于云霞 史亞?wèn)| 陳發(fā)棣

摘要：在滁菊營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期、花芽分化期、現(xiàn)蕾期、花蕾顯色期等4個(gè)不同時(shí)期葉面噴施50 mg/L的亞硒酸鈉，另在滁菊花蕾顯色期分別噴施5、10、30、50、80 mg/L 5種濃度的亞硒酸鈉，通過(guò)比較噴硒后滁菊花朵中硒含量以及總黃酮、綠原酸的含量，探討滁菊合適的噴硒時(shí)間和噴硒濃度。結(jié)果表明，花芽分化期和花蕾顯色期葉面噴施亞硒酸鈉，滁菊花朵中總硒、茶水中硒含量顯著高于其他處理，其中花芽分化期噴施，花朵中有機(jī)硒的含量最高，花芽分化期和現(xiàn)蕾期噴施，可以顯著提高滁菊花朵中總黃酮和綠原酸的含量;隨著噴施硒濃度的升高，總硒、有機(jī)硒、無(wú)機(jī)硒的含量顯著提高，總黃酮含量呈現(xiàn)降低的趨勢(shì)，而綠原酸含量沒(méi)有顯著變化。

關(guān)鍵詞：滁菊;亞硒酸鈉;有機(jī)硒;黃酮;綠原酸

中圖分類(lèi)號(hào)： S682.1+10.6 ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A ?文章編號(hào)：1002-1302（2019）02-0131-04

藥用菊花為菊科植物菊（Chrysanthemum morifolium Ramat）的干燥頭狀花序，是我國(guó)傳統(tǒng)中藥材和保健茶飲之一[1]。滁菊作為藥用菊花主流栽培類(lèi)型之一[2]，位居四大名菊（滁菊、亳菊、貢菊、杭白菊）之首，是茶用、藥用兩用佳品[3-5]，具有疏風(fēng)熱、清肝明目、解毒等功效[6]。

硒作為人體所必需的微量元素，具有多種有益的生物學(xué)功能[7]，適量攝入硒不僅增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，拮抗重金屬毒性，而且還對(duì)癌癥的預(yù)防和治療具有重要作用[8]。調(diào)查發(fā)現(xiàn)成人每日的硒攝入量?jī)H為26.63 μg，距中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)推薦日攝入量50 μg相差甚遠(yuǎn)[9]。因此合理提高農(nóng)產(chǎn)品硒水平是補(bǔ)充人類(lèi)硒營(yíng)養(yǎng)需要的重要途徑[10]。近年來(lái)，大量的研究證明，通過(guò)根施Se或葉面噴Se的方式，能提高玉米、小麥、大豆、水稻、油菜、茄子、小白菜和番茄等農(nóng)產(chǎn)品的Se含量，這些農(nóng)產(chǎn)品通過(guò)吸收無(wú)機(jī)硒將其轉(zhuǎn)化為安全、有效的生物有機(jī)態(tài)Se，為人類(lèi)提供了安全、有效的補(bǔ)硒途徑[11-17]。我國(guó)整體而言是個(gè)硒缺乏的國(guó)家，有72%的土壤缺硒[18]，但同時(shí)硒是人體所必需的微量元素，須在硒含量安全標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)補(bǔ)充，不合理地添加硒的方式可導(dǎo)致作物硒含量超標(biāo)[19]。

向土壤中添加硒肥提高藥用菊花Se含量，存在硒利用率不高的缺點(diǎn)[11]，但這種方式在黃山貢菊上富硒效果較好[20]，對(duì)杭白菊花前2 d噴施1次效果不佳，而2次可以有效提高硒的含量[21]。滁菊素有“金心玉瓣，翠蒂天香”之稱(chēng)，生產(chǎn)富硒滁菊對(duì)滁菊豐富產(chǎn)品種類(lèi)及提升產(chǎn)品品質(zhì)意義重大，目前尚無(wú)生產(chǎn)富硒滁菊的報(bào)道。

