一種復(fù)配黏膜消毒劑殺滅微生物性能的研究

蔣邱逃 王嵬(通訊作者)

（1成都市武侯區(qū)疾病預(yù)防控制中心 四川 成都 610041）

（2江蘇省疾病預(yù)防控制中心 江蘇 南京 210009）

黏膜是一種重要的人體器官，可以直接或者間接的與外環(huán)境接觸，可能受到各種有害微生物的侵犯。雖然人體也有正常菌群和皮膚黏膜屏障等防衛(wèi)措施，可以使人體免于被那些臨時污染的病原體致病，但當人體免疫力低下或者有外傷的情況下，外部的致病菌或者人體的條件致病菌也有可能導(dǎo)致疾病。因此，黏膜消毒劑應(yīng)運而生，被廣泛的應(yīng)用于黏膜和創(chuàng)面消毒。本研究所使用的消毒劑是一種以硼酸和醋酸氯己定為主要成分的復(fù)配黏膜消毒劑，為了解其對不同微生物和皮膚自然菌的殺滅效果，在實驗室進行了懸液定量殺菌實驗和皮膚消毒現(xiàn)場試驗研究以驗證其性能。

1.材料和方法

1.1 材料

實驗菌株為金黃色葡萄球菌（ATCC6538）、大腸桿菌（8099）、銅綠假單胞菌（ATCC15442）和白色念珠菌（ATCC10231）均由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心提供。37℃恒溫培養(yǎng)箱為美墨爾特(上海)貿(mào)易有限公司產(chǎn)品，胰蛋白大豆瓊脂培養(yǎng)基和沙堡葡萄糖瓊脂為北京路橋技術(shù)有限責(zé)任公司產(chǎn)品。

1.2 方法[1]

1.2.1 實驗菌懸液制備 取四種試驗菌第6代的24h新鮮培養(yǎng)物，用稀釋液（PBS）稀釋至適當?shù)臐舛炔⑴c有機干擾物（30g/L小牛血清白蛋白）溶液對倍稀釋作為實驗菌液，備用。

1.2.2 中和劑選擇試驗 選擇金黃色葡萄球菌作為中和劑選擇試驗的指標菌，實驗設(shè)六組，分別為：1組為消毒劑+菌懸液；2組為（消毒劑+菌懸液）+中和劑；3組為中和劑+菌懸液；4組為（消毒劑+中和劑）+菌懸液；5組為菌懸液+TPS對照；6組為對照組（稀釋液、中和劑、培養(yǎng)基）。按中和劑選擇試驗程序進行，第1組不長菌或者遠小于第2組，第3、4、5組有相似菌落數(shù)生長，且組間菌落數(shù)誤差率不超過15%，第6組無菌生長。

1.2.3 懸液定量殺菌試驗 試驗在20℃水浴中進行。取1.0mL菌懸液與4.0mL消毒液混勻并計時，作用至預(yù)定時間后取0.5mL混合液至4.5mL中和劑中混勻，作用10分鐘，進行10倍系列稀釋，選擇合適稀釋度，分別取1.0mL接種至兩塊平皿中做活菌培養(yǎng)計數(shù)，計算殺滅對數(shù)值。

1.2.4 皮膚消毒現(xiàn)場試驗 隨機選擇30名成年志愿者，讓受試者前臂內(nèi)側(cè)相互充分搓擦，用1支棉拭子無菌蘸取中和劑采樣液在左前臂內(nèi)側(cè)皮膚5cm×5cm面積內(nèi)作涂抹采樣；將采樣后的棉拭子投入到5mL中和劑采樣液試管內(nèi)作為陽性對照組；用該消毒液原液對右前臂內(nèi)側(cè)皮膚進行擦拭消毒并保持作用3min，用同樣方法進行消毒后試驗組采樣，將棉拭投入到5mL含中和劑采樣液試管內(nèi)。將各組采樣標本進行充分振蕩洗脫，取洗脫液進行活菌計數(shù),計算對自然菌殺滅對數(shù)值。

2.結(jié)果

2.1 中和劑選擇試驗結(jié)果

結(jié)果表明，用含1%硫代硫酸鈉、1%軟磷脂、1%吐溫-80的TSB作為中和劑，能有效終止含有2%硼酸和0.23%醋酸氯己定的消毒液的殘留作用，中和劑和中和產(chǎn)物對受試菌和培養(yǎng)基均無不良影響（表1）。

表1 中和劑選擇試驗結(jié)果

2.2 定量殺菌試驗結(jié)果

結(jié)果表明，含有2%硼酸和0.23%醋酸氯己定的消毒液作用1.5分鐘，對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌的殺滅對數(shù)值均大于5.00，對照組菌落對數(shù)值分別為7.36、7.29、7.04；消毒劑原液作用1.5分鐘，對白色念珠菌的殺滅對數(shù)值大于4.00，對照組菌落對數(shù)值為6.51。符合消毒劑定量殺菌試驗的要求（表2）。

2.3 皮膚消毒現(xiàn)場試驗

含有2%硼酸和0.23%醋酸氯己定的消毒液對志愿者前臂內(nèi)側(cè)皮膚擦拭消毒3分鐘，對皮膚表面的自然菌平均殺滅對數(shù)值大于1.00。消毒后的皮膚上殘留的平均菌落數(shù)為3cfu/cm2，對照組皮膚上殘留的平均菌落數(shù)為357cfu/cm2,符合皮膚消毒現(xiàn)場試驗的要求。

表2 定量殺菌試驗結(jié)果

3.討論

硼酸和醋酸氯己定作為黏膜消毒劑都有一定的歷史。硼酸具有消炎和抑菌的效果，和廖香草酚及普魯卡因等成分復(fù)配，常用來治療口腔糜爛、牙齦炎、牙周炎及術(shù)后輔助治療[2、4]。許萬祥等人的研究證明[3]，硼酸對昆明系雌性小鼠經(jīng)口染毒LD50為3749.73mg/kg，屬于低毒化合物。盧勇濤等人的研究表明[4]，復(fù)方硼酸含漱液的毒性試驗顯示其無口腔黏膜刺激性和致敏性。所以，只要不是口服而作為皮膚黏膜消毒劑的低劑量的硼酸對人體的危害有限，但仍需關(guān)注使用時是否有相關(guān)的炎癥或者疾病的發(fā)生。醋酸氯己定是氯己定的醋酸鹽，從20世紀50年代即已用于手、皮膚和黏膜的消毒。因其殺菌效果好、性能穩(wěn)定、對人體毒性小、使用方便等優(yōu)點，在黏膜消毒劑的使用中一直占有一定的地位[5]。

本研究中使用的消毒劑是2%硼酸和0.23%醋酸氯己定復(fù)配的消毒劑，既有硼酸的抑菌作用，又具有醋酸氯己定的低效、作用時間長的消毒功能，在試驗中對三種細菌繁殖體和一種真菌作用1.5分鐘的殺滅對數(shù)值都達到了定量殺菌試驗的要求；在皮膚消毒現(xiàn)場試驗中，作用3分鐘的平均殺滅對數(shù)值大于1.0，以上試驗結(jié)果均符合GB27954-2011《黏膜消毒劑通用要求》的要求。綜上所述，這種黏膜消毒劑是一種快速、殺菌效果好、可用于黏膜消毒并且安全性較好的黏膜消毒劑。