楊春艷 葉玉華 鄒蘭

刺梨原汁酒是貴州得天獨(dú)厚的野生刺梨資源優(yōu)勢，選用優(yōu)質(zhì)刺梨鮮果經(jīng)過原料→破碎（壓榨）→發(fā)酵→分離→貯存（澄清處理）→原汁酒。刺梨具有豐富的營養(yǎng)成分，是藥食同源的品種之一，由其開發(fā)而得的刺梨原汁酒基本保持了原有的營養(yǎng)價(jià)值，而總糖含量決定了發(fā)酵程度的好壞和成品酒的品質(zhì)，建立刺梨原汁酒總糖的測定方法為評價(jià)酒的品質(zhì)和改進(jìn)工藝關(guān)健點(diǎn)提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

儀器和試劑

TU-1901紫外分光光度計(jì)（北京普析）；賽多利斯AUY220電子天平（萬分之一）；CPA2250電子天平（十萬分之一）；TAISITE數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋；KQ- 300VDE型雙頻數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

刺梨原汁酒6批；D-無水葡萄糖對照品（中國食品藥品檢定研究院 批號：110833-201205），其它試劑均為分析純；實(shí)驗(yàn)室用水為二級純化水。

方法

刺梨原汁酒總糖的提取。精密吸取刺梨原汁酒0.5ml至250ml容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，即得。

最大吸收波長的確定。精密稱取18.80mg的D-無水葡萄糖對照品溶液置于100ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻，再精密吸取20ml至100ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密吸取1.0ml對照溶液按照蒽酮-硫酸試劑顯色方法顯色，將葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液于500～750nm范圍掃描，確定在625nm處有最大吸收。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。精密稱取D-無水葡萄糖18.80mg，置100 mL量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻 ，再精密吸取10ml，置50ml量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻，制得0.0376mg/ml的D-無水葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯備液。精密量取葡萄糖對照品溶液0.2ml，0.4ml，0.6ml，0.8ml，1.0ml，于25 mL比色管中，加水定容至10ml。精密加入蒽酮-硫酸溶液（精密取蒽酮0.21g，加濃硫酸溶液100ml使溶解，搖勻）5ml，搖勻，置水浴中加熱15分鐘，取出，放入冰浴中冷卻至室溫，測定得到回歸方程。

結(jié)果

最大吸收波長。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)蒽酮-硫酸顯色后用TU- 1901型紫外可見分光光度計(jì)在500～750nm范圍掃描。掃描結(jié)果表明：葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液均在625nm處有最大吸收，確定該波長為測定波長。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。以D-無水葡萄糖溶液濃度為橫坐標(biāo)，吸收度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲，并得出回歸方程y=5.773x+0.008，R2=0.997，線性范圍為0.00752- 0.0376mg/ml，其中，y為吸收度，x為D-無水葡萄糖濃度。

精密度實(shí)驗(yàn)。精密吸取樣品試液1份，按2.1的方法制得供試品溶液，各1.0ml置25ml比色管中，按蒽酮-硫酸法制備，測試6次，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.61%，結(jié)果表明精密度良好。結(jié)果見表1。

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。精密吸取樣品溶液0.5mL，按蒽酮-硫酸法制備，每隔20min 測定一次吸收度，連續(xù)2h 考察其穩(wěn)定性，計(jì)算RSD值=0.32 %，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，供試品溶液在2h 內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見表2。

重復(fù)性實(shí)驗(yàn)。精密稱取同一批樣品6 份，按2.1的方法制得供試品溶液，精密吸取0.5ml，置10ml比色管中，按蒽酮-硫酸法制備，分別測定其吸收度，計(jì)算RSD 值（ n = 6） 為0. 97%，表明該方法重復(fù)性好。結(jié)果見表3。

加樣回收實(shí)驗(yàn)。取同一份樣品6份，每份精密量取1.0ml，分別加入3ml濃度為0.0376mg/ml的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，按照蒽酮-硫酸法處理后測定吸收值，計(jì)算回收率平均值為97.4%，本方法準(zhǔn)確度良好。結(jié)果見表4。

總糖測定。精確稱取6批刺梨原汁酒樣品，各0.5ml，按照2.1的方法制備總糖，精密吸取樣品溶液1.0ml置25ml比色管中，按蒽酮-硫酸法制備，分別測定其吸收度，根據(jù)回歸方程，計(jì)算樣品總糖含量，結(jié)果如下表：

討論

蒽酮-硫酸法測定總糖含量， 是利用總糖在濃硫酸作用下水解生成單糖， 并迅速脫水生成羥甲基糠醛， 羥甲基糠醛與蒽酮綜合成藍(lán)色化合物， 比色該化合物顏色的深淺來計(jì)算總糖濃度的高低。該方法具有穩(wěn)定、快速、簡便、重復(fù)性好等特點(diǎn)，可作為刺梨原汁酒總糖的測定方法。

基金項(xiàng)目：貴州省黔西南州科技項(xiàng)目，課題任務(wù)書編號：2016- 1- 22。