于豪冰 杜 娟 張亞妮 程彬彬 殷子斐*

（1 海軍軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室，上海 200433；2 海軍軍醫(yī)大學(xué)中醫(yī)系，上海 200433）

隨著中醫(yī)藥國(guó)際化、現(xiàn)代化進(jìn)程的不斷加快，用現(xiàn)代科學(xué)方法探究中醫(yī)基礎(chǔ)理論、闡釋中藥機(jī)理顯得十分必要。實(shí)驗(yàn)中醫(yī)學(xué)是用科學(xué)實(shí)驗(yàn)的方法來(lái)研究和發(fā)展中醫(yī)學(xué)的一門(mén)科學(xué)，是中醫(yī)學(xué)與現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)科學(xué)發(fā)展相結(jié)合的產(chǎn)物，是溝通中醫(yī)基礎(chǔ)理論、中醫(yī)藥臨床藥效與現(xiàn)代生命科學(xué)基礎(chǔ)研究之間不可替代的橋梁。實(shí)驗(yàn)中醫(yī)學(xué)是培養(yǎng)學(xué)生中醫(yī)藥科學(xué)研究素質(zhì)以及綜合創(chuàng)新能力的一門(mén)學(xué)科［1］。它對(duì)于培養(yǎng)和加強(qiáng)中醫(yī)藥大學(xué)生的科研素質(zhì)和能力，使之初步具備獨(dú)立開(kāi)展中醫(yī)藥科學(xué)研究所需的基礎(chǔ)理論知識(shí)、科研思維方式、創(chuàng)新意識(shí)及實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)具有舉足輕重的作用，已經(jīng)成為中醫(yī)院校人才培養(yǎng)規(guī)劃中的必備課程。

分子生物學(xué)是目前生命科學(xué)領(lǐng)域中最為基礎(chǔ)、最為前沿的主干課程之一，它將研究從組織細(xì)胞水平進(jìn)一步拓展到蛋白質(zhì)核酸水平，從而揭示生命現(xiàn)象的本質(zhì)。分子生物學(xué)能夠不斷地加速中醫(yī)藥現(xiàn)代化進(jìn)程，因此把分子生物學(xué)引入中醫(yī)藥的研究中已經(jīng)是必然的發(fā)展趨勢(shì)［2］。分子生物學(xué)是目前中醫(yī)藥研究，尤其中醫(yī)基礎(chǔ)研究、中藥方劑研究的重要手段［3］。筆者近幾年來(lái)多次參與了中醫(yī)八年制學(xué)生實(shí)驗(yàn)中醫(yī)學(xué)的教學(xué)，通過(guò)講授分子生物學(xué)基本理論、指導(dǎo)學(xué)生學(xué)習(xí)分子生物學(xué)基本技術(shù)，積累了一定的教學(xué)經(jīng)驗(yàn)，現(xiàn)總結(jié)如下，為其他教學(xué)工作者提供參考和借鑒。

1 疏理基本概念 夯實(shí)分子生物學(xué)理論基礎(chǔ)

實(shí)驗(yàn)中醫(yī)學(xué)課程開(kāi)設(shè)時(shí)間一般為大四學(xué)年。學(xué)生在前期醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)公共課程學(xué)習(xí)過(guò)程中，已經(jīng)學(xué)習(xí)了生物化學(xué)與分子生物學(xué)等基本課程。然而，由于時(shí)間相隔較久，我們?cè)诮虒W(xué)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)學(xué)生對(duì)于分子生物學(xué)基本理論的掌握程度良莠不齊，甚至不少學(xué)生存在對(duì)基本概念混淆的嚴(yán)重問(wèn)題。

