葛保華 楊長(zhǎng)江 徐 梅 董翠梅 宇 凌

（1.山東省曹縣孫老家鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站；2.山東省菏澤市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

糞便臭味是其中沒(méi)有徹底消化的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（主要是蛋白質(zhì)等）產(chǎn)生的，這類(lèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被統(tǒng)稱為臭味前提物。本研究希望通過(guò)添加自制的中草藥-微生物合劑來(lái)提高肉雞消化功能，從而達(dá)到減少臭味前提物產(chǎn)生的目的。

1 自制中草藥除臭劑的加工方法

1.1 自制中草藥制劑藥液濾取

按一定比例稱取檳榔、焦三仙、蒼術(shù)、陳皮、厚樸、甘草共計(jì)200g。用1 260mL蒸餾水浸泡藥材50min，然后先用大火煮沸，再改用文火煎熬30min，一煎后將其倒入事先準(zhǔn)備好的玻璃瓶中，再向砂鍋中倒入540mL的蒸餾水準(zhǔn)備二煎，大火煮沸后文火煎熬25min后，倒入一煎的玻璃瓶中，置于冰箱中密封保存。

1.2 自制中草藥制劑可溶性粉的制作流程

將煎熬后的中藥分裝在5個(gè)大型培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿中添加200mL藥液，將其置于超低溫冰箱中迅速冰凍。將完全冰凍的中藥置于真空冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行干燥。冷凍干燥后收集凍干后的中藥即為可溶性粉劑。煎熬提取后共得中草藥可溶性粉劑50g。

2 飲水中添加自制中草藥除臭劑對(duì)雞舍氨氣影響測(cè)定試驗(yàn)

2.1 自制中草藥制劑飼喂肉雞的處理

將從菏澤市牡丹區(qū)水建農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)購(gòu)得的肉雞用安普霉素粉劑連續(xù)飼喂3d，防止各種敏感菌所致的感染及病毒的侵襲。試驗(yàn)動(dòng)物的飼喂時(shí)間為7：00、12：00和17：00。

2.2 試驗(yàn)分組

將健康狀態(tài)良好的80只雞分為4組，每組20只。各組之間確保不相通，但要確保試驗(yàn)環(huán)境、飼料和飲水對(duì)試驗(yàn)結(jié)果無(wú)影響，各試驗(yàn)分組詳見(jiàn)表1。

表1 各組飲水中添加的中草藥粉劑的量

連續(xù)喂養(yǎng)7d后，采集健康肉雞分泌物對(duì)其氨氣進(jìn)行測(cè)定，隨機(jī)稱量肉雞分泌物30g置于100mL錐形瓶?jī)?nèi)，同時(shí)測(cè)定其氨氣濃度并記錄數(shù)據(jù)，測(cè)后立即用保鮮膜密封保存。置于37℃恒溫恒濕箱內(nèi)培養(yǎng)。間隔12h測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定60h并記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

2.3 各組雞舍氨氣測(cè)定試驗(yàn)結(jié)果

通過(guò)向肉雞飲水中添加不同量的中草藥粉，對(duì)其雞糞中的氨氣進(jìn)行測(cè)定得到的氨氣產(chǎn)生量，詳見(jiàn)表2。

表2 雞糞氨氣試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果（mg/L）

由表2可知，隨著雞飲水中添加自制中草藥可溶性粉劑的量的增加，各組相同時(shí)間段(同列)雞糞中氨氣的含量呈下降趨勢(shì)。試驗(yàn)組Ⅱ和試驗(yàn)組Ⅲ的降氨效果比試驗(yàn)組Ⅰ和對(duì)照組顯著有效，試驗(yàn)組Ⅲ與試驗(yàn)組Ⅱ的降氨效果差異不顯著，但試驗(yàn)組Ⅲ各時(shí)間段氨氣含量均比試驗(yàn)組Ⅱ低，因此自制中藥可溶性粉除臭劑劑的最佳添加量為0.05%。

3 自制中草藥制劑與除臭菌的關(guān)系

之前通過(guò)試驗(yàn)篩選確定了兩種微生物可以有效祛除肉雞糞便臭味，通過(guò)檢測(cè)公司測(cè)序鑒定這兩種微生物為：巨大芽孢桿菌和鞘氨醇單胞菌。

為了保證除臭菌能在自制中草藥制劑環(huán)境中正常生長(zhǎng)繁殖，并探索出二者最佳的比例，組成中草藥-微生物除臭合劑，特進(jìn)行如下研究。

3.1 自制中草藥制劑可溶性粉對(duì)除臭菌生長(zhǎng)的影響試驗(yàn)

圖1 自制中草藥可溶性粉對(duì)巨大芽孢桿菌生長(zhǎng)的影響

圖2 自制中草藥可溶性粉對(duì)鞘氨醇單胞菌生長(zhǎng)的影響

表2 陜南2013-2017年度畜禽養(yǎng)殖數(shù)量統(tǒng)計(jì)1（萬(wàn)頭、萬(wàn)只）

將制取的中草藥可溶性粉加入配制好的營(yíng)養(yǎng)瓊脂里，制成培養(yǎng)基，接種兩種除臭菌，于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 20h，觀察2種菌的生長(zhǎng)情況。

