食品中維生素C的高效液相色譜檢測

李美慧

摘要：高效液相色譜檢測方法具有很強的分辨率、靈敏度，且能夠同時測定幾種性質(zhì)類似的食品成分。本文在闡述高效液相色譜法的基礎(chǔ)上，具體分析高效液相色譜檢測法在食品維生素C成分檢測中的應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜;維生素C;檢測應(yīng)用

高效液相色譜檢測法是在上世紀(jì)六十年代發(fā)展起來的一種同新型分析、分離技術(shù)，是在以往液相色譜法基礎(chǔ)上引入的氣相色譜法理論，之后在高效、高靈敏度檢測器的基礎(chǔ)上發(fā)展而成。在使用的過程中，高效液相色譜法具有很強的靈敏度、分辨率，且色譜柱在使用的過程中能夠被反復(fù)利用，因為被人們廣泛應(yīng)用在生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、無機分析等領(lǐng)域。

一、材料和方法

儀器和試劑的選擇。實驗檢測儀器選擇Agilentll00高效液相色譜儀，輔助配合應(yīng)用二極管陣列檢測儀器。實驗試劑包含甲醇、辛烷磺酸鈉和應(yīng)用甲醇辛烷磺酸鈉配置成0. 1%水溶液;三氟乙酸;67抗環(huán)血酸。利用儀器設(shè)備準(zhǔn)確稱量lOmg的抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)品，并按照每升O.lmol的比例溶解鹽酸，之后用高純度水將純水定容在100毫升左右[1]。

色譜條件的確定。實驗操作色譜柱型號為250mmx4.6mmx5μm;流動相是甲醇和0.1%比例的辛烷磺酸鈉溶液;檢測波長為230mm;樣本的流動速度是每分鐘1ml;樣品的進(jìn)樣量是1OμL。在確定好色譜條件之后以濃度為基本橫坐標(biāo)、峰面積數(shù)值為縱坐標(biāo)繪制工作曲線，之后通過回歸計算得到回歸方程Y=496.5XC - 149.1，回歸系數(shù)是0.9996。

樣品檢測和結(jié)果計算。在實驗中，對于液體樣品不需要進(jìn)行額外的處理，在應(yīng)用濾膜過濾之后按照相應(yīng)的色譜條件進(jìn)行直接進(jìn)樣處理。固體樣品則需要按照相關(guān)規(guī)定稱取一定數(shù)量的樣品，在樣品容器中加入蒸餾水，一直到樣品達(dá)到25mL，超聲波提取5分鐘。根據(jù)樣品的峰面積計算出樣品中維生素C的含量。

二、結(jié)果和討論

第一，色譜條件的選擇。首先，檢測波長的選擇。將配置完成的維生素C溶液放置在二極管陣列進(jìn)行波長掃描，發(fā)現(xiàn)維生素C溶液在239nm位置上的時候會被最大限度吸收，為此將239nm作為實驗檢測波長。維生素C的紫外吸收圖譜和峰純度圖譜如圖1所示。其次，流動相選擇?？紤]到抗壞血酸在酸性環(huán)境中比較穩(wěn)定，因而流動相的酸堿值確定為酸性，具體數(shù)值在3-4.5之間[2]。同時，應(yīng)用辛烷磺酸鈉作為離子檢測試劑。第二，精密度試驗。通過精密度試驗操作發(fā)現(xiàn)，RSD的數(shù)值在0.56% -1.18%。第三，回收率試驗。應(yīng)用加標(biāo)回收的方式對試驗的精確度進(jìn)行評價，之后選取其中的五份樣本進(jìn)行色譜測定，測定結(jié)果如表1所示。第四，方法的線性范圍和檢出限。在色譜條件下制定標(biāo)準(zhǔn)的工作曲線，具體如圖2所示，根據(jù)工作曲線了解到實驗的線性范圍為0.3μg/ML - 1.6μg/ML。第五，實驗測定結(jié)果和熒光法測定結(jié)果比較如表2所示。

從以上的實踐操作情況來看，高效液相色譜法不僅能夠測定食品或者保健品中的維生素成分，而且還能夠在檢測分析的過程中采取定量和定性結(jié)合的方式同時分離和測定幾種維生素，從而幫助人們更好地了解食品及保健品中的成分，確保食品安全。但是從實際應(yīng)用情況來看，對于不同食品和保健品，維生素C的樣品預(yù)處理和色譜分析條件不同，為此，在具體操作中需要相關(guān)人員結(jié)合試驗條件的不同來選擇適合的色譜分析方法，從而提升樣品測定成效。

參考文獻(xiàn)

[1]魯杰，楊大進(jìn)，王竹天.固相萃取一高效液相色譜法測定保健食品中維生素B12的研究[J].中國食品衛(wèi)生雜志，2004，16（4）：324-328.

[2]王愛月，張向兵，李發(fā)生.高效液相色譜法測定食品及保健品中維生素C含量的研究[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2006.16（10）：1175-1176.