兒童和成人變應(yīng)性鼻炎患者血清YKL-40檢測(cè)及初步探討*

柳林 崔昕燕 薛華軍 吳中飛 程雷,3,4

變應(yīng)性鼻炎（allergic rhinitis,AR）又稱過敏性鼻炎，是特應(yīng)性個(gè)體接觸過敏原后主要由IgE介導(dǎo)的鼻黏膜非感染性炎癥性疾病，以噴嚏、流涕、鼻癢、鼻塞為主要癥狀，嚴(yán)重時(shí)可影響患者正常工作及生活[1，2]。中國(guó)人群AR的患病率在不同地區(qū)為3.9%～37.9%[3]，近年呈明顯增加的趨勢(shì)[4]。目前認(rèn)為AR的發(fā)病機(jī)制主要是持續(xù)的過敏原暴露激活特應(yīng)性個(gè)體Th2細(xì)胞應(yīng)答，導(dǎo)致Th1/Th2免疫反應(yīng)失衡，促進(jìn)肥大細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞及嗜酸粒細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞釋放炎性介質(zhì)，引起鼻黏膜的炎癥反應(yīng)癥狀。YKL-40可由多種細(xì)胞分泌，包括中性粒細(xì)胞、活化的巨噬細(xì)胞和分化晚期的巨噬細(xì)胞、分化的血管平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞等，它可誘導(dǎo)多種慢性炎癥性疾病的發(fā)生，例如骨關(guān)節(jié)炎、哮喘等[5-9]，還與肝纖維化、腸道惡性腫瘤有關(guān)[10，11]。已有文獻(xiàn)指出，血清YKL-40的含量在輕度和中-重度持續(xù)性AR患者的鼻黏膜中較正常人升高[12]。但針對(duì)不同年齡AR患者與YKL-40的關(guān)系國(guó)內(nèi)外尚未見報(bào)道，本次研究檢測(cè)兒童和成人AR患者血清中YKL-40的含量，分析探討如下。

資料與方法

1 研究對(duì)象

選取2017年5月～11月就診于南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科門診，符合納入標(biāo)準(zhǔn)的36例AR患者作為實(shí)驗(yàn)組，男18例，女18例，年齡9～52歲，平均（24.94±10.98）歲。其中＜18歲 13例，作為兒童患者組；≥18歲23例，作為成人患者組。另選取同時(shí)期在南京醫(yī)科大學(xué)附屬逸夫醫(yī)院進(jìn)行健康體檢的5例正常成人作為對(duì)照組，男3例，女2例，年齡 25～37歲，平均（30.8±4.58）歲。研究方案獲得南京醫(yī)科大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有參與研究者均自愿加入并簽署知情同意書。

2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

實(shí)驗(yàn)組納入標(biāo)準(zhǔn)：AR診斷符合“變應(yīng)性鼻炎診斷和治療指南（2015年，天津）[13]”，納入前常規(guī)行吸入物過敏原皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)及血清特異性IgE檢測(cè)。所有患者在受檢前2周內(nèi)均未服用任何藥物，檢測(cè)結(jié)果對(duì)屋塵螨和/或粉塵螨呈陽(yáng)性反應(yīng)。對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：體格檢查各項(xiàng)指標(biāo)均在正常范圍，近2個(gè)月內(nèi)未接受任何藥物和/或手術(shù)治療，無(wú)AR等變態(tài)反應(yīng)病史，吸入物過敏原皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)和血清特異性IgE檢測(cè)均為陰性。排除標(biāo)準(zhǔn)：不符合診斷標(biāo)準(zhǔn)及納入標(biāo)準(zhǔn)者；合并哮喘、濕疹、蕁麻疹等其他變應(yīng)性疾??；合并慢性鼻竇炎、鼻息肉、鼻中隔偏曲等鼻部疾病；合并自身免疫性疾??；合并感染性疾??；妊娠期。

3 實(shí)驗(yàn)方法

于受檢者肘靜脈處抽取外周血3mL，保存于干燥無(wú)菌試管中，并靜置1h，后離心15min（3000 r/min），析出血清后置-80℃冰箱內(nèi)保存待測(cè)。YKL-40檢測(cè)試劑盒為上海哈靈生物科技有限公司進(jìn)口分裝。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定受檢者血清中YKL-40的含量，操作方法嚴(yán)格按照產(chǎn)品所附說明書進(jìn)行，檢測(cè)結(jié)果由美國(guó)伯騰儀器有限公司的酶標(biāo)儀處理。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析處理，各組數(shù)據(jù)經(jīng)檢驗(yàn)呈非正態(tài)分布，計(jì)量資料用中位數(shù)及四分位數(shù)（M[P25，P75]）表示，三組之間的比較采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)，兩兩比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