本試驗(yàn)在大田栽培條件下，向滁菊葉面噴施亞硒酸鈉，探討滁菊最佳的噴硒時(shí)間和噴硒濃度，為開(kāi)發(fā)具有保健功能的富Se菊花茶等保健飲品，提升滁菊的產(chǎn)品品質(zhì)、實(shí)現(xiàn)人們安全補(bǔ)Se的途徑提供技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試材料滁菊種源由安徽菊泰滁菊草本科技有限公司滁州南譙區(qū)大柳基地提供。試驗(yàn)地點(diǎn)位于南京農(nóng)業(yè)大學(xué)菊花試驗(yàn)基地。滁菊采用扦插育苗，定植前20 d選取生長(zhǎng)一致、健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的插穗扦插。插穗長(zhǎng)8～10 cm，經(jīng)多菌靈和萘乙酸混合液浸泡10 min后扦插。扦插基質(zhì)為 V（蛭石） ∶ V（珍珠巖）=1 ∶ 1，扦插溫度為22～30 ℃，空氣濕度為80%。定植前翻耕土壤，翻耕深度為25 cm左右。整平耙細(xì)后作畦，畦寬2 m，畦高30 cm，兩畦間距為30 cm，四周設(shè)有排水溝。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

設(shè)置2個(gè)試驗(yàn)，試驗(yàn)1：在滁菊成株后的不同時(shí)期葉面噴施亞硒酸鈉（濃度為50 mg/L），4個(gè)噴施的時(shí)期分別為營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期（8月23日）、花芽分化期（9月8日）、現(xiàn)蕾期（9月24日）、花蕾顯色期（10月11日）;試驗(yàn)2：在滁菊花蕾顯色期噴施不同濃度的亞硒酸鈉，噴施濃度分別為5、10、30、50、80 mg/L。選擇無(wú)風(fēng)的下午至黃昏時(shí)分（或多云天氣）進(jìn)行葉面噴施，若噴施后的24 h內(nèi)遇雨，則補(bǔ)噴[22]，每個(gè)處理重復(fù)3次，每個(gè)重復(fù)含10個(gè)單株，噴硒程度以葉正反面均勻布滿(mǎn)霧狀水滴為宜，對(duì)照噴施等量蒸餾水。

1.3 樣品準(zhǔn)備

盛花期分別采收不同處理的花朵，各處理的鮮花在65 ℃烘干，將烘干的樣品分成2份，1份粉碎、過(guò)20目篩，裝自封袋待用，用于測(cè)定花朵中總硒、無(wú)機(jī)硒、有機(jī)硒、總黃酮、綠原酸的含量[21];另外1份用于茶水中硒含量的測(cè)定，具體方法為取3朵烘干的滁菊花，加200 mL沸水沖泡，待茶水冷卻后，取10 mL茶水進(jìn)行硒含量的測(cè)定[9]。

1.4 測(cè)定方法

1.4.1 總硒含量的測(cè)定方法 精確稱(chēng)取0.1 g滁菊粉末，置于PTFE微波消解罐中，加入2 mL濃硝酸消解，待消解結(jié)束冷卻后，將消解液在電熱板上加熱到伴有白霧時(shí)，繼續(xù)加熱至約2 mL左右，冷卻加6 mol/L鹽酸溶液2 mL，加熱至清亮無(wú)色并伴有白霧出現(xiàn)，冷卻，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，加入濃鹽酸2 mL，用重蒸水定容后混勻待測(cè)，同時(shí)做試劑空白。參考GB 5009.93—2017《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品硒的測(cè)定》，采用氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法測(cè)定滁菊花朵中硒含量。

1.4.2 黃酮和綠原酸含量的測(cè)定方法 黃酮含量的測(cè)定參照舒俊生等建立的乙醇超聲波提取總黃酮法[23]，選用紫外分光光度計(jì)測(cè)定其含量。

綠原酸的提取與含量測(cè)定：參考2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》中的測(cè)定方法，選用超高效液相色譜法（UPLC）進(jìn)行測(cè)定[24-25]。

1.5 數(shù)據(jù)處理

用SPSS 20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，用Duncans的新復(fù)極差法測(cè)定差異顯著性，用Excel進(jìn)行繪圖制表。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期噴硒對(duì)滁菊花朵中硒含量的影響

