UHPLC測(cè)定不同產(chǎn)地芍藥根的有效成分

石鈺

【關(guān)鍵詞】芍藥根;芍藥苷;有效成分;UHPLC測(cè)定試驗(yàn);質(zhì)量評(píng)價(jià)

我國(guó)芍藥種類(lèi)以白芍藥與赤芍藥為主，它們被主要種植在四川、浙江、安徽等各省。對(duì)不同產(chǎn)地芍藥的芍藥根有效成分及質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)能夠了解芍藥根的質(zhì)量差異，而所采用的試驗(yàn)測(cè)定方法主要是UHPLC測(cè)定。

一、關(guān)于UHPLC測(cè)定試驗(yàn)

UHPLC測(cè)定試驗(yàn)的全稱(chēng)是UHPLC-DAD技術(shù)，它是一種建立在芍藥苷、芍藥根、芍藥內(nèi)酯苷、沒(méi)食子酸等8種各大有效成分基礎(chǔ)之上的吸收波長(zhǎng)檢測(cè)方法。該試驗(yàn)主要針對(duì)產(chǎn)自于我國(guó)四川、浙江、安徽等各省的白芍藥進(jìn)行樣品試驗(yàn)，試驗(yàn)樣品數(shù)量高達(dá)60份以上，專(zhuān)門(mén)測(cè)定芍藥根中的8種有效成分。另外，還會(huì)對(duì)不同生長(zhǎng)年限的芍藥根質(zhì)量進(jìn)行測(cè)定試驗(yàn)分析，以此為我國(guó)白芍藥主產(chǎn)地建立更大規(guī)模種植基地提供合理有效的科學(xué)依據(jù)。

二、不同產(chǎn)地白芍藥根的UHPLC測(cè)定試驗(yàn)應(yīng)用分析

本文將針對(duì)四川、浙江這兩大白芍藥產(chǎn)地的白芍藥根進(jìn)行UHPLC測(cè)定試驗(yàn)，專(zhuān)門(mén)對(duì)兩省白芍藥根中的各種有效成分與質(zhì)量進(jìn)行對(duì)比分析。

（一）試驗(yàn)儀器

在針對(duì)白芍藥根的UHPLC測(cè)定試驗(yàn)應(yīng)用中主要包括了超高效液相色譜儀、四元梯度泵、自動(dòng)進(jìn)樣儀、柱溫箱、電子天平以及雙頻數(shù)控超聲波清洗儀等等。

（二）藥品與試劑

UHPLC試驗(yàn)中所采用藥品與試劑包括了芍藥根、芍藥苷、五沒(méi)食子酰葡萄糖、丹皮酚、苯甲酰芍藥苷等等。藥材方面結(jié)合四川、浙江兩省的芍藥根藥材樣品首先進(jìn)行根莖剪除處理，然后快速?zèng)_洗除去其中泥沙，最后烘干備用。

（三）試驗(yàn)方法

1色譜條件試驗(yàn)：在試驗(yàn)過(guò)程中首先要明確一點(diǎn)色譜條件，其色譜柱應(yīng)該為lOOmmx 4.5mmx 2.8μm，另外它的流動(dòng)相選擇了濃度為0.05%的乙腈磷酸溶液。對(duì)芍藥根進(jìn)行7分鐘左右的梯度洗脫，保持柱溫在30℃左右，且洗脫液體流速保持在l.OmL/min左右，如此測(cè)量其進(jìn)樣量應(yīng)該在3μL左右，測(cè)量檢測(cè)波長(zhǎng)應(yīng)該為250nm。此時(shí)芍藥根中的氧化芍藥苷含量應(yīng)該為258nm（四川）和269nm（浙江），丹皮酚含量分別為274nm和291nm，兒茶素含量分別為280mn和282nm。在普通色譜條件下，兩省的芍藥根樣品中8種待測(cè)有效成分的分離度均保持良好。

