李秀玉，李 靜，李 昕，李超群，袁向章

玉容消痤顆粒(Yurong Xiaocuo granules,YRXC)是基于經(jīng)驗(yàn)方玉容消痤湯[1-2]的新藥開發(fā)。原方在臨床應(yīng)用近20年，對尋常痤瘡(以下簡稱痤瘡)各型皮損均有顯著療效，且無明顯不良反應(yīng)。該方為由丹參、葛根、連翹、浙貝母、蒲公英、白花蛇舌草、當(dāng)歸、枇杷葉、桑白皮9味中藥組成，具有清熱解毒，清肺瀉火，活血化瘀，消癰散結(jié)之功效，藥味簡單，但效專力宏。

痤瘡是毛囊皮脂腺的慢性炎癥性皮膚病，易診難治，痤瘡可影響近85%的青少年[3]，成年人患病率為3%～8%，成年女性患病率較男性高，達(dá)12%。該病屬損容性皮膚病，除造成病變局部的不適外，更重要的是因影響儀容美所帶來的心理壓力，研究顯示其對心理和社交的影響甚至超過了哮喘和癲癇[4]。目前西醫(yī)治療痤瘡的主要藥物有抗生素、維A酸制劑、抗雄性激素藥物等，但都存在不良反應(yīng)，如抗生素的耐藥問題，維A酸制劑的維A酸皮炎等，且近年鮮有新藥問世，迄今為止尚無大家公認(rèn)的療效好而副作用少的治療方法。因此開發(fā)研究安全有效的痤瘡藥物，是臨床研究熱點(diǎn)之一。

已知雄激素在痤瘡的發(fā)生發(fā)展和維持中起重要作用，產(chǎn)生痤瘡的解剖基礎(chǔ)皮脂腺的發(fā)育和皮脂的分泌直接受雄激素支配，抗雄治療是痤瘡的有效療法之一。金黃地鼠側(cè)腹皮脂腺斑是雄激素靶器官，包含有大量皮脂腺結(jié)構(gòu)，對雄激素刺激的反應(yīng)上與人相似，是目前研究藥物抗雄激素及抗皮脂腺增生活性的理想動(dòng)物模型[5-6]。作者探討YRXC對金黃地鼠性激素水平與皮脂腺斑的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與藥物 健康雄性金黃地鼠60只，體重80～100 g；等級(jí)為SPF/VAF；繁育單位為北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。飼養(yǎng)管理：溫度為19～26 ℃，相對濕度為30%～70%，光照為150～300 Lux，環(huán)境設(shè)施合格證號(hào)【魯動(dòng)環(huán)字H2002100112】；飼料：全價(jià)顆粒飼料；由山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供動(dòng)物飲水，自來水，自由飲取。丙酸睪酮注射液(批號(hào)：0607141,規(guī)格：25 mg/mL，天津金耀氨基酸有限公司生產(chǎn))。螺內(nèi)酯片(國藥準(zhǔn)字H33020070)：20 mg/片，生產(chǎn)單位：杭州民生藥業(yè)有限公司。YRXC(批號(hào)：070801)，由解放軍第302醫(yī)院中醫(yī)藥研究所提供[1]：16 g相當(dāng)于生藥材86 g，每克藥粉含糊精0.044 g，丹參酮ⅡA 1.06 mg，葛根素14.46 mg。性狀：棕色固態(tài)粉末。溶媒：蒸餾水。

1.2 試驗(yàn)儀器 顯微鏡：DMLSZ型(德國Leica公司)；組織包埋機(jī)：EG1150型(德國Leica公司)；全自動(dòng)組織脫水機(jī)：TP1020型(德國Leica公司)；切片機(jī)：HM315型(德國MICROM公司)。

1.3 動(dòng)物分組和給藥 金黃地鼠60只，按體重隨機(jī)分為空白對照組、模型對照組、陽性對照組、YRXC低、中、高劑量組，共6組，每組10只。

給藥途經(jīng)：灌胃給藥；給藥劑量：空白對照組及模型對照組給予蒸餾水；陽性對照組給予螺內(nèi)酯溶液12 mg/kg；YRXC低、中、高劑量組分別給YRXC溶液0.8、1.6、3.2 g/kg。給藥頻率：1/d。