研究發(fā)現(xiàn)，在不同時(shí)期葉面噴施亞硒酸鈉，均顯著提高了滁菊花朵中硒含量（表1）。其中在花芽分化期和花蕾顯色期對(duì)滁菊進(jìn)行噴硒處理，花朵中總硒含量顯著高于其他處理，花芽分化期噴施，花中有機(jī)硒的含量占總硒含量的72.49%，相對(duì)其他處理最高;花蕾顯色期噴施，花中有機(jī)硒含量占總硒含量的62.56%。不同時(shí)期噴施亞硒酸鈉，茶湯含硒的絕對(duì)含量存在較大差異，但各處理菊花茶中硒的浸出率相差不大，在14.29%～16.41%之間?；ɡ亠@色期噴施菊花茶中硒的含量最高，硒的浸出率可達(dá)16.41%。

2.2 不同濃度亞硒酸鈉處理對(duì)滁菊花朵中硒含量的影響

研究發(fā)現(xiàn)，隨著噴硒濃度的升高，滁菊中總硒、有機(jī)硒的含量顯著增大，噴硒濃度為80 mg/L時(shí)，花中硒含量可達(dá) 3.92 μg/g，各處理間有機(jī)硒占總硒的比例相差不大，在 64.89%～69.39%之間。隨著噴硒濃度的升高，茶水中硒的含量有增大的趨勢(shì)，噴施濃度為80 mg/L時(shí)，茶水中硒的浸出率最高，可達(dá)16.84%（表2）。

2.3 滁菊生長(zhǎng)發(fā)育的不同時(shí)期噴硒對(duì)滁菊花朵中總黃酮、綠原酸含量的影響

施硒對(duì)滁菊中總黃酮、綠原酸含量有明顯影響（圖1）。與對(duì)照相比，施硒能夠顯著提高滁菊中主要藥效成分總黃酮和綠原酸的含量。前3個(gè)時(shí)期噴硒滁菊中總黃酮、綠原酸的含量顯著高于對(duì)照;第4個(gè)時(shí)期噴硒滁菊中總黃酮、綠原酸的含量與對(duì)照相比沒(méi)有顯著差異?；ㄑ糠只诤同F(xiàn)蕾期噴硒，效果最好，滁菊中總黃酮、綠原酸的含量分別達(dá)到94.21、92.92 mg/g 和7.29、7.18 mg/g。

2.4 不同濃度亞硒酸鈉處理對(duì)滁菊花朵中總黃酮、綠原酸含量的影響

研究發(fā)現(xiàn)，不同濃度的硒處理對(duì)滁菊中總黃酮含量的影響顯著，滁菊花中總黃酮含量隨著施硒量的增加而減少，但較對(duì)照處理仍有明顯提高（圖2）。當(dāng)施硒濃度為5 mg/L時(shí)，滁菊花中總黃酮含量最高，可達(dá)88.08 mg/g。與對(duì)照相比，不同濃度處理對(duì)滁菊中綠原酸的含量沒(méi)有顯著影響。

3 討論

研究表明，植物體富硒途徑主要通過(guò)根部和植物葉面吸收，植物體根部從土壤中吸收硒元素，再轉(zhuǎn)運(yùn)到地上部[26]，不同狀態(tài)硒元素運(yùn)轉(zhuǎn)速率有所不同：硒酸鹽>有機(jī)硒>亞硒酸鹽[27-28]，轉(zhuǎn)運(yùn)到葉片中的硒酸鹽含量最多。大量研究表明，通過(guò)葉面噴硒，能提高玉米、小麥、大豆、水稻、油菜、茄子、小白菜和番茄等農(nóng)產(chǎn)品的Se含量[11]，本試驗(yàn)采用葉面噴施亞硒酸鈉的方法，可以提高硒的生物可利用性。周勛波等發(fā)現(xiàn)春小麥在孕穗期噴施效果優(yōu)于拔節(jié)期或開(kāi)花期，在提高籽粒中硒的含量方面效果更為顯著[29]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在滁菊生長(zhǎng)發(fā)育的不同時(shí)期噴硒，滁菊中硒的含量都顯著增大，花芽分化期噴硒效果最佳，有機(jī)硒的轉(zhuǎn)化率最高。張慜等研究發(fā)現(xiàn)，小洋菊、大洋菊經(jīng)富硒處理后硒含量明顯提高[21]，本試驗(yàn)結(jié)果與之一致;其中有機(jī)硒轉(zhuǎn)化率僅達(dá)31%～55%，低于本試驗(yàn)的有機(jī)硒轉(zhuǎn)化率，而且還發(fā)現(xiàn)噴施硒2次有利于硒吸收和有機(jī)硒轉(zhuǎn)化。

