丁蘇會 刁玉華
摘要:經(jīng)過三氯乙酸、乙腈超聲震蕩離心提取,混合型陽離子交換固相萃取柱凈化后的樣品采用HPLC法測定。色譜條件:AgilentEclipseXDB-C8柱(4.6x250mm),流動相為乙腈一離子對緩沖液(pH=3.0),體積比]6:84,流速為1.OmL/min;檢測波長為240nm;柱溫40℃;進樣量為20μL。本法相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.34%,最低檢出限為0.05 μ9/rnL,回收率為90%-]05%。本法操作簡便,樣品出峰快,經(jīng)濟省時,準(zhǔn)確可靠,適用于液態(tài)奶中三聚氰胺的含量測定。
關(guān)鍵詞:高效液相色譜法;液態(tài)奶;三聚氰胺
一、實驗儀器與試劑
儀器。安捷倫Agilent1260高效液相色譜儀;電子天平;固相萃取柱;pH計;數(shù)控超聲波萃取器;可控溫震蕩箱;離心機(轉(zhuǎn)速不低于4000r/min);漩渦混合器;電熱恒溫水浴鍋;超純水器。
試劑。甲醇(色譜純)、乙腈(色譜純)以及辛烷磺酸鈉(色譜純25g/瓶);三氯乙酸(1%);氨水:含量為25% - 28%;甲醇水溶液:甲醇+水(v/v體積比)=50+50;氨化甲醇溶液(5%):氨水+甲醇(v/v體積比)-5+95;離子對緩沖液:準(zhǔn)確稱取2.lOg檸檬酸和2.16g辛烷磺酸鈉,加入980mL水溶解,調(diào)節(jié)pH至3.0,定容到IL備用。
二、樣品處理
提取。稱取2.Og(精確至O.Olg)試樣于50mL具塞塑料離心管中,加入15mL三氯乙酸溶液和SmL乙腈,超聲提取20min,再震蕩提取lOmin,以6000r/min離心20min。上清液經(jīng)三氯乙酸溶液潤濕的濾紙過濾后,用三氯乙酸溶液定容至25mL,移取5mL濾液,用超純水定容至lOmL容量瓶中混勻做待凈化液。
凈化。將待凈化液轉(zhuǎn)移至已活化的固相萃取柱中,依次用3mL水和3mL甲醇洗滌,抽至近干,用6mL氨化甲醇溶液洗脫。整個固相萃取過程流速不超過1mL/min。洗脫液于50℃的水浴鍋上蒸干,殘留物用1mL流動相定容,渦旋混合1mm,過0.45μm微孔濾膜得試樣液供HPLC測定。
三、高效液相色譜法測定
色譜條件。色譜柱:AgilentEclipseXDB-C84.6×250mm;流動相:離子對緩沖液一乙腈(86+14,體積比),混勻。流速:1.OmL/min。柱溫:40℃。波長:240nm。進樣量:20μL。
標(biāo)準(zhǔn)儲備液及標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:用流動相將三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液逐級稀釋得到濃度為0.5、1、2、5、10、20μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液,濃度由低到高進樣進行檢測,如表1所示。
由表1可知,三聚氰胺的質(zhì)量濃度為0.5115μg/mL20.46μg/mL時,其峰面積y與其質(zhì)量濃度x(“g/mL)的線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)為0.9996,線性回歸方程為:y=79.56526x-5.56393。
精密度實驗。取濃度為10.23μg/mL的三聚氰胺加標(biāo)點連續(xù)進樣6次,計算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD),如表2所示。
由表2可知,高效液相色譜法測定液態(tài)奶中三聚氰胺含量的平均回收率為99. 19%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.34%,由此可知,本實驗方法的精密度良好,符合實驗?zāi)康募耙蟆?/p>
樣品檢測及樣品加標(biāo)實驗。選取市場上隨機抽檢的6批次牛奶作為實驗樣品進行檢測,結(jié)果如表3。
由表3可知,高效液相色譜法測定乳制品中三聚氰胺的回收率在90% - 105%之間,其分為低、中、高三個濃度梯度的平均回收率分別為103.7%、94.1%、99.2%。
檢出限。通過3倍信噪比計算得該方法的檢出限為0.05μg/mL。
四、結(jié)論
利用高效液相色譜法,采用固相萃取凈化樣品,離子對試劑緩沖溶液為流動相的方法對牛奶中的三聚氰胺進行檢測,試驗結(jié)果表明:回收率高,檢出限低,重現(xiàn)性好。同時該方法操作簡便,能夠準(zhǔn)確快速得到檢測結(jié)果,滿足食品檢測實際工作中對液態(tài)乳制品中三聚氰胺的檢測需要。