王大慧，巨曉敏，衛(wèi)功元*

（蘇州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，江蘇 蘇州 215123）

普魯蘭是一種由麥芽三糖經(jīng)α-1,6-糖苷鍵聚合而成的微生物多糖，通常由出芽短梗霉（Aureobasidium pullulans）合成并分泌到胞外[1]。作為一種化學(xué)結(jié)構(gòu)獨特的水溶性高分子物質(zhì)，普魯蘭具有良好的可塑性、成膜性和穩(wěn)定性，因而可以安全地應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、環(huán)保和輕工等諸多領(lǐng)域[2-4]。2002年，普魯蘭被美國食品藥品監(jiān)督管理局認證為GRAS（Generally Regarded As Safe）的微生物多糖[5]。2006年5月19日，國家衛(wèi)生部發(fā)布第8號公告，將普魯蘭列為新增的4種食品添加劑之一。此后，普魯蘭在市場上的需求量日益增長。

目前，普魯蘭的生物合成主要采用發(fā)酵法[1,6]。為提高普魯蘭的產(chǎn)量以及合成效率，科研人員分別從培養(yǎng)基設(shè)計、發(fā)酵條件控制、關(guān)鍵酶活性提升以及跨膜運輸?shù)冉嵌葘ζ蒸斕m的合成過程進行研究，確定了一些關(guān)鍵的影響因素[7-9]。其中，表面活性劑的添加對于促進普魯蘭的合成具有明顯的積極作用[10]。常天俊等[11]考察了吐溫40、吐溫60和吐溫80在普魯蘭發(fā)酵生產(chǎn)中的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3 種表面活性劑均能促進細胞分泌多糖，添加0.05%吐溫80時效果最好，不僅能提高約25%普魯蘭產(chǎn)量，而且還可以將發(fā)酵時間縮短近2 d。Sheng Long等[12-13]發(fā)現(xiàn)在發(fā)酵培養(yǎng)基中加入0.5%（體積分數(shù)）吐溫80可以顯著提高普魯蘭的產(chǎn)量，認為吐溫80加速了細胞對營養(yǎng)物質(zhì)的攝取，增加了葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶活性，提高了細胞膜脂肪酸的含量，加速了普魯蘭向胞外分泌。Tu Guangwei等[14]在培養(yǎng)基中添加0.05%（體積分數(shù)）吐溫80，將聚蘋果酸和普魯蘭的產(chǎn)量分別提高了75.08%和27.21%，認為吐溫80提高了氧氣攝取速率和CO2釋放速率，上調(diào)了相關(guān)跨膜轉(zhuǎn)運因子的轉(zhuǎn)錄水平，最終提高了聯(lián)產(chǎn)發(fā)酵的產(chǎn)量。除此之外，鮮見其他表面活性劑影響普魯蘭生物合成的報道。

近年來，研究發(fā)現(xiàn)普魯蘭還可以利用全細胞生物轉(zhuǎn)化的方法合成得到[15]。在生物轉(zhuǎn)化過程中，普魯蘭合成代謝途徑中的3 個關(guān)鍵酶α-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶（α-phosphoglucose mutase，PGM）、尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucose pyrophosphorylase，UGP）和葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶（glucosyltransferase，F(xiàn)KS），能量物質(zhì)ATP的供給與消耗速率，以及細胞膜的通透性都是決定普魯蘭能否高效合成的影響因素[16]。與調(diào)控細胞內(nèi)物質(zhì)和能量代謝過程的復(fù)雜性不同，增加微生物細胞膜通透性可以通過添加表面活性劑得以實現(xiàn)[17]。然而，表面活性劑對生物轉(zhuǎn)化合成普魯蘭是否具有促進作用以及其中蘊含的生理生化機制至今不得而知。為此，本研究分析食品工業(yè)的非離子型表面活性劑斯潘和吐溫對生物轉(zhuǎn)化合成普魯蘭的影響，并從細胞特性、關(guān)鍵酶活性、胞內(nèi)物質(zhì)和能量代謝等角度解析表面活性劑的作用機制，研究結(jié)果將為進一步提高普魯蘭生物合成效率提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

