白橋 劉珍珍 徐皓

中圖分類號 R917；R927.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 1001-0408（2019）05-0681-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.05.21

摘 要 目的：建立黃姜中薯蕷皂苷含量測定的方法，并對不同產(chǎn)地野生黃姜中薯蕷皂苷含量進(jìn)行比較。方法：采用高效液相色譜（HPLC）法，色譜柱為Inertsil ODS-3，流動相為乙腈-水（50 ∶ 50，V/V），流速為1.0 mL/min，柱溫為30 ℃，檢測波長為203 nm，進(jìn)樣量為10 μL。采用建立的方法測定不同產(chǎn)地（陜西商洛、陜西安康、河南內(nèi)鄉(xiāng)、云南宣威、四川德陽、湖北十堰、湖南張家界、湖南常德）野生黃姜中薯蕷皂苷的含量，并比較其差異。結(jié)果：薯蕷皂苷檢測質(zhì)量濃度線性范圍為4.16～165.6 μg/mL（r=0.999 9），精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性試驗(yàn)的RSD均<2%（n=5或n=6），薯蕷皂苷平均回收率為101.18%（RSD=1.27%，n=6）。不同產(chǎn)地野生黃姜中薯蕷皂苷含量由高到低依次為四川德陽（1 405.36 μg/g）>陜西商洛（1 201.79 μg/g）>湖南張家界（1 035.18 μg/g）>陜西安康（632.64 μg/g）>湖南常德（598.64 μg/g）>云南宣威（425.34 μg/g）>河南內(nèi)鄉(xiāng)（350.13 μg/g）>湖北十堰（338.39 μg/g）。結(jié)論：該法操作簡便、準(zhǔn)確，可用于黃姜中薯蕷皂苷含量的測定；不同產(chǎn)地野生黃姜中薯蕷皂苷含量差異明顯，其中四川德陽產(chǎn)地的薯蕷皂苷含量最高。

關(guān)鍵詞 黃姜；不同產(chǎn)地；薯蕷皂苷；含量比較；高效液相色譜法

Comparison of Diosgenin Content in Wild Dioscorea zingiberensis from Different Habitats

BAI Qiao，LIU Zhenzhen，XU Hao（School of Bioscience and Engineering，Shaanxi University of Technology，Shaanxi Hanzhong 723000，China）

ABSTRACT OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of diosgenin in Dioscorea zingiberensis，and to compare the contents of diosgenin in wild D. zingiberensis from different habitats. METHODS：HPLC method was adopted. The determination was performed on Inertsil ODS-3 column with mobile phase consisted of acetonitrile-water （50 ∶ 50，V/V） at the flow rate of 1.0 mL/min. The column temperature was set at 30 ℃. The detection wavelength was set at 203 nm，and sample size was 10 μL. Established method was used to determine the contents of diosgenin in wild D. zingiberensis from different habitats （Shaanxi Shangluo，Shaanxi Ankang，Henan Neixiang，Yunnan Xuanwei，Sichuan Deyang，Hubei Shiyan，Hunan Zhangjiajie，Hunan Changde）. The differences of diosgenin content were compared. RESULTS：The linear range of diosgenin were 4.16-165.6 μg/mL （r= 0.999 9）. RSDs of precision，reproducible and stability tests were all lower than 2% （n=5 or n=6）. The average recovery of diosgenin was 101.18% （RSD=1.27%，n=6）. The content of diosgenin in wild D. zingiberensis from different habitats were in descending order，i.e. Sichuan Deyang （1 405.36 μg/g）>Shaanxi Shangluo （1 201.79 μg/g）>Hunan Zhangjiajie （1 035.18 μg/g）>Shaanxi Ankang （632.64 μg/g）>Hunan Changde （598.64 μg/g）>Yunnan Xuanwei （425.34 μg/g）>Henan Neixiang （350.13 μg/g）>Hubei Shiyan （338.39 μg/g）. CONCLUSIONS：Established method is simple，accurate and suitable for the content determination of diosgenin in D. zingiberensis. The contents of diosgenin in wild D. zingiberensis from different habitats are different significantly，and the content of diosgenin in the samples from Sichuan Deyang is the highest.

