不穩(wěn)定型心絞痛患者血管緊張素基因多態(tài)性與同型半胱氨酸的相關(guān)性研究

邵靜 張華敏

摘要 目的：分析與探討冠心病不穩(wěn)定型心絞痛（UA）患者血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）基因多態(tài)性與血清同型半胱氨酸（HCY）水平之間的關(guān)系。方法：收治老年病科住院患者96例作為試驗(yàn)組，對(duì)照組為同期健康志愿者96例。對(duì)比兩組間血清HCY水平與基因I/D多態(tài)性。并根據(jù)PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果分Ⅱ型純合子、ID型雜合子、DD型純合子3組。結(jié)果：試驗(yàn)組ACE基因的DD基因型頻率高于對(duì)照組；相比于對(duì)照組患者，試驗(yàn)組的血清HCY水平明顯上升；Logistic回歸顯示，冠心病風(fēng)險(xiǎn)增加和血清HCY水平的上升存在直接相關(guān)性。結(jié)論：ACE基因I/D多態(tài)性中DD及ID基因型是CHD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，隨DD基因型頻率的增加，冠心病風(fēng)險(xiǎn)加大；CHD患者血清HCY水平較正常人明顯升高，其中UA患者升高更加顯著。提示血清HCY水平與ACE位點(diǎn)的基因型均共同與冠心病，尤其是不穩(wěn)定型心絞痛有良好的相關(guān)性。

關(guān)鍵詞 ACE基因多態(tài)性；不穩(wěn)定性心絞痛；血清HCY水平

UA屬于冠心病中急性冠脈綜合征的常見類型。ACE（I/D）基因多態(tài)性最先被證實(shí)與心肌梗死的發(fā)生有關(guān)；缺失型純合子罹患CHD的危險(xiǎn)性明顯增加，并在參與HCY代謝過程起關(guān)鍵作用。有研究顯示，提高血清HCY水平會(huì)對(duì)血小板所介導(dǎo)平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生具有刺激性作用，由此就會(huì)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞造成損傷，進(jìn)而引發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化。本研究分析與探討ACE基因多態(tài)性與UA及血清HCY水平之間的關(guān)系，以期為預(yù)測(cè)CHD的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)、危險(xiǎn)分層和ACE基因多態(tài)性的推廣提供重要依據(jù)。

資料與方法

收治老年病科住院患者96例作為試驗(yàn)組，對(duì)照組為同期健康志愿者96例。試驗(yàn)組男58例，女38例；年齡60～71歲，平均（64.8±5.22）歲；病程4.7～ 8.2年，平均（6.42±2.05）年；體重指數(shù)（BMI）（28.15±4.87）kg/m2；收縮壓（125.58±15.09）mmHg，舒張壓（73.56±10.21）mmHg。對(duì)照組男59例，女37例；年齡40～ 61歲，平均（50.5±10.05）歲；BMI（23.73±2.28）kg/m2；收縮壓（110.65±13.56）mmHg，舒張壓（70.58±7.74）mmHg。

診斷標(biāo)準(zhǔn)：本研究患者通過冠脈造影、冠脈CTA以及平板運(yùn)動(dòng)結(jié)果證實(shí)CHD。具體參考標(biāo)準(zhǔn)為《非ST段抬高心肌梗死與不穩(wěn)定性心絞痛診療指南》。