出芽短梗霉CCTCC M 2012259，由蘇州大學(xué)微生物生理與代謝調(diào)控研究室保藏。

種子培養(yǎng)基：采用PDA培養(yǎng)基。馬鈴薯200 g/L，葡萄糖20 g/L，自然pH值。

發(fā)酵培養(yǎng)基[15]：葡萄糖63.97 g/L，酵母粉3.57 g/L，(NH4)2SO40.6 g/L，NaCl 1.0 g/L，K2HPO45.0 g/L，MgSO4·7H2O 0.18 g/L，pH 6.5。

轉(zhuǎn)化液：葡萄糖50 g/L，MgSO4·7H2O 0.2 g/L，pH 6.8。

磷酸葡萄糖變位酶聯(lián)免疫分析測試盒 上海皓塵生物科技有限公司；尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶聯(lián)免疫分析測試盒 上海將來實業(yè)股份有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

1525型高效液相色譜儀 美國Waters公司；BIOTECH-5BGZ攪拌式發(fā)酵罐 上海保興生物設(shè)備工程有限公司；HZ-2010K恒溫搖瓶柜 太倉市華利達實驗儀器設(shè)備有限公司；J6-MI型冷凍離心機 美國Beckeman公司；T6新世紀紫外-可見分光光度計 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；LDZX-50KBS型立式壓力蒸汽滅菌器 上海申安醫(yī)療器械廠。

1.3 方法

1.3.1 靜息細胞制備

將在-70 ℃超低溫冰箱中保藏的菌種（1 mL）接入裝有50 mL種子培養(yǎng)基的500 mL三角瓶中，于30 ℃、200 r/min搖床中培養(yǎng)24 h獲得種子。按10%（體積分數(shù)）的接種量將種子接入裝有3 L發(fā)酵培養(yǎng)基的5 L發(fā)酵罐中，在30 ℃、400 r/min和通氣量3 L/min條件下培養(yǎng)36 h。將發(fā)酵液12 000 r/min離心10 min，用無菌生理鹽水洗滌2 次后制得靜息細胞。

1.3.2 生物轉(zhuǎn)化

將靜息細胞均勻懸浮于裝有50 mL轉(zhuǎn)化液的500 mL三角瓶中，置于30 ℃、200 r/min搖床中轉(zhuǎn)化24 h或48 h，初始菌體控制在10 g/L左右（按干細胞質(zhì)量計）。將無任何表面活性劑添加的生物轉(zhuǎn)化過程定義為空白對照。

1.3.3 細胞干質(zhì)量與普魯蘭產(chǎn)量測定

取20 mL轉(zhuǎn)化液（或發(fā)酵液），80 ℃水浴滅活15 min，冷卻至室溫后12 000 r/min離心10 min。細胞沉淀用蒸餾水洗滌3 次，離心后于70 ℃烘干至質(zhì)量恒定，計算得到細胞干質(zhì)量；取10 mL上清液，加入2 倍體積無水乙醇混勻，4 ℃處理12 h，12 000 r/min離心10 min，將沉淀于70 ℃烘干至質(zhì)量恒定，計算得到普魯蘭產(chǎn)量。

1.3.4 普魯蘭合成能力的計算

細胞轉(zhuǎn)化合成普魯蘭能力的計算方法參見文獻[15]。生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)24 h，取樣檢測普魯蘭質(zhì)量濃度。將1 g靜息細胞（干質(zhì)量）在1 h內(nèi)轉(zhuǎn)化葡萄糖合成的普魯蘭質(zhì)量定義為1 個普魯蘭合成能力，單位為mg/（g·h）。

1.3.5 細胞存活率的測定

分別取培養(yǎng)24 h和48 h的轉(zhuǎn)化液，用無菌水稀釋至10-5倍，取100 μL在含有PDA培養(yǎng)基的平板上進行涂布，30 ℃恒溫培養(yǎng)48 h，計數(shù)并計算細胞存活率。

1.3.6 無細胞提取物的制備

取5 mL轉(zhuǎn)化液，4 ℃、12 000 r/min離心10 min，生理鹽水洗滌2 次后，將濕細胞重新懸浮在5 mL 0.2 mol/L磷酸緩沖溶液（pH 7.0）中，超聲破碎10 min（破碎10 s，間隔10 s），4 ℃、12 000 r/min離心20 min，得到的上清液即為無細胞提取物，用于測定胞內(nèi)物質(zhì)含量和關(guān)鍵酶活性。