KEYWORDS Dioscorea zingiberensis； Different habitats； Diosgenin； Content comparison； HPLC

黃姜又稱盾葉薯蕷（Dioscorea zingiberensis C. H. Wright）、火頭根，是薯蕷科薯蕷屬多年生纏繞性藤本植物，是我國特有種[1-2]。黃姜分布范圍較廣，生態(tài)環(huán)境對其形態(tài)性狀與活性成分積累等方面影響顯著[3-6]。黃姜以其根狀莖入藥，民間將其搗爛用于治療各種外科炎癥，如皮膚急性化膿性感染、蜂哲、蟲咬等[7]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為其味甘、苦、涼，具有祛痰、消食利水、舒筋活血以及敗火的功效[8]。由于市場上對薯蕷資源的需求增加，但又缺乏科學(xué)計(jì)劃性的采挖，使得野生盾葉薯蕷資源量急劇下降[9-10]。

黃姜主要活性成分薯蕷皂苷為甾體皂苷類，具有祛痰、脫敏、抗衰老、抗腫瘤、抗炎、降壓、降血脂、改善動脈粥樣硬化、保護(hù)血管內(nèi)皮功能、抑制肝臟纖維化等作用，也是合成甾體激素和口服避孕藥的原料[11-15]。薯蕷皂苷在黃姜中含量較高，是篩選優(yōu)良野生黃姜品種的首要物質(zhì)基礎(chǔ)[16]。本研究建立高效液相色譜（HPLC）法測定黃姜中薯蕷皂苷的含量，并對不同產(chǎn)地（陜西商洛、陜西安康、河南內(nèi)鄉(xiāng)、云南宣威、四川德陽、湖北十堰、湖南張家界、湖南常德）野生黃姜中薯蕷皂苷含量進(jìn)行比較，為篩選高含量薯蕷皂苷的野生黃姜及其良種選育與栽培提供一定的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器

1260 HPLC儀（美國安捷倫有限公司，配有DAD檢測器）；JJ224BC電子分析天平（常熟市雙杰測試儀器廠）；HC-300Y2中藥材粉碎機(jī)（永康市天祺盛世工貿(mào)有限公司）；DHC-9146A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；UPH-I-5/10/20T超純水儀（四川優(yōu)普超純科技有限公司）。

1.2 藥品與試劑

陜西商洛、陜西安康、河南內(nèi)鄉(xiāng)、云南宣威、四川德陽、湖北十堰、湖南張家界、湖南常德野生黃姜于2017年10月采集（隨機(jī)采樣法[17]采集），經(jīng)陜西理工大學(xué)徐皓副教授鑒定為黃姜根莖；薯蕷皂苷對照品（上海源葉生物科技有限公司，批號：B21176，純度：≥98%）；乙腈、甲醇為色譜純，乙醇為分析純，水為超純水。不同產(chǎn)地野生黃姜的基本信息見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Inertsil ODS-3（150 nm×4.6 nm，5 μm）；流動相為乙腈-水（50 ∶ 50，V/V）；流速為1.0 mL/min；檢測波長為203 nm；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為10 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 薯蕷皂苷對照品溶液 精密稱取薯蕷皂苷對照品6.90 mg，加甲醇溶解并定容至25 mL，配制成質(zhì)量濃度為0.276 mg/mL的薯蕷皂苷對照品溶液，再經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，備用。

2.2.2 供試品溶液 取湖南張家界野生黃姜樣品，洗凈，切片，60 ℃烘干后，粉碎過60目篩，精確稱取粉末0.28 g，置于具塞錐形瓶中，加入60%的乙醇溶液25 mL，稱質(zhì)量，超聲（功率：100 W，頻率：50 Hz）處理40 min后，放置至室溫，再次稱質(zhì)量，用60%乙醇溶液補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下薯蕷皂苷對照品溶液、供試品溶液各10 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果，薯蕷皂苷出峰處未見其他干擾峰，且與相鄰峰分離度大于1.5，理論板數(shù)以薯蕷皂苷峰計(jì)大于5 000。色譜圖見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下的薯蕷皂苷對照品溶液適量，制成質(zhì)量濃度為4.16、13.8、27.6、88.2、110.4、165.6 μg/mL系列溶液，精密量取10 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以薯蕷皂苷峰面積為縱坐標(biāo)（y）、薯蕷皂苷質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x）進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程為y=2.967 6x+8.662 8（r=0.999 9）。結(jié)果，薯蕷皂苷在4.16～165.6 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

