李淑貞，楊曉暉，崔茂香，張?zhí)m蘭

(滄州醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，河北 滄州 061001)

糖尿病性心肌病(DCM)是一種獨(dú)立于冠心病、高血壓性心臟病、先天性心臟病和其他種類心臟病之外的特異性心臟病變，與糖尿病患者心力衰竭的高發(fā)生率和高病死率密切相關(guān)[1]，因此DCM的發(fā)病機(jī)制及防治成為大家共同關(guān)注的問(wèn)題。通絡(luò)玉液湯是在玉液湯、生脈散原方基礎(chǔ)上加減化裁而成，具有益氣養(yǎng)陰、活血通絡(luò)之效。本實(shí)驗(yàn)采用高脂高糖飲食+小劑量鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射方法復(fù)制與臨床特征相似的DCM大鼠模型，通過(guò)心功能與氧化指標(biāo)的觀察,探討了通絡(luò)玉液湯對(duì)DCM的治療作用及其可能機(jī)制，旨在為臨床用藥提供理論與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)資料

1.1藥物及試劑 通絡(luò)玉液湯(生曬參、生黃芪、生山藥、麥冬、知母、花粉、葛根、五味子、雞內(nèi)金等)中藥飲片均購(gòu)自滄州同仁堂藥店。浸泡，煎煮、濃縮成2.5 g生藥/mL的液體；鹽酸苯那普利片(商品名:洛汀新)，北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)； STZ，購(gòu)自美國(guó)Sigma公司； 血糖、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒均購(gòu)自南京建成生物制品研究所。

1.2動(dòng)物 SPF級(jí)SD雄性大鼠[中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號(hào)：SCXK-(軍)2009-003]48只，體質(zhì)量150～180 g。

1.3分組、造模及干預(yù) 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng) 1 周后，隨機(jī)分為正常組、模型組、苯那普利組、通絡(luò)玉液湯組，每組12只。除正常組外，其余組均參考董世芬等[2]方法，并根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，先用高脂高糖飼料(20%蔗糖、10%豬油、2.5%膽固醇和67.5%基礎(chǔ)飼料)喂養(yǎng)4周，然后一次性腹腔注射1% STZ 30 mg/kg，72 h后測(cè)大鼠空腹血糖(FPG)，大于11.1 mmol/L認(rèn)為2型糖尿病模型成功，然后持續(xù)高脂高糖飼料喂養(yǎng)6周即成DCM模型。正常組大鼠一直采用基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，等量枸櫞酸鈉緩沖液(pH=4.4)代替STZ腹腔注射，不采血。造模成功后，苯那普利組給予苯那普利1 mg/(kg·d)灌胃，通絡(luò)玉液湯組給予通絡(luò)玉液湯煎劑25 g/(kg·d)灌胃，正常組和模型組給予相應(yīng)劑量的生理鹽水灌胃，均連續(xù)8周。

1.4觀察指標(biāo)

1.4.1左心室功能 實(shí)驗(yàn)結(jié)束，各組大鼠采用10%水合氯醛4 mL/kg腹腔注射麻醉，備皮仰臥位固定，進(jìn)行彩色多普勒超聲心動(dòng)圖檢查，測(cè)量左心室收縮末期內(nèi)徑(LVISD)、左心室舒張末期內(nèi)徑(LVIDD)、射血分?jǐn)?shù)(EF)、短軸縮短率(FS)。

1.4.2血生化指標(biāo) 各組動(dòng)物禁食12 h，由頸總動(dòng)脈取血2 mL，制備血清，-20 ℃保存。采用葡萄糖氧化酶法測(cè)定FPG，全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定MDA及SOD水平。

1.4.3左室質(zhì)量指數(shù)(LVMI)和心臟質(zhì)量指數(shù)(HWI) 大鼠開胸快速取出心臟，用4 ℃預(yù)冷生理鹽水沖洗后稱量全心、左心室質(zhì)量，計(jì)算LVMI[左心室質(zhì)量(mg)/體質(zhì)量(g)]和HWI[心臟質(zhì)量(mg)/體質(zhì)量(g)]。

1.4.4心肌組織形態(tài)學(xué) 取心肌組織以4%多聚甲醛固定，石蠟切片，常規(guī)HE染色，光鏡下觀察心肌組織的病理變化。

2 結(jié) 果

2.1各組大鼠左心室功能比較 模型組大鼠LVISD及LVIDD均明顯高于正常組(P均<0.05)，EF和FS均明顯低于正常組(P均<0.05)；通絡(luò)玉液湯組和苯那普利組LVISD均明顯低于模型組(P均<0.05)，EF和FS均明顯高于模型組(P均<0.05)，但2組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見表1。

表1 各組大鼠左心室功能比較

注：①與正常組比較，P<0.05；②與模型組比較，P<0.05。

2.2各組大鼠FPG、SOD及MDA水平比較 模型組大鼠FPG、MDA水平均明顯高于正常組(P均<0.05)，SOD水平明顯低于正常組(P<0.05)；通絡(luò)玉液湯組FPG明顯低于模型組和苯那普利組(P均<0.05)；通絡(luò)玉液湯組和苯那普利組血清MDA水平均明顯低于模型組(P均<0.05)，SOD水平明顯高于模型組(P均<0.05)，且通絡(luò)玉液湯組改善程度均明顯高于苯那普利組(P均<0.05)。見表2。