1.3.7 酶活性測定

FKS活性測定方法參見文獻[18]。將0.2 mL含有10 mmol 4-硝基-α-D-吡啶葡萄糖苷的乙酸鈉緩沖液（0.1 mol/L，pH 4.0）與0.2 mL待測酶液快速混合均勻，在40 ℃水浴中反應(yīng)5 min，隨后加入3 mL甘氨酸-NaOH緩沖液（0.4 mol/L，pH 10.5）終止反應(yīng)。測定405 nm波長處的吸光度，由標(biāo)準曲線計算產(chǎn)生的4-硝基酚含量。一個FKS活性單位定義為每分鐘釋放1 μmol 4-硝基酚所需要的酶量。

PGM活性：采用磷酸葡萄糖變位酶聯(lián)免疫分析測試盒進行測定；UGP活性：采用尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶聯(lián)免疫分析測試盒進行測定，操作步驟參照試劑盒說明書執(zhí)行。

1.3.8 細胞膜通透性測定

采用流式細胞儀進行檢測[19-20]。將離心收集的細胞重懸于0.1 mol/L磷酸緩沖溶液（pH 7.0）中，細胞密度控制在約106個/mL。將100 μL細胞懸浮物與1 μL 2.5 mg/L碘化丙啶（propidium iodide，PI）混合，37 ℃避光孵育50 min，加入900 μL磷酸緩沖溶液混勻。利用流式細胞儀檢測含有熒光探針的細胞數(shù)，激發(fā)光波長488 nm，發(fā)射光波長625 nm。細胞流速為500 個/s，計數(shù)10 000 個細胞，計算PI攝取率。

1.3.9 胞內(nèi)尿苷二磷酸葡萄糖測定

胞內(nèi)尿苷二磷酸葡萄糖（uridine diphosphate g l u c o s e，U D P G）利用高效液相色譜法進行檢測[21]。Sigma-Aldrich Supelcosil LC-18-DB柱（4.6 mm×250 mm），流動相為40 mmol/L三乙胺-乙酸溶液（pH 6.0），流速1 mL/min，檢測波長254 nm，柱溫22 ℃，進樣量10 μL。

1.3.10 胞內(nèi)ATP和ADP測定

利用高效液相色譜法進行檢測[21]。Waters 1525反相SunFire C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為0.01 mol/L磷酸緩沖溶液（pH 6.5），流速1 mL/min，檢測波長254 nm，柱溫35 ℃，進樣量10 μL。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

所有實驗數(shù)據(jù)均為3 組平行樣品檢測結(jié)果的平均值。Excel 2010軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 斯潘對生物轉(zhuǎn)化合成普魯蘭的影響

向轉(zhuǎn)化液中分別添加不同質(zhì)量濃度的斯潘20、斯潘40、斯潘60和斯潘80，研究斯潘在生物轉(zhuǎn)化合成普魯蘭中的作用。由圖1可以看出，在考察的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)（0～20 g/L），斯潘20對細胞的普魯蘭合成能力幾乎沒有影響。斯潘40和斯潘60的添加降低了細胞合成普魯蘭的能力，且添加質(zhì)量濃度越高，普魯蘭合成能力降低的幅度越大。斯潘80可以提高普魯蘭的合成能力，當(dāng)添加質(zhì)量濃度為20 g/L時，普魯蘭的合成能力提高了46.5%。因此，在底物充足供給的前提下，斯潘80可以顯著提高普魯蘭的生物合成效率。

