劉保社，曹福麟，曹望弟

（1．陜西歐珂藥業(yè)有限公司，陜西 商洛 711400； 2．陜西中醫(yī)藥大學，陜西 咸陽 712046；3．陜西省商洛市藥品檢驗所，陜西 商洛 726000）

咽炎片由玄參、百部、天冬、牡丹皮、麥冬、款冬花、木蝴蝶、地黃、板藍根、青果、蟬蛻、薄荷油等中藥組方，具有養(yǎng)陰潤肺、清熱解毒、清利咽喉、鎮(zhèn)咳止癢的功效，用于慢性咽炎引起的咽干、咽癢、刺激性咳嗽等。以往的咽炎片質量控制探討了黃芩苷、沒食子酸、丹酚酸、肉桂酸和芍藥苷等的含量測定，并未建立木蝴蝶有效成分的含量測定方法。本研究中參考《中國藥典(一部）》[1]及文獻[2-16]，采用高效液相色譜（HPLC）法測定咽炎片中木蝴蝶的活性成分木蝴蝶苷B的含量，以有效控制其內在質量?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters e2695高效液相色譜儀（包括2489UV檢測器，美國Waters公司）；SQP型電子分析天平（十萬分之一，北京賽多利斯科學儀器有限公司）；AS1512560型超聲波清洗機（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）。

1.2 試藥

木蝴蝶苷B對照品（批號為111195-201603，含量為91．9%，中國食品藥品檢定研究院；咽炎片樣品（批號分別為 170701，171102，基片重 0．25 g），不含木蝴蝶的陰性對照品樣品，均由陜西歐珂藥業(yè)有限公司提供；乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasi1100-5 C18柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-甲醇（B）-0．3% 磷酸溶液（C），梯度洗脫，0～30 min 時 15% →19．5%B、75% →69%C，30 ～40min 時 19．5%B、69%C；流速：0．8mL/min；檢測波長：280 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：20 μL。

2.2 溶液制備

取木蝴蝶苷B對照品適量，精密稱定，加50%甲醇，得質量濃度為0．043 2 g/L的對照品溶液；取除去包衣的咽炎片粉末1．24 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加70%甲醇溶液適量，混勻，稱定質量，超聲20 min，放冷，用70%甲醇溶液定容至刻度，快速過濾，取續(xù)濾液，微孔濾膜（0．45 μm）濾過，得供試品溶液；按處方比例，照處方制備工藝制成不含木蝴蝶的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

陰性干擾試驗：精密吸取陰性對照品溶液20 μL，注入液相色譜儀。色譜圖中，在與對照品溶液木蝴蝶苷B峰相同位置上無色譜峰出現(xiàn)，表明陰性對照無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察：取2．2項下對照品溶液，分別進樣1，2，4，8，12，16，20 μL，測定峰面積，以對照品進樣量（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=13 448X-13 147，r=1．000 0（n=7）。結果表明，木蝴蝶苷B進樣量在0．04～0．86 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取2．2項下對照品溶液，進樣20 μL，重復進樣6次，按擬訂色譜條件測定峰面積。結果木蝴蝶苷B峰面積的RSD為2．43%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：精密吸取供試品溶液20 μL，分別于0，2，4，6，8，12，24 h 時進樣，測定峰面積。結果木蝴蝶苷B的RSD為1．97%（n=7），表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定。

重復性試驗：取同一批除去包衣的咽炎片粉末6份，按2．2項下方法制備供試品溶液，進樣20 μL，測定峰面積，分別計算含量。結果木蝴蝶苷B含量的RSD為1．39%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的同一批除去包衣的咽炎片粉末1．24 g，精密稱定，分別精密加入質量濃度為0．011 g/L的木蝴蝶苷B對照品溶液，按2．2項下方法制備供試品溶液，進樣20 μL，測定峰面積，計算回收率。結果見表1。

表1 木蝴蝶苷B加樣回收試驗結果（n=6）

2.4 樣品含量測定

取2批（批號分別為170701，171102）樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂方法測定，結果2批樣品中木蝴蝶苷 B 的含量分別為 0．254，0．253 mg/g。

3 討論

提取方法選擇：曾比較藥典中加熱回流、超聲提取等提取方法，考察在不同時間的提取效果及不同濃度的甲醇溶液對樣品測定結果的影響。結果表明，選用70%甲醇，超聲提取20 min，可充分提取樣品中的木蝴蝶苷B，簡單易行，提取率較高。

流動相選擇：曾對不同流動相體系條件的色譜分離效果分別進行了考察，分別比較甲醇-水、甲醇-水-磷酸、乙腈-甲醇-磷酸溶液為流動相的效果。結果表明，以乙腈-甲醇-0．3%磷酸溶液作為流動相，分離效果較好，故選擇其為流動相梯度洗脫。

綜上所述，本研究中所建立的HPLC法測定咽炎片中木蝴蝶苷B的含量，操作簡便，高效快捷，結果準確，對于咽炎片的質量控制具有積極意義，為該品種質量標準的進一步修訂提供了試驗依據(jù)。