陳滔 李美玲(通訊作者) 張紅艷

558000貴州醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院

端粒酶和細(xì)胞本身有著永生化的關(guān)聯(lián)性，為了更好地明確端粒酶在惡性血液系統(tǒng)腫瘤當(dāng)中的表現(xiàn)情況以及臨床指導(dǎo)意義[1]。本次研究采用改良TRAP 的銀染法實(shí)現(xiàn)對(duì)惡性血液病骨髓單一核細(xì)胞端粒酶活性的檢測(cè)，并且對(duì)部分疾病案例實(shí)行動(dòng)態(tài)化觀察，分析總結(jié)惡性血液疾病與端粒酶活性之間的關(guān)聯(lián)性，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

2016年2月-2017年1月收治血液系統(tǒng)惡性腫瘤疾病患者90 例，其中慢性粒細(xì)胞白血病16例，急性白血病55例，慢性淋巴細(xì)胞白血病4 例，骨髓增生異常綜合征8 例，多發(fā)性骨髓瘤7 例。另外在同期選擇部分良性血液疾病患者30例進(jìn)行對(duì)比分析。不同疾病組患者性別、年齡等基礎(chǔ)資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)對(duì)比研究要求。

方法：兩組患者均接受相同檢查方法。①端粒酶：根據(jù)王著元等人所提出的端粒酶檢查方法[2]。②采用TRAP 反應(yīng)與電泳、銀染等檢查方法，聯(lián)合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增產(chǎn)物通過12%聚丙烯酰胺凝膠電泳后放置AgNO3染色10 min，蒸餾水洗滌之后顯色。③段粒酶活性：采用凝膠成像的分析方式，在獲得標(biāo)本相對(duì)吸光度數(shù)值后代表端粒酶的活性。

觀察指標(biāo)：總結(jié)不同疾病患者的端粒酶活性數(shù)據(jù)差異。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：本次研究所有數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件建立數(shù)據(jù)分析模型，對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用(±s)形式描述，P＜0.05 時(shí)說明數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

良性血液疾病患者的端粒酶活性與其他惡性血液疾病患者的端粒酶活性數(shù)據(jù)差異較大，各項(xiàng)數(shù)據(jù)對(duì)比結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

討 論

對(duì)于惡性血液疾病、良性血液疾病患者實(shí)行端粒酶活性檢測(cè)，其結(jié)果基本可以明確惡性患者的端粒酶活性普遍呈現(xiàn)出陽性，端粒酶活性水平相對(duì)較高，為正?；颊叩亩啾?。同時(shí)患者的治療效果與端粒酶的活性之間保持著較高的關(guān)聯(lián)性，這也間接證明了端粒酶活性和惡性血液疾病之間的關(guān)系[3]。

