■代正陽 茅慧玲 楊金勇 崔艷軍 楊彩梅，3 王 翀*

（1.浙江農(nóng)林大學(xué)動物科技學(xué)院 浙江省畜禽綠色生態(tài)健康養(yǎng)殖應(yīng)用技術(shù)研究重點實驗室動物健康互聯(lián)網(wǎng)檢測技術(shù)浙江省工程實驗室，浙江杭州 311300；2.浙江省畜牧技術(shù)推廣總站，浙江杭州 310021；3.浙江惠嘉生物科技有限公司，浙江湖州 313307）

目前，研究蛋白水平對雜交肉牛生產(chǎn)性能影響的報道頗多，但對地方品種黃牛的蛋白營養(yǎng)需要的研究比較少。張國梁等[1]研究了不同營養(yǎng)水平日糧對西門塔爾、安格斯和夏洛來雜交肉牛生產(chǎn)性能及肉品質(zhì)的影響，育肥前期和后期，高能組對雜交牛的增重效果最好，其中安格斯雜交牛的肉品質(zhì)最佳，日糧營養(yǎng)水平對不同品種雜交肉牛的育肥效果只起一定作用。張慧等[2]研究發(fā)現(xiàn)，相同能量水平下，利木贊×魯西黃牛雜交改良公牛的粗蛋白質(zhì)表觀消化率隨蛋白質(zhì)水平升高而升高。本研究設(shè)計了高中低三個蛋白水平的日糧飼喂金華黃牛，試圖摸索出適宜的金華黃牛日糧蛋白添加水平，為地方品種黃牛的培育以及日糧配方提供參考。

1 材料與方法

1.1 動物選擇及分組

選取健康無病、體態(tài)相近的12 月齡金華黃牛24 頭，隨機分為3組，每組8個重復(fù)，分組完畢后，立即給試驗牛打耳標(biāo)編號。3組試驗牛，分別飼喂高、中、低三個蛋白水平日糧，即L、M、H三個試驗組，其蛋白水平分別為13.45%、14.95%、16.6%。每組試驗牛每天定量投喂，精粗比1∶1，粗飼料相同，均為稻草。預(yù)飼期7 d，正試期45 d。

1.2 飼料組成及飼養(yǎng)管理

試驗日糧組成及營養(yǎng)水平如表1 所示。試驗前所有試驗牛統(tǒng)一驅(qū)蟲，試驗期間所有試驗牛單欄拴系圈養(yǎng)，每天08：00 和17:00 各飼喂一次，先精后粗，試驗期間自由飲水。

表1 日糧組成及營養(yǎng)水平（%，DM）

1.3 測定指標(biāo)與方法

1.3.1 生產(chǎn)性能指標(biāo)測定

于試驗開始和結(jié)束時清晨空腹對試驗牛稱重，計算平均日增重[平均日增重=（試驗結(jié)束體重-開始體重）/試驗天數(shù)]，試驗期間對精飼料及粗飼料進行稱重，嚴(yán)格按照每天20 kg（DM）定量投喂，計算料重比[料重比=平均日采食量/平均日增重]。

1.3.2 瘤胃液采集及瘤胃發(fā)酵參數(shù)的測定

于試驗最后1 d 在晨飼后6 h 采集瘤胃液，每次采樣約50 ml，立即用pH 計測定樣品pH 值，測定前pH 計先用緩沖液進行校正。然后分裝3 管規(guī)格2 ml的PC 管，于-80 ℃保存，用以測定氨態(tài)氮（NH3-N）和總揮發(fā)性脂肪酸（T-VFA）含量。

取采集的試驗牛瘤胃液5 ml，3 500～4 000 r/min離心10 min，取上清，使用氯化銨作為標(biāo)準(zhǔn)品，用可見光分光光度計（721 型）測定700 nm 波長條件下上清中氨態(tài)氮濃度。

取采集的試驗瘤胃液1 ml，加0.2 ml濃度為25%的正磷酸，4℃高速離心（25 000×g）10 min，取上清液置于冰箱中備用，測定發(fā)酵培養(yǎng)液中乙、丙、丁酸的含量。氣相色譜法測定條件為：柱溫180 ℃；氣化室溫度200 ℃；檢測室溫度220 ℃；載氣及流速：載氣使用高純氮氣，總壓力90 kPa，總流量37.2 ml/min，柱流量0.67 ml/min，線速度23.4 cm/s，分流比50，吹掃流量3 ml/min，循環(huán)流量8 ml/min，氫氣流量40 ml/min，空氣流量400 ml/min。

1.3.3 血清生化指標(biāo)