取“2.4”項(xiàng)下制成的質(zhì)量濃度為27.6 μg/mL的薯蕷皂苷對照品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，并計(jì)算峰面積RSD。結(jié)果，薯蕷皂苷峰面積的RSD為0.40%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取陜西商洛野生黃姜樣品，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，室溫下，分別放置0、2、4、6、8 h后按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，薯蕷皂苷峰面積的RSD為0.73%（n=5），表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取陜西安康野生黃姜樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，薯蕷皂苷峰面積的RSD為1.02%（n=6），表明本試驗(yàn)方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的湖南張家界野生黃姜樣品粉末0.28 g，平行6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液。再取5 mL的供試品溶液與1 mL“2.4”項(xiàng)下制成的質(zhì)量濃度為88.2 μg/mL薯蕷皂苷對照品溶液混合，定容至10 mL量瓶中，過濾，取續(xù)濾液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果，薯蕷皂苷平均回收率為101.18%，RSD為1.27%（n=6）。

2.9 樣品含量測定

取陜西商洛、陜西安康、河南內(nèi)鄉(xiāng)、云南宣威、四川德陽、湖北十堰、湖南張家界、湖南常德野生黃姜樣品，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，每個(gè)產(chǎn)地平行制備3批，按照“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計(jì)算薯蕷皂苷含量。結(jié)果，陜西商洛、陜西安康、河南內(nèi)鄉(xiāng)、云南宣威、四川德陽、湖北十堰、湖南張家界、湖南常德野生黃姜中薯蕷皂苷的含量分別為1 201.79、632.64、350.13、425.34、1 405.36、338.39、1 035.18、598.64 μg/g，詳見表3。

3 討論

3.1 流動相的選擇

盾葉薯蕷中甾體皂苷類成分種類多、結(jié)構(gòu)相似，且均處于末端吸收，分離難度較大[11]。筆者考察了流動相中乙腈與水的體積比分別為40 ∶ 60、45 ∶ 55、50 ∶ 50、55 ∶ 45、60 ∶ 40時(shí)，對薯蕷皂苷峰形的影響，結(jié)果表明，當(dāng)乙腈與水的體積比為50 ∶ 50時(shí)，薯蕷皂苷峰形及分離度較好，靈敏度高，故在本試驗(yàn)中采用該體積比。

3.2 提取溶劑的選擇

筆者在前期試驗(yàn)中以50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%乙醇溶液以及無水乙醇和甲醇為提取溶液，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以60%乙醇為提取溶液時(shí)，所測得的薯蕷皂苷峰面積最大，且雜峰少。

3.3 不同產(chǎn)地黃姜中薯蕷皂苷含量差異分析

現(xiàn)有文獻(xiàn)多是報(bào)道某個(gè)省份黃姜品種的品質(zhì)，均不能準(zhǔn)確體現(xiàn)出全國不同省份黃姜的品質(zhì)[18-26]。由于野生品種分布范圍廣且不集中，本試驗(yàn)的樣品采自6個(gè)省份，且為了準(zhǔn)確分析不同產(chǎn)地黃姜的品質(zhì)差異，采用隨機(jī)采樣法進(jìn)行樣品收集。同時(shí)，本試驗(yàn)建立的含量測定方法操作簡便準(zhǔn)確，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性好，可用于黃姜的有效藥用成分薯蕷皂苷的測定。結(jié)果表明，8個(gè)野生黃姜樣品中薯蕷皂苷含量差異較為明顯，薯蕷皂苷含量由高到低依次為四川德陽（1 405.36 μg/g）>陜西商洛（1 201.79 μg/g）>湖南張家界（1 035.18 μg/g）>陜西安康（632.64 μg/g）>湖南常德（598.64 μg/g）>云南宣威（425.34 μg/g）>河南內(nèi)鄉(xiāng)（350.13 μg/g）>湖北十堰（338.39 μg/g）。

綜上所述，本研究建立了HPLC法測定黃姜中薯蕷皂苷的含量，并比較了8個(gè)不同產(chǎn)地野生黃姜樣品中薯蕷皂苷含量差異，可為黃姜藥材良種選育與栽培提供一定的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2018-09-11 修回日期：2018-12-31）

（編輯：唐曉蓮）