圖1 斯潘對生物轉(zhuǎn)化合成普魯蘭的影響Fig. 1 Effect of Span on pullulan production

2.2 吐溫對生物轉(zhuǎn)化合成普魯蘭的影響

圖2 吐溫對生物轉(zhuǎn)化合成魯蘭的影響Fig. 2 Effect of Tween on pullulan production

向轉(zhuǎn)化液中添加不同質(zhì)量濃度的吐溫20、吐溫40、吐溫60和吐溫80，研究吐溫在生物轉(zhuǎn)化合成普魯蘭中的作用，結(jié)果見圖2。與對照相比，吐溫20和吐溫40的添加降低了細胞的普魯蘭合成能力；吐溫60對生物轉(zhuǎn)化的影響不顯著；而吐溫80則顯著提高了細胞的普魯蘭合成能力。當(dāng)吐溫80質(zhì)量濃度為5 g/L時，細胞合成普魯蘭的能力比對照提高了32.9%。同樣地，當(dāng)?shù)孜锕┙o充足時，吐溫80也可以明顯提高普魯蘭生物合成的效率。

2.3 斯潘80和吐溫80復(fù)配在生物轉(zhuǎn)化合成普魯蘭中的作用

斯潘80和吐溫80的分子結(jié)構(gòu)中都含有失水山梨醇單油酸酯，彼此的碳氫分子鏈之間能夠很好地相互吸引，二者復(fù)合使用時還可以增加體系的穩(wěn)定性[22]。為此，將20 g/L斯潘80和5 g/L吐溫80進行復(fù)配，考察其在生物轉(zhuǎn)化合成普魯蘭中的作用。為便于比較，將斯潘80和吐溫80單獨添加后的普魯蘭產(chǎn)量（24 h和48 h）一并列出，結(jié)果見圖3。與空白對照相比，無論是單獨添加還是復(fù)配使用，斯潘80和吐溫80均提高了普魯蘭產(chǎn)量。斯潘80和吐溫80復(fù)配使用的效果最好，但是并未顯示出累加效應(yīng)。

圖3 斯潘80和吐溫80復(fù)配對生物轉(zhuǎn)化合成普魯蘭的影響Fig. 3 Separate and combined effect of Span 80 and Tween 80 on pullulan production

2.4 表面活性劑提高生物轉(zhuǎn)化合成普魯蘭效率的作用機制

2.4.1 細胞存活率

部分表面活性劑與微生物長期接觸會影響細胞生長，甚至?xí)芙饧毎さ牟糠殖煞侄鴮崿F(xiàn)殺菌作用[23]。為考察20 g/L斯潘80、5 g/L吐溫80及其復(fù)配對細胞存活率的影響，采用涂布平板的方法，對參與轉(zhuǎn)化反應(yīng)24 h和48 h后的細胞進行培養(yǎng)并計數(shù)統(tǒng)計，結(jié)果見表1。與生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)起始時的細胞總數(shù)（2.15×108個/mL）相比，單獨添加斯潘80時的活細胞數(shù)略有減少；單獨添加吐溫80以及復(fù)配對活細胞數(shù)影響不大?？傮w上，斯潘80和吐溫80對細胞存活率沒有顯著影響。

表1 表面活性劑對細胞存活率的影響Table 1 Effect of surfactants on survival rate of cells

2.4.2 細胞膜通透性

在普魯蘭的生物合成過程中，麥芽三糖單體首先在胞內(nèi)合成，然后跨過細胞膜分泌到胞外并聚合成普魯蘭[1,24]，所以，細胞膜通透性的大小將影響到普魯蘭合成速率的高低。采用流式細胞儀對細胞通透性進行測定，以PI攝取率定量表示細胞通透性的大小，結(jié)果見圖4。與對照相比，吐溫80對PI攝取率的影響很小，而斯潘80則大幅度地提高了PI攝取率（4～5 倍）；復(fù)配條件下的PI攝取率與單獨添加斯潘80的結(jié)果相近。由此可見，斯潘80極大地提高了細胞膜的通透性，但斯潘80和吐溫80的作用沒有累加性。

