilization of p53 protein, and activation of p53 function［J］.Oncogene, 2007, 26（35）：5029-5037.

［22］ Georgiou CD, Patsoukis N, Papapostolou I, et al. Sclerotial metamorphosis in filamentous fungi is induced by oxidative stress［J］. Integr Comp Biol, 2006, 46（6）：691-712.

［23］ Malhotra JD, Kaufman RJ. Endoplasmic reticulum stress and oxidative stress：a vicious cycle or a double-edged sword？［J］.Antioxid Redox Signal, 2007, 9（12）：2277-2293.

［24］ Seshadri T, Uzman J, Oshima J, et al. Identification of a transcript that is down-regulated in senescent human fibroblasts. Cloning,sequence analysis, and regulation of the human L7 ribosomal protein gene［J］. J Biol Chem, 1993, 268（25）：18474-18480.

［25］ 李紅艷. 核糖體蛋白S3表達(dá)減少對(duì)果蠅發(fā)育的影響［J］. 重慶師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版, 2014, 31（3）：21-25.

［26］ Lu X, Chen J, Huang Z, et al. Influence of acute cadmium exposure on the liver proteome of a teleost fish, ayu（Plecoglossus altivelis）［J］. Mol Biol Rep, 2012, 39（3）：2851-2859.