正試期結(jié)束后，試驗牛于晨飼后3 h 用真空采血管頸靜脈無菌采血10 ml，3 000×g離心15 min制備血清于-20 ℃保存待用。用于血清中分析總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、游離脂肪酸（NEFA）、葡萄糖（GLU）、尿素氮（BUN）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（T-CHO）的含量。血清送檢于南京建成生物科技有限公司。

2 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)先使用Excel 表進行初步統(tǒng)計整理，再用SAS 軟件(SAS，2000)的PROC MIXED 程序進行統(tǒng)計分析，當(dāng)處理組間數(shù)據(jù)有顯著差異時用Duncan's法進行多重比較。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同蛋白水平對金華黃牛生產(chǎn)性能的影響（見表2）

由表2 可知，由于本試驗采用定量投喂的方式進行飼養(yǎng)試驗，所以各試驗組平均日采食量均相同。采用中蛋白水平日糧飼喂的試驗組平均日增重高于采用高蛋白和低蛋白水平的兩個試驗組，且料重比均低于其它兩組。高蛋白水平組平均日增重較低，飼料成本卻最高。由此看來，中蛋白水平日糧對金華黃牛的生產(chǎn)性能影響要優(yōu)于高、低兩個蛋白水平日糧。

3.2 不同蛋白水平對金華黃牛瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響（見表3）

表2 平均日采食量、平均日增重及料重比

表3 瘤胃液pH值、氨態(tài)氮含量、總揮發(fā)性脂肪酸含量

從表3可以看出，中蛋白水平日糧飼喂的金華黃牛瘤胃液pH值高于其它兩組，其中高蛋白水平組pH值最低。試驗牛的瘤胃液中氨態(tài)氮（NH3-N）的含量,隨著日糧中蛋白水平的提高而逐漸升高，高蛋白水平試驗組的氨態(tài)氮含量比低蛋白水平高37.92%。高蛋白水平試驗組的瘤胃液中乙酸、丙酸、丁酸以及總揮發(fā)性脂肪酸的含量均高于其它兩個蛋白水平試驗組，其中中蛋白水平試驗組的乙酸、丙酸、丁酸以及TVFA的含量最低，H組中乙酸、丙酸、丁酸以及T-VFA的含量分別高出M 組31.01%、30.41%、22.86%、30.13%。各組間瘤胃液中乙酸含量差異顯著（P＜0.05）。三個試驗組的瘤胃液中乙酸/丙酸的值差異不顯著（P＞0.05）。H 組與M、L 組瘤胃液總揮發(fā)性脂肪酸含量差異顯著（P＜0.05）。

3.3 不同蛋白水平對金華黃牛血清生化指標(biāo)的影響（見表4）

表4 不同蛋白水平對金華黃牛血清生化指標(biāo)的影響

由表4 可知，L 組血清中的總蛋白（TP）含量略高于H 組和M 組，其中M 組最低。L 組血清中白蛋白（ALB）含量高于H 組和M 組，L 組高出M 組21.98%，隨著蛋白水平的提高，ALB 的濃度有降低的趨勢。H、M 兩組的白蛋白（ALB）含量接近。H 組血清中游離脂肪酸（NEFA）的含量最高，M 組最低，H 組高出M組33.33%，差異不顯著（P＞0.05）。血清中葡萄糖（GLU）的含量，M組最高，H、L兩組數(shù)值接近。M組高出H 組9.6%。隨著日糧蛋白水平的增加，血清中尿素氮（BUN）的含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，M組血清中BUN 的含量最高，L 組最低，但各組間差異不顯著（P＞0.05）。血清中甘油三酯（TG）的含量跟試驗金華黃牛日糧中蛋白添加量呈正相關(guān)。L 組血清中的總膽固醇（T-CHO）含量最高，M 組含量最低，L 組高出M 組11.68%。本試驗條件下，三個蛋白梯度對金華黃牛的血液生化指標(biāo)均無顯著性影響。

4 討論

4.1 不同蛋白水平對金華黃牛生產(chǎn)性能的影響

本試驗結(jié)果表明，試驗金華黃牛的平均日增重并未隨著日糧中蛋白水平的提高而提高，而是呈先上升后下降的趨勢，較13.45%和16.6%的兩個蛋白水平日糧而言，飼喂14.95%的蛋白水平日糧的增重效果最佳。崔秋佳等[3]研究不同蛋白水平對荷斯坦牛生產(chǎn)性能時發(fā)現(xiàn)，中蛋白水平（15.1，%DM）組試驗牛增重最多，與本試驗結(jié)果一致。造成該情況的原因可能是日糧蛋白水平過高可能抑制了瘤胃微生物的發(fā)酵能力，導(dǎo)致瘤胃微生物不平衡從而影響了消化功能，最終使金華黃牛平均日增重降低。本試驗條件下，高蛋白水平日糧的增重效果較差，飼料成本最高，說明過高的蛋白添加水平不僅不能達到理想的增重效果，反而提高了飼料成本。