急性白血病屬于臨床中死亡風(fēng)險(xiǎn)較高的一類疾病，在研究中發(fā)現(xiàn)，急性白血病患者的端粒酶活性有明顯的提高，這與國(guó)內(nèi)外許多研究均保持高度一致，這也證明急性白血病患者的端粒酶表現(xiàn)會(huì)有明顯的增強(qiáng)，同時(shí)端粒酶活性和白血病細(xì)胞的永生化關(guān)系非常突出。有研究在1996年提出關(guān)于端粒酶活性和細(xì)胞遺傳學(xué)的狀態(tài)關(guān)系，同時(shí)提出了關(guān)于11Q 和-5/-7 染色體異?；颊叩亩肆Ｃ富钚砸矔?huì)隨之改變，誘導(dǎo)分化HL60細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致端粒酶活性遭受抑制，所以認(rèn)為白血病細(xì)胞在分化過程中端粒酶可能遭受抑制[4]。在本次研究中，約有30%的初始白血病患者的端粒酶活性并沒有提升，呈現(xiàn)出陰性或低水平的狀態(tài)，在臨床中最終也發(fā)現(xiàn)這一批患者的化療治療效果比較理想，這也可能代表著端粒酶呈現(xiàn)出陰性的患者體內(nèi)白血病細(xì)胞具備比較理想的誘導(dǎo)分化功能，對(duì)于治療方式的敏感性比較強(qiáng)。伴隨著白血病治療技術(shù)的持續(xù)性發(fā)展，特別是大劑量化療與骨髓抑制技術(shù)的持續(xù)性發(fā)展，白血病在完全緩解之后診斷與治療也逐漸成為重點(diǎn)話題。在本次研究中也基本發(fā)現(xiàn)，端粒酶的活性也可以作為患者預(yù)后效果的判斷標(biāo)志之一，在白血病患者化療之后，藥物雖然可以殺滅大量的白細(xì)胞細(xì)菌，但是仍然存在殘留少量細(xì)胞并形成微量殘留白細(xì)胞，這也是白血病復(fù)發(fā)的主要原因。對(duì)此，端粒酶的活性檢測(cè)有利于在微量殘留白血病的分子生物學(xué)標(biāo)記檢測(cè)，有研究也發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)患者和初始時(shí)相比端粒酶活性有所提升，認(rèn)為端粒酶活性的提高與細(xì)胞進(jìn)一步惡化之間有直接關(guān)系。在白血病復(fù)發(fā)案例的隨訪中也發(fā)現(xiàn)，復(fù)發(fā)患者端粒酶水平降低患者更容易緩解臨床癥狀，預(yù)后效果也更加理想，所以端粒酶的活性檢測(cè)可以作為急性白血病的分期、預(yù)后以及微量殘留監(jiān)測(cè)重要方法。

表1 不同疾病患者端粒酶活性對(duì)比(±s)

表1 不同疾病患者端粒酶活性對(duì)比(±s)

疾病 例數(shù) 端粒酶活性良性血液疾病 30 0.77±0.54慢性粒細(xì)胞白血病 16 3.56±2.21急性白血病 55 2.97±3.12慢性淋巴細(xì)胞白血病 4 4.21±3.11骨髓增生異常綜合征 8 2.87±2.01多發(fā)性骨髓瘤 7 3.21±2.14

另外，慢性粒細(xì)胞白血病(CML)、骨髓增生異常綜合征(MDS)、多發(fā)性骨髓瘤(MM)均屬于臨床中比較嚴(yán)重的惡性血液疾病，其中CML 屬于臨床中發(fā)展速度比較緩慢的骨髓抑制性疾病，當(dāng)前并無預(yù)測(cè)CML 病程的指標(biāo)。有研究顯示，CML慢性期患者的端粒酶活性比較高的患者在短時(shí)間之內(nèi)進(jìn)展會(huì)呈現(xiàn)出加速期或急變期，在本次研究中這一類型患者的端粒酶活性有明顯提高，在疾病慢性階段中有部分患者呈現(xiàn)出陰性、低水平表現(xiàn)，這也論證了端粒酶活性和CML 臨床分析的關(guān)系[5]。MDS屬于潛在的急性白血病，與CML 相似，臨床表現(xiàn)也基本相同。值得一提的是，MM 和端粒酶的關(guān)系研究并不多，國(guó)外有研究發(fā)現(xiàn)，MM患者端粒酶活性提高患者的生存期有明顯縮短，這也認(rèn)為端粒酶活性可能直接表現(xiàn)MM 患者的瘤細(xì)胞增殖潛能，所以MM 標(biāo)本的檢測(cè)中，端粒酶活性提升時(shí)患者預(yù)后效果可能比較差，這也可以作為臨床中重要檢測(cè)方法之一。

本研究結(jié)果顯示，良性血液疾病患者的端粒酶活性與其他惡性血液疾病患者的端粒酶活性數(shù)據(jù)差異較大，各項(xiàng)數(shù)據(jù)對(duì)比結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述，惡性血液病細(xì)胞端粒酶活性檢測(cè)臨床意義顯著，能夠作為惡性血液疾病檢查標(biāo)志物，尤其是可以作為白血病殘留量的監(jiān)測(cè)新標(biāo)準(zhǔn)之一，值得推廣普及。