納入標(biāo)準(zhǔn)：與以上診斷標(biāo)準(zhǔn)相符合，研究對(duì)象簽署知情同意書，自愿參與研究。

排除標(biāo)準(zhǔn)：存在心肌病、先天性心臟病、肝腎疾病、心臟瓣膜病、免疫性疾病、惡性腫瘤、妊娠或哺乳期等。

方法：①HCY測(cè)定：由病房護(hù)士于清晨抽取兩組人員靜脈血5 mL檢測(cè)HCY水平，采用SynchronCX7全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)，應(yīng)注意在采集血液樣本之后及時(shí)進(jìn)行血漿分離，將其制作成無蛋白濾液，同時(shí)在測(cè)定前用巰基試劑確保二硫鍵打開。因?yàn)镠CY以多種形式存在于血漿內(nèi)部，必須對(duì)結(jié)合型、還原型以及氧化型3種HCY組分進(jìn)行檢測(cè)，由河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行具體操作。②ACE（I/D）多態(tài)性檢測(cè)：同時(shí)抽取兩組外周靜脈血2 mL，應(yīng)用DNA提取試劑盒將患者DNA提取出來，選擇PCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)ACE基因的進(jìn)一步擴(kuò)增。操作具體反應(yīng)條件為5 min 95℃的預(yù)變性，循環(huán)數(shù)30個(gè)，各循環(huán)變性時(shí)間45 s，反映結(jié)束前進(jìn)行10 min的延伸，通過瓊脂糖凝膠實(shí)施電泳檢測(cè)。目的基因片段經(jīng)PCR擴(kuò)增后有存在287 bp的DNA片斷則為插入（I）型，即I等位基因，缺失287 bp的DNA片斷則為缺失（D）型，即D等位基因。PCR產(chǎn)物電泳后條帶長度490 kb，表示存在插入序列，為Ⅱ型；目的條帶長度190 kb，表示存在缺失序列，即DD型純合子；若條帶長度同時(shí)具有190 kb又有490 kb則表示同時(shí)存在插入、缺失序列，即ID雜合子。③冠狀動(dòng)脈斑塊硬化程度評(píng)定：采用德國西門子64排螺旋CT（SOMATOMDefinition）對(duì)冠狀動(dòng)脈斑塊進(jìn)行檢測(cè)，靜息心率> 70次/min患者，檢查前30 min口服50～100 mg倍他樂克，將其心率控制在<70次/mm。完成掃描后，由工作站（MMWP9594）分析。基于原始橫斷位圖像，通過相關(guān)后處理軟件實(shí)施圖像重建，其中包括最大密度投影、曲面重組、容積再現(xiàn)以及多平面重組，多角度重建患者病變部位，對(duì)患者管腔中斑塊特性進(jìn)行分析。所有圖像由兩名有經(jīng)驗(yàn)的放射科醫(yī)師進(jìn)行分析。根據(jù)CT值（14±26）HU、（91±21）HU、（419±194）HU將粥樣斑塊區(qū)分為軟斑塊、中等密度斑塊和鈣化斑塊。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS 20.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算CHD組及對(duì)照組Ⅱ、ID和DD 3種基因型的頻數(shù)，應(yīng)用X2檢驗(yàn)對(duì)兩組間基因型及等位基因的頻率進(jìn)行比較；兩組間年齡、體重指數(shù)、血清HCY水平等均數(shù)比較用t檢驗(yàn)；采用Logistic回歸模型逐步分析CHD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素；P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

兩組患者ACE（I/D）多態(tài)性基因型及等位基因頻率比較：兩組間等位基因頻率分布和患者ACE基因型間的數(shù)據(jù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（X2=7.059，P=0.008）。此外，UA患者的D等位基因頻率、DD基因型明顯比健康人群高。見表1。

試驗(yàn)組與對(duì)照組血清HCY水平比較：與對(duì)照組患者相比，冠心病組患者血清HCY水平比較高，兩組數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且以UA組HCY水平增高較明顯。見表2。

利用Logistic回歸分析顯示，冠心病風(fēng)險(xiǎn)增加和血清HCY水平上升具有直接相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表3。

討論

UA發(fā)病機(jī)制在于斑塊本身具有易損性，斑塊破裂出血引發(fā)人體內(nèi)血小板局部的黏附聚集，進(jìn)而形成誘發(fā)性腔內(nèi)堵塞性血栓，造成心肌嚴(yán)重供血不足。近些年，UA的發(fā)病率逐漸升高，發(fā)病年齡漸趨年輕化。其發(fā)病因素大致分為環(huán)境、遺傳兩方面。在探索UA遺傳因素方面，關(guān)鍵在于遺傳影響脂代謝機(jī)制。20世紀(jì)70年代后，很多研究發(fā)現(xiàn)，HCY水平升高和AS相關(guān)性極大，其發(fā)病機(jī)制可能為引起血管內(nèi)皮損傷，斑塊堆積，促進(jìn)血管收縮及血栓形成。血清HCY水平越高，則冠脈病變?cè)街?。另一方面，腎素一血管緊張素系統(tǒng)在心血管疾病的病理生理機(jī)制中發(fā)揮重要的作用，ACE基因DD型可能為CHD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。目前發(fā)現(xiàn)ACE基因?qū)π难艿挠绊懽饔冒▽?dǎo)致血管內(nèi)皮增生及血管收縮、導(dǎo)致血管內(nèi)緩激肽水平降解，從而不能發(fā)揮擴(kuò)血管作用。

本研究也對(duì)以上觀點(diǎn)進(jìn)行了證實(shí)，因此冠心病的發(fā)生和血清HCY、ACE基因DD基因多態(tài)性的相關(guān)性極為密切，測(cè)定以上兩項(xiàng)指標(biāo)便于及時(shí)預(yù)防CHD和病癥的危險(xiǎn)分層，將血清HCY水平與ACE基因DD型基因多態(tài)性作為早期篩查CHD時(shí)的輔助指標(biāo)，其臨床應(yīng)用前景非常廣闊。但是時(shí)間倉促，本研究尚缺乏完善性，為進(jìn)一步明確血清HCY水平和ACE基因型多態(tài)性為冠心病發(fā)病的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素，必須深入研究，擴(kuò)大樣本數(shù)量以降低實(shí)驗(yàn)偏倚率，從而獲取更多有價(jià)值的信息，此為我們接下來的重點(diǎn)研究方向。