4.2 不同蛋白水平對金華黃牛瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響

pH 值是衡量瘤胃內(nèi)環(huán)境情況的重要指標(biāo)之一，瘤胃微生物生長環(huán)境的酸堿度有一定的正常范圍，pH值過高或者過低，都會影響瘤胃發(fā)酵功能，反芻動物瘤胃液pH 值正常范圍為5.5～7.5，最適宜范圍為6.6～7.0[4-5]。本試驗中瘤胃液pH 值在6.9～7.13，均在正常范圍內(nèi)。瘤胃液中氨態(tài)氮（NH3-N）是合成菌體蛋白的原料，也是瘤胃中蛋白質(zhì)、肽、氨基酸和非蛋白氮等含氮物質(zhì)降解的重要產(chǎn)物[6]，飼糧的蛋白水平會直接影響瘤胃中NH3-N的濃度，瘤胃微生物對NH3-N的利用效率決定了飼糧蛋白質(zhì)的利用效率，本試驗瘤胃液中NH3-N的濃度隨著蛋白水平的提高而提高，原因可能是隨著日糧蛋白供給量的增加，蛋白質(zhì)降解速度加快，菌體蛋白的合成速度跟不上蛋白降解速率，最終導(dǎo)致NH3-N 在瘤胃內(nèi)的積累。反芻動物瘤胃液中VFA是微生物降解碳水化合物的產(chǎn)物，是反芻動物機體主要的碳來源和能量來源，能為反芻動物提供60%～80%的能量[7]。反芻動物瘤胃代謝所需的葡萄糖主要來源于肝臟組織的糖異生作用，而丙酸是糖異生主要的前體物質(zhì)，丙酸摩爾質(zhì)量的提高意味著糖異生作用的增強。T-VFA 中乙酸/丙酸的比值反映出能量轉(zhuǎn)化效率的高低[8]。乙酸/丙酸的比值越高，則能量轉(zhuǎn)化效率越低。本試驗中，隨著日糧蛋白水平的提高，乙酸/丙酸的比值逐漸升高，說明日糧蛋白質(zhì)添加過量會降低能量轉(zhuǎn)化效率，進而影響金華黃牛增重效果。

4.3 不同蛋白水平對金華黃牛血清生化指標(biāo)的影響

總蛋白（TP）和白蛋白(ALB)是動物機體內(nèi)非常重要的營養(yǎng)指標(biāo)，從本試驗血清指標(biāo)結(jié)果來看，試驗金華黃牛血清中TP、ALB 的濃度并未隨著日糧蛋白水平的提高而增加，說明動物機體對攝入的蛋白質(zhì)的消化分解能力有限。血糖（GLU）是反映動物能量代謝的重要參數(shù)，是機體內(nèi)各組織細胞活動所需能力的最主要來源，細胞中所能儲存的肝糖是有限的，多余的糖有利于轉(zhuǎn)化為脂肪，本試驗中，M 組血清中GLU 濃度最高，日增重最快，說明多余的血糖被用來轉(zhuǎn)化為脂肪以達到快速育肥的效果。血清尿素氮(BUN)是反映蛋白質(zhì)分解代謝和氨基酸間平衡情況的重要指標(biāo)，隨著飼糧蛋白水平的提高，瘤胃內(nèi)釋放氨的速度加快，但瘤胃微生物利用氨的速率有限，血清中BUN 的濃度就會升高，本試驗中，中蛋白水平日糧組血清BUN 的含量最高，說明金華黃牛飼喂該蛋白水平日糧，蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化效率達到了峰值，繼續(xù)提高日糧蛋白水平，也不會被宿主動物消化吸收，這樣就會造成飼料資源不必要的浪費。本試驗金華黃牛的平均日增重情況證實了這一點。血清中游離脂肪酸（NEFA）的含量與脂類代謝、糖代謝有關(guān)，H 組血清中GLU 濃度最低，導(dǎo)致其生長所需能量不足，不得不動用體內(nèi)的脂肪，進而導(dǎo)致NEFA 含量升高。M 組血清中NEFA含量低于H 組，說明M 組多余的血糖轉(zhuǎn)化為脂肪后，沒有被分解。綜上所述，中蛋白水平組的血清生化指標(biāo)與其增重效果非常吻合。

5 小結(jié)

本試驗條件下，中蛋白水平（14.95%，DM）的日糧對金華黃牛生產(chǎn)性能影響最佳，瘤胃發(fā)酵參數(shù)和血清生化指標(biāo)數(shù)據(jù)說明了日糧中添加蛋白水平過高并不能被動物機體消化吸收，從而使飼料資源轉(zhuǎn)化利用率降低，造成了飼料資源的浪費和養(yǎng)殖成本的提高。