2 溶液制備線性試驗(yàn)：UHPLC試驗(yàn)中還要對(duì)樣品溶液制備線性范圍進(jìn)行考察，主要是對(duì)兩省的芍藥根樣品在量瓶中加入甲醇到制定刻度位置（分別為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2刻度）然后得出的混合對(duì)照品溶液濃度（前為四川、后為浙江）分別為122/128、96/98、60/70、80/78、303.60/350.21、51.28/47.29μg/mL。在甲醇定容到刻度位置后搖勻處理，在經(jīng)過(guò)0.24μm的微孔濾膜過(guò)濾以后獲得上述6個(gè)濃度梯度的最終混合對(duì)照品溶液。根據(jù)對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果表明，兩省芍藥根中的8種有效成分指標(biāo)均在合理濃度范圍內(nèi)，且它們的峰面積線性關(guān)系表現(xiàn)均相對(duì)良好。

3 精密度試驗(yàn)：除上述試驗(yàn)外，還對(duì)兩省的芍藥根進(jìn)行了精密度試驗(yàn)，即取用兩省各一份供試品溶液，連續(xù)進(jìn)行6次精密度試驗(yàn)，專(zhuān)門(mén)測(cè)定兩省芍藥根中的有效成分峰面積。就以沒(méi)食子酸為例，四川省芍藥根中的沒(méi)食子酸峰面積達(dá)到0.64%，而浙江省芍藥根中的沒(méi)食子酸峰面積達(dá)到0.77%，這表明試驗(yàn)用儀器精密度相對(duì)良好，準(zhǔn)確測(cè)量出兩省芍藥根的峰面積。

4 含量測(cè)定試驗(yàn)：最后對(duì)兩省芍藥根進(jìn)行有效成分含量測(cè)定試驗(yàn)，其中每一份芍藥根的粉末含量取2份，并按照前文所提到的色譜條件測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，再基于回歸方程計(jì)算出兩省芍藥根中8種有效成分的供試品溶液含量濃度（μg/mL），另外還有藥材粉末含量（mg/g）。最后計(jì)算兩份平行芍藥根樣品中的藥材粉末含水量。以丹皮酚為例，四川省芍藥根的丹皮酚含量在0.0486mg/g，而浙江芍藥根的丹皮酚含量為0.0432mg/g，兩?。ㄋ拇?、浙江）的芍藥根樣品有效成分PCA綜合得分分別為0.4535和0.0182[1]。

（四）試驗(yàn)結(jié)果分析

最后在兩省芍藥根的質(zhì)量評(píng)價(jià)中，專(zhuān)門(mén)挑選干燥待測(cè)樣品進(jìn)行測(cè)量。其中四川產(chǎn)的芍藥根中沒(méi)食子算的葡萄糖含量相對(duì)較高，而浙江省產(chǎn)的芍藥根中兒茶素含量較高。如果單純以芍藥苷作為基礎(chǔ)指標(biāo)進(jìn)行對(duì)比分析，可能難以評(píng)價(jià)兩省芍藥根的正確質(zhì)量，因此還要結(jié)合兩省芍藥根中的8種有效成分含量進(jìn)行主成分綜合分析，最終得出綜合質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果[2]。

總結(jié)：

在色譜條件優(yōu)化前提下，本文專(zhuān)門(mén)建立了UHPLC測(cè)定試驗(yàn)，對(duì)四川省、浙江省兩省的芍藥根中8種不同有效成分指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，該測(cè)定方法分析時(shí)間較短且重復(fù)性良好，結(jié)果準(zhǔn)確，非常適用于對(duì)白芍藥的質(zhì)量及有效成分檢測(cè)，對(duì)兩省的芍藥生產(chǎn)管理成本優(yōu)化與采收年限確定（3～4年收）具有利好參考作用。

[參考文獻(xiàn)]

[1]劉永強(qiáng)，馬越，楊博文，等.UHPLC測(cè)定不同產(chǎn)地芍藥根的有效成分[J].中藥材，2016，39（5）：980-985.

[2]李鳳玉，藏小丹，曹陽(yáng).HPLC法測(cè)定牡丹江地區(qū)栽培芍藥根中芍藥苷的含量[J]北方園藝，2017（20）.