分子生物學(xué)課程知識(shí)結(jié)構(gòu)龐雜、涵蓋內(nèi)容較廣、概念定義繁多、關(guān)系錯(cuò)綜復(fù)雜，但并非所有的分子生物學(xué)基礎(chǔ)理論知識(shí)都會(huì)在中醫(yī)藥研究中涉及到。因此，我們?cè)诮虒W(xué)過(guò)程中，根據(jù)目前中醫(yī)藥科研中常用的分子生物學(xué)技術(shù)，結(jié)合分子生物學(xué)的理論基石——中心法則，將分子生物學(xué)中的重點(diǎn)知識(shí)進(jìn)行了疏理，內(nèi)容如下：（1）從DNA 到DNA 為復(fù)制，講解染色體、DNA、基因和基因組、DNA 損傷與修復(fù)的概念，介紹DNA 測(cè)序技術(shù)、重組DNA 技術(shù)的原理及作用；（2）從DNA 到RNA 為轉(zhuǎn)錄，說(shuō)明mRNA、cDNA、外顯子、內(nèi)含子、啟動(dòng)子、增強(qiáng)子的定義，指出RT-PCR、PCR、Real Time PCR 技術(shù)的原理、作用以及三者之間的區(qū)別和聯(lián)系；（3）從mRNA 到蛋白質(zhì)為翻譯，闡釋遺傳密碼、tRNA、rRNA、miRNA、lncRNA 的作用，介紹Western Blot、ELISA、免疫組化技術(shù)的原理、作用、特點(diǎn)以及三者間的聯(lián)系和區(qū)別。通過(guò)系統(tǒng)的講解，進(jìn)一步夯實(shí)了學(xué)生的分子生物學(xué)理論基礎(chǔ)，提高了學(xué)生對(duì)于分子生物學(xué)常用技術(shù)的了解，有助于學(xué)生理解文獻(xiàn)、設(shè)計(jì)課題。

2 引入科研案例 強(qiáng)化分子生物學(xué)在中醫(yī)藥研究中的地位和作用

分子生物學(xué)的研究對(duì)象是蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子，從微觀角度解釋生命現(xiàn)象；中醫(yī)學(xué)以陰陽(yáng)、五行等理論為基礎(chǔ)，強(qiáng)調(diào)整體觀念，從宏觀視角辨證論治。這兩門(mén)學(xué)科雖然看似沒(méi)有聯(lián)系，但是分子生物學(xué)的出現(xiàn)為中醫(yī)藥研究提供了新的思路，分子生物學(xué)的迅猛發(fā)展為中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究帶來(lái)了新的契機(jī)，分子生物學(xué)技術(shù)已經(jīng)成為目前中醫(yī)藥研究的有效手段和常用方法。為便于學(xué)生理解分子生物學(xué)在中醫(yī)科研中的地位和作用，進(jìn)而使學(xué)生學(xué)會(huì)在科研課題設(shè)計(jì)中合理地借助分子生物學(xué)技術(shù)闡明科學(xué)問(wèn)題，我們?cè)诮虒W(xué)過(guò)程中引入典型科研案例，重點(diǎn)介紹相關(guān)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法、實(shí)驗(yàn)結(jié)論，并講解常用的分子生物學(xué)技術(shù)在該研究中的作用。

例如，借助復(fù)旦大學(xué)沈自尹教授帶領(lǐng)的科研團(tuán)隊(duì)在“腎本質(zhì)”的研究過(guò)程中的系列科研成果［4］，講解ELISA、蛋白芯片、基因芯片技術(shù)；介紹天花粉蛋白通過(guò)抑制核糖體發(fā)揮抗腫瘤作用的研究［5］，講解Western Blot、免疫組化、RT-PCR 技術(shù)；引用將天花粉蛋白基因攜帶進(jìn)入腺相關(guān)病毒中構(gòu)建具有抗腫瘤效應(yīng)的重組腺相關(guān)病毒的研究［6］，講解重組DNA、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染等實(shí)驗(yàn)技術(shù)；采用目前已有的在基因水平鑒別中藥西紅花的研究報(bào)道［7］，介紹在PCR 技術(shù)以及在此基礎(chǔ)上形成的隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA 技術(shù)的原理和作用。以上這4 個(gè)科研案例，分別是分子生物學(xué)技術(shù)在闡釋中醫(yī)基礎(chǔ)理論、揭示中藥機(jī)理、創(chuàng)新中藥研發(fā)、保障中藥品質(zhì)方面的研究成果。在教學(xué)實(shí)施過(guò)程中，引用這些科研研究案例，能大大地豐富理論教學(xué)內(nèi)容，提高學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，更好地實(shí)現(xiàn)課程教學(xué)的目標(biāo)。