表1所示，兒童患者組、成人患者組和成人對(duì)照組血清YKL-40含量的中位數(shù)分別為107.44 ng/L、60.19 ng/L和71.38ng/L，三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）。血清YKL-40含量進(jìn)一步組間兩兩比較，兒童患者組顯著高于成人患者組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；兒童患者組也高于成人對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.046）；而成人患者組與成人對(duì)照組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.264）。

表1 變應(yīng)性鼻炎患者組和對(duì)照組血清YKL-40含量的比較（M[P25，P75]）

討論

YKL-40是肝素與幾丁質(zhì)相結(jié)合而成的蛋白，又稱人類軟骨糖蛋白-39（human cartilage glycoprotein-39，HCgp-39）、幾丁質(zhì)酶-3樣蛋白 1（chitinase-3-like protein 1，CHI3L1），一種屬于甲殼質(zhì)酶家族的糖蛋白，由383個(gè)氨基酸組成，分子量40kDa，其結(jié)構(gòu)上與細(xì)菌幾丁質(zhì)酶相似[14]。YKL-40與幾丁質(zhì)酶蛋白家族共享結(jié)構(gòu)同源性，并可結(jié)合幾丁質(zhì)。但與幾丁質(zhì)酶不同的是，YKL-40的活性位點(diǎn)被氨基酸取代，導(dǎo)致其缺乏殼多糖分解活性，所以YKL-40不具有酶的活性[8]。雖然YKL-40的具體生物學(xué)作用尚不確切，但國(guó)內(nèi)外已有不少關(guān)于YKL-40與哮喘、炎癥及腫瘤等的報(bào)道。研究發(fā)現(xiàn)，血清YKL-40的含量在嚴(yán)重哮喘患者中升高，與哮喘患者的上皮下基底膜厚度及哮喘的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，與一秒用力呼氣容積（FEV1）呈負(fù)相關(guān)[7]。血清YKL-40的蛋白表達(dá)水平被認(rèn)為可用作一種蛋白標(biāo)志物，用來(lái)判斷中-重度哮喘嚴(yán)重程度[8]。

AR與哮喘屬于“同一氣道，同一疾病”，具有相似的病理生理學(xué)機(jī)制和炎性反應(yīng)機(jī)制[15]。根據(jù)文獻(xiàn)資料，中-重度持續(xù)性AR患者血清YKL-40的含量顯著增加，且AR患者鼻黏膜中YKL-40的mRNA和蛋白表達(dá)水平與AR的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[12]，尤其是鼻癢及鼻塞癥狀的嚴(yán)重程度與血清YKL-40的含量呈正相關(guān)[16]。另有研究顯示，AR患者血清中YKL-40的含量與IgE和趨化因子Eotaxin-2的含量，以及Th1/Th2、Treg/Th17免疫失衡程度均呈正相關(guān)[17]。AR患者血清YKL-40含量較正常人升高，與血清IL-4水平呈正相關(guān)，而與血清IFN-γ水平呈負(fù)相關(guān)，提示YKL-40可能作用于Th1/Th2細(xì)胞因子而發(fā)揮作用[18]。

我們的研究結(jié)果顯示，兒童AR患者的血清YKL-40水平顯著高于成人AR患者，也高于健康成人對(duì)照，而成人AR患者與健康對(duì)照相比較無(wú)明顯差異，提示血清YKL-40水平可能受年齡影響。但是，YKL-40是否參與了AR的早期發(fā)病及其作用機(jī)制尚待進(jìn)一步探討。歐洲最近有研究發(fā)現(xiàn)[19]，CHI3L1遺傳變異對(duì)血中YKL-40水平的影響部分受CHI3L1 CpG位點(diǎn)的甲基化譜調(diào)節(jié)；血中YKL-40水平與兒童哮喘有關(guān)，高水平的YKL-40顯著增加了哮喘發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

當(dāng)然本文還存在一些不足，包括樣本量偏少（特別是對(duì)照組）、AR患者未根據(jù)疾病嚴(yán)重程度再分亞組、健康對(duì)照組缺乏兒童年齡對(duì)象等，這可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析產(chǎn)生一些影響，需要在今后的研究中加以探討。隨著基礎(chǔ)和臨床研究深入，YKL-40在變態(tài)反應(yīng)疾病發(fā)生發(fā)展中的作用將得到進(jìn)一步闡明。