YRXC給藥劑量的設(shè)計(jì)依據(jù)：YRXC臨床擬日用劑量為16 g，按體表面積折算金黃地鼠等效劑量為1.6 g/kg，參考相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道及等比原則，設(shè)定YRXC低、中、高劑量分別為0.8、1.6、3.2 g/kg。陽性對照藥螺內(nèi)酯劑量設(shè)計(jì)依據(jù)：根據(jù)《中國痤瘡指南2014修訂版》螺內(nèi)酯治療痤瘡的成人用量為“每日1～2 mg/kg”，按體表面積折算金黃地鼠等效劑量為12 mg/kg，金黃地鼠和人用劑量的折算倍數(shù)參考國內(nèi)徐氏[7]及美國食品和藥品監(jiān)督管理局目前所采用的種屬間劑量換算方法。

1.4 試驗(yàn)方法 試驗(yàn)前用電動(dòng)剃須刀剃盡金黃地鼠右側(cè)背部體毛，暴露皮脂腺斑，在強(qiáng)光照射下，用游標(biāo)卡尺測量皮脂腺斑塊的最大橫徑(transverse diameter，DT)和最大縱徑(longitudinal diameter，DL)。各組分別灌胃給藥：YRXC低、中、高劑量組分別給予0.8、1.6、3.2 g/kg YRXC溶液；陽性對照組給予12 mg/kg螺內(nèi)酯溶液；模型對照組和空白對照組分別灌胃給予等體積蒸餾水。1/d，連續(xù)給藥30 d。給藥期間，除空白對照組外，其余各組每4天肌肉注射1次丙酸睪酮2.5 mg/kg，共7次。

末次給藥1 h后，用3%戊巴比妥鈉40 mg/kg腹腔注射麻醉動(dòng)物，再次測量皮脂腺斑大小。之后脫頸椎處死動(dòng)物，剖腹，用玻璃針分離腹主動(dòng)脈，取血3 mL，分離血清，放免法檢測睪酮、雌二醇的含量。切取皮脂腺斑1 cm×1 cm組織塊，以4%甲醛固定，石蠟包埋，切片，蘇木精—伊紅染色法染色，于光鏡下觀察金黃地鼠皮脂腺顯微結(jié)構(gòu)(皮脂腺重疊葉數(shù)、厚度及液化小囊)。皮脂腺重疊葉數(shù)判斷標(biāo)準(zhǔn)：重疊葉數(shù)0葉為(-)；重疊葉數(shù)1 葉為(+)；重疊葉數(shù)2～3葉為(++)；重疊葉數(shù)4葉為(+++)。

2 結(jié)果

2.1 YRXC對金黃地鼠血清睪酮、雌二醇的影響 與空白對照組比較，模型對照組血清睪酮含量顯著性升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說明造模成功。與模型對照組比較，中、高劑量組血清睪酮含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，0.8 g/kg劑量組血清睪酮有降低趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，陽性對照組血清睪酮含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與陽性對照組比較，YRXC各劑量組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但高劑量組有進(jìn)一步降低的趨勢。YRXC各劑量和螺內(nèi)酯對金黃地鼠血清雌二醇含量無明顯影響(P>0.05)。表1。

表1 YRXC對金黃地鼠血清睪酮、雌二醇的影響

注：與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與陽性對照組比較，△P<0.05，△△P<0.01

2.2 YRXC對金黃地鼠皮脂腺斑塊大小的影響 各劑量組給藥前DT×DL值無明顯差異；給藥30 d后，與模型對照組比較，低劑量組DT×DL值降低不明顯，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；中、高劑量組和螺內(nèi)酯組DT×DL值明顯降低，與模型對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明中、高劑量和螺內(nèi)酯均能明顯縮小金黃地鼠皮脂腺斑。與螺內(nèi)酯組比較，中、高劑量組DT×DL值差別不明顯，說明中、高劑量與螺內(nèi)酯在縮小金黃地鼠皮脂腺斑作用相似。表2。

表2 YRXC對金黃地鼠皮脂腺斑塊大小的影響

注：與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與陽性對照組比較，△P<0.05，△△P<0.01

2.3 各組金黃地鼠皮脂腺斑病理組織學(xué)檢查 模型對照組：皮脂腺呈分葉狀分布，排列較緊較厚，部分腺葉較大，個(gè)別腺體液化呈小囊。陽性對照組：皮脂腺分布較模型組薄，但排列依然較緊，液化小囊較模型組稍多，皮脂腺厚度與模型對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；低劑量組皮脂腺厚度與模型組相似。中、高劑量組皮脂腺厚度變薄，排列也較松散，液化小囊形成數(shù)目多，皮脂腺厚度與模型對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中高劑量組皮脂腺明顯變薄，個(gè)別僅有散在皮脂腺。各組金黃地鼠皮脂腺斑病理見圖1，皮脂腺重疊葉數(shù)情況詳見表3。