自制中草藥制劑對(duì)兩種除臭菌生長(zhǎng)的影響分別見(jiàn)圖1與圖2，兩圖上面3個(gè)培養(yǎng)皿為對(duì)照組，下面3個(gè)為實(shí)驗(yàn)組。

由圖1與圖2可知，巨大芽孢桿菌、鞘氨醇單胞菌在含自制中草藥可溶性粉的培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)更好，菌落形態(tài)更大。說(shuō)明自制中草藥可溶性粉對(duì)巨大芽孢桿菌、鞘氨醇單胞菌的生長(zhǎng)繁殖不僅沒(méi)有副作用，而且有促進(jìn)作用。

表3 除臭菌合劑、自制中草藥可溶性粉的不同添加量

3.2 自制中草藥制劑可溶性粉與篩選確定的除臭菌可溶性粉的添加量的研究

3.2.1 試驗(yàn)分組

為了探索出自制中草藥可溶性粉及之前經(jīng)試驗(yàn)篩選并鑒定的除臭菌巨大芽孢桿菌和鞘氨醇單胞菌可溶性粉合理的添加比，特設(shè)10個(gè)試驗(yàn)組，每組20只雞。每組雞采食相同的日糧，僅飲水中添加不同劑量的自制中草藥可溶性粉和除臭菌合劑可溶性粉。具體分組情況，詳見(jiàn)表3。

3.2.2 自制中草藥制劑可溶性粉與除臭菌合劑不同添加量降氨效果

飲水中添加自制中草藥可溶性粉、除臭菌合劑可溶性粉后7d后，采集雞糞放置到錐形瓶中，每間隔12h測(cè)定一次雞糞中氨氣濃度，以此結(jié)果確定中草藥-微生物除臭合劑最佳的組方。結(jié)果詳見(jiàn)表4。

由表4可知，組合Ⅴ與對(duì)照組、組合Ⅰ、組合Ⅱ、組合Ⅲ、組合Ⅳ（除 36 h 氨氣濃度外）差異極顯著（P＜0.01），與組合Ⅵ、組合Ⅶ、組合Ⅷ、組合Ⅸ差異不顯著（P＞0.05）。

表4 添加不同量的中草藥可溶性粉、除臭菌合劑粉劑后的氨氣濃度（ppm/L）

3.3 中草藥-微生物除臭合劑的效果研究

表4中Ⅴ組與Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ四組差異不顯著，但從成本角度考慮，Ⅸ組由于微生物與中藥用量均大成本較高，被淘汰出局。為進(jìn)一步確定微生物和中藥除臭劑的最佳組合，檢驗(yàn)中草藥-微生物除臭合劑的除臭效果及其氨除臭的機(jī)理，對(duì)以下四組的雞糞中氨氣、有機(jī)氮、銨態(tài)氮、硝態(tài)氮含量的進(jìn)行了測(cè)定，分組如表5。

3.3.1 糞中有機(jī)氮、銨態(tài)氮、硝態(tài)氮含量的測(cè)定方法

在飲水飼喂中草藥-微生物除臭合劑10d 后，從第11dd的8：00開(kāi)始計(jì)時(shí)，于0h、24h、48h、72h、96h收集對(duì)照組與組合1的雞糞，雞糞按固液比1：5加入一定量的超純水，搖勻，在溫度為0℃、轉(zhuǎn)速為150r/min 的條件下振蕩浸提1h，吸取2 mL原液于離心管中，在4℃的低溫條件下，以12 000 r/min的速度離心20 min，收集上清液。取50.0 mL 糞樣上清液備用，分別利用凱氏定氮法、靛酚藍(lán)法、酚二磺酸法測(cè)定雞糞中有機(jī)氮、銨態(tài)氮、硝態(tài)氮的含量。

3.3.2 糞中氨氣、有機(jī)氮、銨態(tài)氮、硝態(tài)氮含量的測(cè)定結(jié)果

測(cè)定結(jié)果比較結(jié)果如圖3顯示，通過(guò)飲水飼喂中草藥（0.05%）-微生物（0.2%）除臭合劑后，雞糞中有機(jī)氮含量明顯低于對(duì)照組（圖3A，P＜0.05）；新鮮雞糞中銨態(tài)氮含量升高，24h后銨態(tài)氮含量顯著下降（圖3B，P＜0.05）；硝態(tài)氮含量則明顯高于對(duì)照組（圖3C，P＜0.05）。

飼喂中草藥（0.05%）-微生物（0.2%）除臭合劑，可顯著降低雞糞中有機(jī)氮含量（A，P＜0.05），新鮮雞糞中銨態(tài)氮含量升高，24 h后銨態(tài)氮含量明顯下降（B，P＜0.05），提高硝態(tài)氮含量（C，P＜0.05）。