有關(guān)研究表明，人體攝取有機(jī)硒，高效、安全，而食用無(wú)機(jī)硒，不僅低效，而且易中毒，人體對(duì)有機(jī)硒的吸收效果優(yōu)于無(wú)機(jī)硒。有機(jī)硒進(jìn)入食物鏈也比無(wú)機(jī)硒安全、有效[30]。作物可以通過(guò)自身的生理代謝，將生物活性低的無(wú)機(jī)硒轉(zhuǎn)化為生物活性高的有機(jī)硒[9]。富硒胡蘿卜中有機(jī)硒的轉(zhuǎn)化率最高達(dá)84%[31];富硒大蒜中有機(jī)硒占總硒的80%以上[32];富硒茄子中有機(jī)硒的轉(zhuǎn)化率最高達(dá)84%[14];薛丹等對(duì)烏龍茶硒肥試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，各處理茶葉的有機(jī)硒占全硒量73.8%～87.3%[9]。本試驗(yàn)中在不同時(shí)期對(duì)滁菊噴硒，滁菊中有機(jī)硒占全硒含量的62.56%～72.49%，對(duì)人體補(bǔ)充有機(jī)硒十分有益。

研究發(fā)現(xiàn)硒能顯著提高綠茶的感官品質(zhì)，游離氨基酸和蛋白質(zhì)含量顯著提高，茶多酚和葉綠素含量則沒(méi)有顯著差異[33]。施硒能夠顯著提高藥用菊花中主要藥效成分總黃酮和綠原酸的含量[11]，富硒菊花茶可作為一種補(bǔ)硒飲料，茶湯含硒量是最重要的品質(zhì)指標(biāo)[34-35]。本試驗(yàn)表明，不同時(shí)期噴施亞硒酸鈉，茶湯含硒量存在較大差異最低為0.02 μg/g，而高的可達(dá)0.66 μg/g，但各處理菊花茶中硒的浸出率相差不大，在14.29%～16.41%之間。噴施亞硒酸鈉后，滁菊花中總黃酮和綠原酸含量顯著增高，與前人研究結(jié)果一致，花芽分化期和現(xiàn)蕾期噴施滁菊中總黃酮和綠原酸增幅最大。隨著噴硒濃度的升高，綠原酸的含量沒(méi)有顯著變化;滁菊中總黃酮含量呈現(xiàn)降低的趨勢(shì)，但顯著高于對(duì)照，與田秀英等在苦蕎上的研究[36]一致。

在滁菊生長(zhǎng)發(fā)育的不同時(shí)期進(jìn)行噴硒處理，滁菊花朵中硒含量顯著增加，花芽分化期和花蕾顯色期噴施，滁菊花朵中總硒、茶水中硒含量顯著高于其他處理;花芽分化期噴施，花朵中有機(jī)硒的含量最高;花芽分化期和現(xiàn)蕾期噴施，能顯著提高滁菊中總黃酮和綠原酸的含量。隨著亞硒酸鈉噴施濃度的升高，滁菊花朵中硒含量顯著增加，總黃酮含量呈現(xiàn)降低趨勢(shì)，噴施濃度為80 mg/L時(shí)，滁菊中總黃酮含量和對(duì)照相比差異不顯著。綜上所述，建議滁菊的最佳噴硒時(shí)間為花芽分化期，最佳噴施濃度為50 mg/L。

菊花是富硒能力較強(qiáng)的植物[6]，本研究在滁菊上結(jié)果也支持此結(jié)論，因此，通過(guò)富硒菊花生產(chǎn)，可提高菊花品質(zhì)，增加了通過(guò)飲用富硒菊花茶補(bǔ)充人體硒元素的途徑。行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定富硒菊花茶含硒量范圍為0.25～4.00 mg/kg[37]，本試驗(yàn)中所采用的各種添加方式中滁菊花朵中硒含量最高為 1.95 mg/kg，處于標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，是可行的添加量。按照正常的飲用量及滁菊硒的浸出率按16%計(jì)算，實(shí)際獲得硒在正常人每日推薦的范圍內(nèi)，因此富硒滁菊菊花茶是安全、有效的補(bǔ)硒飲品。

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