圖4 表面活性劑對細胞PI攝取率的影響Fig. 4 Effect of surfactants on PI uptake of cells

2.4.3 普魯蘭合成關(guān)鍵酶活性分析

研究表明，吐溫80在普魯蘭分批發(fā)酵過程中會提高FKS活性水平[12]。本研究考察斯潘80和吐溫80對普魯蘭生物合成途徑中3 種關(guān)鍵酶（PGM、UGP和FKS）活性的影響，結(jié)果見圖5?？梢园l(fā)現(xiàn)，在轉(zhuǎn)化反應(yīng)第24小時，除吐溫80對FKS活性沒有顯著影響外，其他添加條件下的PGM、UGP和FKS活性均明顯高于對照。在第48小時，斯潘80單獨添加仍然能提高PGM、UGP和FKS的活性，吐溫80對3 種關(guān)鍵酶活性均無影響，復(fù)配物僅可以提高FKS活性。此外，由圖5還可以看出，在轉(zhuǎn)化反應(yīng)的前期（24 h），PGM和UGP具有更高的活性；而在轉(zhuǎn)化后期（48 h），F(xiàn)KS活性更高。以上酶活結(jié)果表明，在生物轉(zhuǎn)化合成普魯蘭的過程中，斯潘80對關(guān)鍵酶活性的提高均具有積極作用，而吐溫80僅在轉(zhuǎn)化前期提高了PGM和UGP的活性。

圖5 表面活性劑對普魯蘭合成關(guān)鍵酶活性的影響Fig. 5 Effect of surfactants on activities of key enzymes involved in pullulan biosynthesis

2.4.4 胞內(nèi)UDPG水平

作為普魯蘭生物合成的最重要的前體物質(zhì)之一，胞內(nèi)UDPG水平是事關(guān)普魯蘭能否高效合成的關(guān)鍵因素[1,21]。在生物轉(zhuǎn)化的24 h和48 h，不同表面活性劑添加方式下的胞內(nèi)UDPG含量見圖6?？梢园l(fā)現(xiàn)，在底物充足的情況下，普魯蘭快速合成時（第24小時）的胞內(nèi)UDPG水平比第48小時的高。與對照相比，斯潘80和吐溫80分別將第24小時胞內(nèi)UDPG含量提高了40.7%和102.4%。至第48小時，由于底物葡萄糖基本耗盡（數(shù)據(jù)未給出），胞內(nèi)UDPG含量均下降至較低的水平（約1.2 mg/g）。

圖6 表面活性劑對胞內(nèi)UDPG水平的影響Fig. 6 Effect of surfactants on intracellular UDPG level

2.4.5 胞內(nèi)能量代謝物質(zhì)水平及比率

普魯蘭的生物合成離不開能量物質(zhì)的充足供給[16]。測定不同表面活性劑添加條件下的胞內(nèi)能量物質(zhì)ATP和ADP含量，計算ATP/ADP比率，結(jié)果見圖7。在第24小時，斯潘80和吐溫80均可以提高胞內(nèi)ATP含量和ATP/ADP比率，體現(xiàn)出比對照具有更強的ATP再生能力，最終胞內(nèi)有充足的ATP供給用于普魯蘭的快速合成。特別地，吐溫80在提高胞內(nèi)ATP含量和再生方面發(fā)揮著更為重要的作用。至第48小時，斯潘80和吐溫80雖然仍能將胞內(nèi)ATP維持在較高的水平，但ATP的再生能力均低于對照。

圖7 表面活性劑對胞內(nèi)ATP水平和ATP/ADP比率的影響Fig. 7 Effect of surfactants on intracellular ATP level and ATP/ADP ratio

3 討 論

表面活性劑素有“工業(yè)味精”的美稱，是一類用途廣泛的精細化工產(chǎn)品，在食品、藥品以及化妝品制造等領(lǐng)域中均有廣泛應(yīng)用[25]。在微生物發(fā)酵領(lǐng)域，表面活性劑可以通過增大細胞膜的通透性、改變酶活性調(diào)控細胞的生長和產(chǎn)物合成[26-29]。作為非離子型表面活性劑，斯潘和吐溫常以乳化劑的形式應(yīng)用于食品加工中[30]。已有文獻報道表明，吐溫80在普魯蘭發(fā)酵生產(chǎn)中對于提高目標(biāo)產(chǎn)物的產(chǎn)量起到了積極作用[11-13]。本研究發(fā)現(xiàn)，20 g/L斯潘80和5 g/L吐溫80在全細胞生物轉(zhuǎn)化合成普魯蘭過程中提高了細胞合成普魯蘭的能力，同時，普魯蘭的合成效率均高于前人研究的結(jié)果[11-13]。為探究斯潘80和吐溫80提高普魯蘭合成效率的生理機制，分別從細胞特性、關(guān)鍵酶活性、物質(zhì)與能量代謝等多個角度進行了探索。