2.3各組大鼠LVMI、HWI比較 模型組大鼠LVMI、HWI均明顯高于正常組(P均<0.05)；通絡(luò)玉液湯組和苯那普利組大鼠LVMI、HWI均明顯低于模型組(P均<0.05)，且通絡(luò)玉液湯組LVMI、HWI均明顯低于苯那普利組(P均<0.05)。見表3。

2.4各組大鼠心肌組織病理學(xué)變化 光鏡下觀察：正常組大鼠心肌纖維排列整齊，結(jié)構(gòu)清晰，形態(tài)正常，細(xì)胞外間質(zhì)較少，可見少量成纖維細(xì)胞，見圖1。模型組大鼠心肌纖維排列紊亂，心肌細(xì)胞腫脹、變性，局灶性壞死，細(xì)胞間隙增大，可見成纖維細(xì)胞增生，并有炎細(xì)胞浸潤(rùn)，見圖2；通絡(luò)玉液湯組和苯那普利組大鼠心肌細(xì)胞邊界清楚，結(jié)構(gòu)基本正常，纖維紊亂和細(xì)胞腫脹明顯減輕，見圖3和圖4。

表2 各組大鼠FPG、SOD及MDA水平比較

注：①與正常組比較，P<0.05；②與模型組比較，P<0.05；③與苯那普利組比較，P<0.05。

表3 各組大鼠LVMI、HWI比較

注：①與正常組比較，P<0.05；②與模型組比較，P<0.05；③與苯那普利組比較，P<0.05。

圖1 正常組大鼠心肌組織光鏡下表現(xiàn)(HE，×400)

圖2 模型組大鼠心肌組織光鏡下表現(xiàn)(HE，×400)

3 討 論

流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)，估計(jì)到2025年全世界糖尿病患病人數(shù)將達(dá)到3億，其中2型糖尿病患者占糖尿病總數(shù)的90%～95%[3]，而DCM是糖尿病患者主要的遠(yuǎn)期并發(fā)癥及致死原因之一。DCM的發(fā)病機(jī)制受多方面因素影響，包括氧化應(yīng)激、炎癥、內(nèi)皮功能障礙、代謝紊亂、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)異常、間質(zhì)纖維化等。越來(lái)越多的證據(jù)表明，糖尿病時(shí)高血糖誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)是糖尿病心血管并發(fā)癥的主要危險(xiǎn)因素[4-5]。長(zhǎng)期高血糖環(huán)境下抗氧化酶SOD水平下降，機(jī)體對(duì)氧自由基的清除能力大大減弱，從而加重了氧化應(yīng)激，氧化應(yīng)激引起心肌脂質(zhì)過(guò)氧化損傷，對(duì)心肌細(xì)胞內(nèi)包括蛋白質(zhì)、脂類與核酸等生物大分子造成氧化損傷，導(dǎo)致生物膜溶解和細(xì)胞凋亡，引起心肌組織的結(jié)構(gòu)和功能嚴(yán)重受損，進(jìn)而導(dǎo)致DCM的發(fā)生[6]。DCM首先表現(xiàn)為單純性的心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變或者伴隨左心室擴(kuò)大、肥厚及質(zhì)量增加，舒張功能障礙；進(jìn)一步發(fā)展出現(xiàn)心肌細(xì)胞肥大、凋亡、壞死和纖維化，逐漸加重，出現(xiàn)心臟收縮、舒張及射血功能明顯下降，導(dǎo)致心肌缺血及心力衰竭。測(cè)定MDA以及SOD水平可反映心肌細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化程度。

圖3 苯那普利組大鼠心肌組織光鏡下表現(xiàn)(HE，×400)

圖4 通絡(luò)玉液湯組大鼠心肌組織光鏡下表現(xiàn)(HE，×400)

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠LVESD及LVEDD明顯升高，EF和FS明顯下降，表明心臟收縮、舒張及射血功能明顯降低；LVMI、HWI明顯增加，提示出現(xiàn)心肌肥厚；光鏡下發(fā)現(xiàn)大鼠心肌細(xì)胞腫脹、變性、壞死及心肌間質(zhì)改變，說(shuō)明DCM模型復(fù)制成功；FPG、MDA水平明顯升高，

SOD水平明顯降低，說(shuō)明糖尿病心肌病變與高血糖誘發(fā)的氧化應(yīng)激有關(guān)，與文獻(xiàn)[7]報(bào)道相符。而通絡(luò)玉液湯組大鼠LVISD、FPG、MDA水平、LVMI、HWI明顯下降，SOD水平、EF和FS明顯升高，心肌病理學(xué)改變減輕，說(shuō)明通絡(luò)玉液湯可有效降低血糖，并通過(guò)抗氧化應(yīng)激作用來(lái)減輕DCM心肌損傷，對(duì)DCM大鼠心臟起到了明顯保護(hù)作用。

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