圖1 各組金黃地鼠皮脂腺病理圖片(HE×200)

表3 YRXC對金黃地鼠皮脂腺顯微結(jié)構(gòu)的影響

3 結(jié)論

YRXC中、高劑量對金黃地鼠血清睪酮含量、皮脂腺斑塊DT×DL值有明顯降低作用，對皮脂腺顯微組織結(jié)構(gòu)有明顯改善作用，提示YRXC有明顯的抗雄激素作用，部分揭示了其治療痤瘡的機(jī)制。由以上藥效學(xué)研究結(jié)果提示，本試驗(yàn)中金黃地鼠YRXC有效劑量為1.6 mg/kg，折合臨床用藥有效起始劑量約為16.0 g/人。

4 討論

痤瘡發(fā)病原因未明，已知雄激素作用過強(qiáng)、皮脂腺分泌過度、毛囊皮脂腺導(dǎo)管角化異常、痤瘡丙酸桿菌感染及通過該細(xì)菌成分介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)特別是天然免疫反應(yīng)是痤瘡發(fā)病的主要環(huán)節(jié)[8]，部分病例的發(fā)生和加重還與免疫、遺傳、內(nèi)分泌障礙及心理因素等有關(guān)。

20世紀(jì)40年代Hamilton首次提出“男性激素物質(zhì)”參與了痤瘡的發(fā)病，自此，雄激素與痤瘡關(guān)系的研究一直是皮膚科關(guān)注的熱點(diǎn)[9]?，F(xiàn)已知，皮脂腺是雄激素的靶器官之一，皮脂腺的發(fā)育直接受雄激素支配，雄激素是痤瘡的始動(dòng)因素，但大部分痤瘡患者外周血中雄激素水平正常[10]。睪酮(testosterone，T)是主要的循環(huán)雄激素，T可以通過5α-還原酶的作用代謝為作用更強(qiáng)的二氫睪酮(dihydrotestosterone,DHT)。T和DHT均可與雄激素受體(androgen receptor,AR)結(jié)合，但DHT比T對AR的親和力高10倍[11]。T、DHT與皮脂腺上的AR結(jié)合，從而發(fā)揮調(diào)節(jié)皮脂腺增生的作用，因此雄激素與痤瘡的發(fā)生關(guān)系密切。

螺內(nèi)酯是《中國痤瘡治療指南(2014修訂版)》推薦的抗雄激素治療痤瘡藥物之一[4]，它的抗雄激素作用表現(xiàn)在2個(gè)方面：①能競爭性地抑制DHT與皮膚靶器官的受體結(jié)合，從而發(fā)揮抑制皮脂腺的功能；②抑制5α-還原酶，從而降低皮膚中DHT的含量。在皮膚中，5α-還原酶能將T轉(zhuǎn)化為DHT，故抑制5α-還原酶即可減少T向DHT的轉(zhuǎn)化。但該藥有月經(jīng)不調(diào)、惡心、高鉀血癥、疲勞等不良反應(yīng)，因可能會(huì)誘發(fā)男性乳房發(fā)育、乳房脹痛等癥狀，不推薦使用于男性。

金黃地鼠背部皮脂腺斑是雄性素依賴性器官,是國內(nèi)外公認(rèn)的篩選和研究藥物抗雄性素及抗皮脂腺增生活性的動(dòng)物模型[12]。本研究認(rèn)為提高金黃地鼠T水平，以觀察YRXC對金黃地鼠T、雌二醇、皮脂腺斑大小及其組織結(jié)構(gòu)的影響，并與指南推薦的抗雄藥物螺內(nèi)酯對照，結(jié)果顯示YRXC中、高劑量有明顯抗雄激素作用，且與螺內(nèi)酯效果相當(dāng)，部分揭示了其治療痤瘡的機(jī)制。

YRXC除有上述抗雄激素作用外，研究證明其還有抗菌、抗炎作用[13-14]，且急、慢性毒理試驗(yàn)證明其無明顯不良反應(yīng)，是值得開發(fā)的治療痤瘡的有效良方。