在全細胞轉(zhuǎn)化過程中，將細胞始終保持在較高活性是實現(xiàn)高效轉(zhuǎn)化的基本保障，而部分表面活性劑（如Triton X-100）卻對細胞活性表現(xiàn)出一定的抑制作用[31]。本研究細胞存活率的結(jié)果表明，斯潘80和吐溫80對細胞活性幾乎沒有影響，可以確保不同轉(zhuǎn)化條件下的出芽短梗霉細胞均能維持正常的生理代謝。在此基礎(chǔ)上，斯潘80和吐溫80的添加提高了細胞膜的通透性，不僅有利于底物進入胞內(nèi)與酶作用，還加速了胞內(nèi)合成的普魯蘭跨膜向胞外分泌，進而提高了普魯蘭的合成效率。

根據(jù)出芽短梗霉合成普魯蘭的代謝途徑，底物葡萄糖首先在PGM和UGP的催化下合成前體物質(zhì)UDPG，然后UDPG在FKS的作用下合成麥芽三糖單體物質(zhì)，最終麥芽三糖在FKS的作用下跨膜聚合形成普魯蘭[1,18,32]。因此，提高PGM和UGP的活性有利于增加胞內(nèi)UDPG的供給，而提高FKS的活性將加速UDPG的消耗，最終促進普魯蘭的合成。本研究普魯蘭合成關(guān)鍵酶活性和胞內(nèi)UDPG水平的結(jié)果表明，斯潘80和吐溫80在普魯蘭合成期（24 h）均提高了PGM和UGP的活性，提升了胞內(nèi)UDPG水平。特別地，斯潘80提高了FKS活性，加速了UDPG向普魯蘭的轉(zhuǎn)化。由于吐溫80更有利于胞內(nèi)UDPG的供給，而斯潘80更有利于UDPG的消耗，因此在相同轉(zhuǎn)化時間下，添加斯潘80獲得的普魯蘭產(chǎn)量比添加吐溫80的結(jié)果要高，體現(xiàn)出更高的普魯蘭合成效率。

與此同時，能量物質(zhì)ATP的供給與消耗速率也是影響普魯蘭生物合成效率的重要因素。胞內(nèi)ATP含量體現(xiàn)ATP合成和利用的綜合結(jié)果，而ATP/ADP比率則反映ATP的再生能力[33]。本研究結(jié)果表明，吐溫80在提高胞內(nèi)ATP含量和促進ATP再生方面比斯潘80有更好的效果，能將胞內(nèi)ATP維持在較高的水平，從而為普魯蘭的快速合成提供充足的能量供給。

斯潘80和吐溫80有類似的分子結(jié)構(gòu)，使得它們可以復(fù)配使用而增加效果[34]。本研究在單獨添加的基礎(chǔ)上，也考察了斯潘80和吐溫80復(fù)配在生物轉(zhuǎn)化合成普魯蘭中的作用，復(fù)配條件下的普魯蘭產(chǎn)量和合成效率只比單獨添加略高，沒有體現(xiàn)出累加效應(yīng)。該結(jié)果可能與斯潘80和吐溫80復(fù)配比例不當(dāng)有關(guān)，有待今后進一步研究。

綜上，本研究考察了多種表面活性劑在全細胞生物轉(zhuǎn)化合成普魯蘭中的作用，發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)化液中添加20 g/L斯潘80或/和5 g/L吐溫80均有利于普魯蘭合成效率的提高。在此基礎(chǔ)上，檢測了細胞存活率、細胞膜通透性、普魯蘭合成關(guān)鍵酶活性、胞內(nèi)UDPG含量以及能量代謝物質(zhì)水平和比率，部分解析了斯潘80和吐溫80提高普魯蘭合成效率的生理機制。研究結(jié)果為實現(xiàn)普魯蘭高產(chǎn)提供了一種可行的方法，同時也為其他類似結(jié)構(gòu)微生物多糖的高效合成提供新的思路。