表5 糞中氨氣、有機(jī)氮、銨態(tài)氮、硝態(tài)氮含量的測(cè)定分組

4 結(jié)論

4.1 中草藥-微生物除臭合劑的最佳劑量

由表6可知，四個(gè)試驗(yàn)組六個(gè)時(shí)間點(diǎn)氨氣量均比對(duì)照組低。試驗(yàn)組1在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)氨氣含量均低于對(duì)照組和其他三個(gè)試驗(yàn)組。試驗(yàn)組1為中草藥-微生物除臭合劑為0.2%除臭菌可溶性粉加0.05%自制中草藥可溶性粉，為最佳組合劑量。

表6 飼喂除臭菌合劑后，氨氣的測(cè)定結(jié)果（ppm/L）

因此，通過(guò)以上研究確定，中草藥-微生物除臭合劑量為：0.2%除臭菌可溶性粉加0.05%自制中草藥可溶性粉，其中除臭菌合劑中微生物的最佳組合為巨大芽孢桿菌 1.5×106CFU/mL、鞘氨醇單胞菌 0.6×106CFU/mL。

圖3 雞糞中有機(jī)氮、銨態(tài)氮、硝態(tài)氮的含量變化圖

4.2 中草藥-微生物除臭合劑的除臭效果及機(jī)理

為探討微生物-中藥除臭合劑降氨機(jī)制，我們測(cè)定了雞糞中有機(jī)氮、銨態(tài)氮和硝態(tài)氮的含量。測(cè)定結(jié)果顯示，飼喂 0.25%中草藥-微生物除臭合劑后，雞糞中有機(jī)氮含量明顯低于對(duì)照組（P＜0.05）；新鮮雞糞中銨態(tài)氮含量略高于對(duì)照組，24h后銨態(tài)氮含量顯著下降（P＜0.05）；硝態(tài)氮含量則明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）。該結(jié)果表明，中草藥-微生物除臭合劑很可能在腸道的厭氧環(huán)境中，利用或促進(jìn)其他微生物利用有機(jī)氮作為氮源，將有機(jī)氮轉(zhuǎn)化成銨態(tài)氮，使雞糞中有機(jī)氮含量顯著下降。

中草藥飼料添加劑對(duì)畜禽消化、循環(huán)系統(tǒng)及內(nèi)分泌系統(tǒng)性能具有明顯的影響。本研究方中的焦三仙（山楂、麥芽和神曲）有健脾和胃以及舒肝化滯等功效，含多種酶類(lèi)和維生素，可以調(diào)節(jié)腸道功能，消除腸道病菌，可有助于提高胰液的分泌量，同時(shí)增加蛋白質(zhì)總量和淀粉酶活性，促進(jìn)食物的消化和消化系統(tǒng)吸收，有助于提高畜禽的食欲；蒼術(shù)具有祛濕健脾之功效，促進(jìn)氣血運(yùn)行；陳皮具有緩解腹脹、脾胃氣滯等癥狀的功效；甘草有類(lèi)似腎上腺皮質(zhì)激素樣作用，可抑制胃酸分泌過(guò)多，并有抗酸和緩解胃腸平滑肌痙攣?zhàn)饔?；檳榔具有殺蟲(chóng)，破積，降氣行滯，行水化濕的功效；厚樸具有行氣化濕、溫中止痛、降逆平喘的功效，對(duì)葡萄球菌、鏈球菌、赤痢桿菌、巴氏桿菌、霍亂弧菌有較強(qiáng)的抗菌作用。中草藥可調(diào)節(jié)胃液和消化酶的分泌，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)食物的消化吸收，從而增加了肉雞對(duì)含氮化合物和含硫化合物的消化吸收，進(jìn)而提高了微生物除臭劑對(duì)肉雞糞便的除臭效果。

在雞糞堆積過(guò)程中，銨態(tài)氮含量下降，可能的原因有兩個(gè)，一是隨著有機(jī)氮含量的減少，銨態(tài)氮的生成減少；二是中草藥-微生物除臭合劑自身或促進(jìn)其他微生物生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中利用了大量的銨態(tài)氮作為氮源，將銨態(tài)氮轉(zhuǎn)化為硝態(tài)氮，使24h后雞糞中銨態(tài)氮含量明顯下降（P＜0.05），硝態(tài)氮含量顯著升高（P＜0.05）。這些結(jié)果表明，飲水中添加篩選的除臭微生物在雞腸道的厭氧環(huán)境中可利用或促進(jìn)其他微生物利用有機(jī)氮和銨態(tài)氮（NH4+-N）作為氮源，使雞糞中有機(jī)氮和銨態(tài)氮含量顯著降低，并將銨態(tài)氮轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽（NO2--N）；在體外的有氧環(huán)境中可以將亞硝酸根轉(zhuǎn)化為硝酸根（NO3--N），有效降低雞糞中氨氣的產(chǎn)生，從而達(dá)到降氨除臭的效果。

參考文獻(xiàn)略