3 抓好細(xì)節(jié)管理 提高分子生物學(xué)基本技術(shù)操作水平

科學(xué)、合理的實(shí)驗(yàn)方案是科研工作中必不可少的藍(lán)圖和指引，但是準(zhǔn)確、無(wú)誤的實(shí)驗(yàn)操作卻是研究者在科研道路上前進(jìn)的助推器。因此，實(shí)驗(yàn)技術(shù)的教學(xué)也是實(shí)驗(yàn)中醫(yī)學(xué)課程中的重要內(nèi)容。鑒于對(duì)目前中醫(yī)藥研究中熱點(diǎn)問(wèn)題的剖析，我們選擇和設(shè)置了以中醫(yī)藥研究中應(yīng)用最為廣泛的分子生物學(xué)相關(guān)技術(shù)——重組DNA 技術(shù)、PCR 技術(shù)為核心教學(xué)內(nèi)容。實(shí)驗(yàn)技術(shù)的熟練掌握固然需要勤加練習(xí)，但是牢記實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵步驟操作要領(lǐng)和注意事項(xiàng)卻是掌握實(shí)驗(yàn)技術(shù)的關(guān)鍵所在。為保障實(shí)驗(yàn)課教學(xué)效果，提高學(xué)生對(duì)分子生物學(xué)基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)的掌握程度，我們?cè)谥v解實(shí)驗(yàn)原理的基礎(chǔ)上，強(qiáng)化關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)步驟操作，強(qiáng)調(diào)錯(cuò)誤操作方法，狠抓實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)管理。例如，PCR 反應(yīng)體系試劑種類(lèi)較多，為避免學(xué)生加錯(cuò)，囑學(xué)生在PCR反應(yīng)加樣前，在實(shí)驗(yàn)記錄本上寫(xiě)下所需實(shí)驗(yàn)試劑清單（包含試劑名稱和體積），然后再按順序逐一加入，并且加一個(gè)樣品，使用一個(gè)槍頭，不得混用；在加熱瓊脂糖凝膠的過(guò)程中，囑學(xué)生使用微波爐中火緩慢加熱（中火、每次1～2 min），并使用微波爐專用手套取出平底三角瓶，觀察瓊脂糖溶解情況，避免高火、長(zhǎng)時(shí)間加熱導(dǎo)致水分蒸發(fā)過(guò)快、膠的濃度過(guò)高；在小提質(zhì)粒的過(guò)程中，加入裂解液后，為學(xué)生示范輕輕上下顛倒混勻樣品，并囑學(xué)生嚴(yán)格執(zhí)行，避免劇烈震蕩將非質(zhì)粒的基因組DNA混入到樣品中，影響質(zhì)粒的純度。

總之，我們以啟發(fā)和拓展學(xué)生科研思路、引導(dǎo)和提升學(xué)生實(shí)驗(yàn)操作技能為指導(dǎo)思想，在教學(xué)過(guò)程中：講解分子生物學(xué)基本知識(shí)，夯實(shí)學(xué)生理論基礎(chǔ)；闡述分子生物學(xué)技術(shù)在中醫(yī)藥研究中的作用，拓展學(xué)生科研視野；強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范化、實(shí)驗(yàn)方案標(biāo)準(zhǔn)化，提高學(xué)生實(shí)驗(yàn)水平，進(jìn)一步確保教學(xué)目標(biāo)的順利實(shí)現(xiàn)。分子生物學(xué)知識(shí)和技術(shù)發(fā)展日新月異，現(xiàn)代科學(xué)對(duì)于中醫(yī)藥的認(rèn)識(shí)在不斷深化，因此，實(shí)驗(yàn)中醫(yī)學(xué)中關(guān)于中醫(yī)藥研究的分子生物學(xué)技術(shù)的教學(xué)工作還需與時(shí)俱進(jìn)，不斷探索。