曲木 張寶龍 趙子續(xù) 侯樹旺 翟勝利

摘? 要：該試驗旨在探究飼料中不同綠原酸、竹青素水平對紅白錦鯉免疫能力、抗氧化能力與脂質(zhì)代謝的影響。以紅白錦鯉為研究對象，以綠原酸、竹青素為飼料添加劑，配置9種試驗飼料，選用規(guī)格一致、健康活潑的紅白錦鯉600尾，隨機分為10個試驗組（其中9組為試驗組，1組為對照組），每組3個重復(fù)，每個重復(fù)20尾魚，于30個規(guī)格為0.85m×0.65m×0.45m的循環(huán)水養(yǎng)殖箱中養(yǎng)殖。飼喂8周后，取血液和組織等樣本，通過對組織及血清中T-AOC、CAT、MDA、T-SOD、GOT、GPT指標(biāo)的測定發(fā)現(xiàn)，Diet 2（竹青素/綠原酸水平為0.04%/0.06%）飼料組紅白錦鯉免疫力有所提升。

關(guān)鍵詞：綠原酸? 竹青素? 紅白錦鯉? 免疫力

中圖分類號：S917.4 ? ?文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1672-3791（2019）10（a）-0199-06

錦鯉（Cyprinus carpio L）作為一種觀賞魚以體色艷麗為美，而錦鯉一旦患病，其體色會大大降低，有時甚至可以直接影響錦鯉售賣，因此，該試驗研究了綠原酸和竹青素這兩種天然免疫增強劑對紅白錦鯉免疫指標(biāo)的影響，以期為研發(fā)錦鯉增色提供理論參考。

1? 試驗材料與方法

1.1 試驗魚與養(yǎng)殖管理

該試驗以紅白錦鯉為養(yǎng)殖對象，試驗魚購自天津市金水族水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，選取規(guī)格一致、健康活潑的紅白錦鯉600尾，運往天津市晨輝飼料有限公司循環(huán)水養(yǎng)殖實驗室后消毒，暫養(yǎng)一周后隨機分為10組（其中9組為試驗組，1組為對照組），每組3個重復(fù)，每個重復(fù)20尾魚，于30個規(guī)格為0.85m×0.65m×0.45m的循環(huán)水養(yǎng)殖箱中養(yǎng)殖?；A(chǔ)飼料訓(xùn)化2周后，開始正式試驗，養(yǎng)殖周期為8周。養(yǎng)殖過程中，養(yǎng)殖水體氨氮含量為0.2mg/L、亞硝酸鹽含量為0.1mg/L、pH值為8.4，養(yǎng)殖水溫為25℃～29℃，每日底缸換水一次，換水量為1/3。飼料投喂時間為每日8：00與16：00，飼料投喂方法為飽食法，每日投喂后飼料稱重。

1.2 試驗飼料

該試驗以竹青素（有效含量40%）、綠原酸（有效含量50%）為影響因素，采用雙因素試驗設(shè)計中的“3×3因子設(shè)計”，設(shè)計9種飼料，每個因素各設(shè)3個水平，分別為竹青素（0.04%、0.06%、0.08%）、綠原酸（0.03%、0.06%、0.09%），依次記為Diet 1、Diet 2、Diet 3、Diet 4、Diet 5、Diet 6、Diet 7、Diet 8、Diet 9，以不含竹青素和綠原酸的基礎(chǔ)飼料做對照飼料，飼料成分見表1。

1.3 樣本采集及指標(biāo)測定

1.3.1 樣本采集

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，每個重復(fù)取9尾魚，共27尾。血樣采集方法為尾靜脈采血，解剖后取肝胰臟、中腎、脾、肌肉、腸組織，血液在4℃、4000r/min條件下離心15min，取上清液，制成血清樣本，存放于-20℃冰箱中冷凍保存，待測。

1.3.2 指標(biāo)測定

該試驗測定了紅白錦鯉血清和組織中總抗氧化能力（Total antioxidant capacity，T-AOC）、過氧化氫酶（Catalase，CAT）、丙二醛（Malonaldehyde，MDA）、總超氧化物歧化酶（Total superoxide dismutase，T-SOD）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（Glutamic-oxalacetic transaminase，GOT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Glutamic-pyruvic transaminase，GPT）6個指標(biāo)。血清在室溫條件下融化后直接進行測定，組織指標(biāo)測定按組織：0.85%生理鹽水=1∶4比例配制成20%勻漿液，根據(jù)試劑盒測定需要在此基礎(chǔ)上進行稀釋，指標(biāo)測定嚴(yán)格按照南京建成生物工程研究所所研制的試劑盒說明書進行。

2? 試驗結(jié)果

2.1 飼料不同竹青素、綠原酸水平對紅白錦鯉T-AOC的影響

試驗結(jié)果表明（見表2）：紅白錦鯉肝胰臟中T-AOC在Diet 2飼料組達到最高，與Diet 1和Diet 9飼料組差異不顯著（P>0.05），但顯著高于其他飼料組（P<0.05）;中腎中T-AOC在Diet 2飼料組達到最高，且顯著高于其他飼料組（P<0.05）;脾中T-AOC在Diet 9飼料組達到最高，與Diet 2、Diet 4、Diet 5飼料組差異不明顯（P>0.05）;血清中T-AOC在Diet 2飼料組達到最高，與Diet 1、Diet 8、Diet 9飼料組差異不顯著（P>0.05）;紅白錦鯉肌肉中T-AOC活性在Diet 1時達到最高，且顯著高于其他飼料組（P<0.05）。

竹青素各水平對紅白錦鯉組織和血清中T-AOC有顯著影響（P<0.05），但對脾中T-AOC影響不顯著（P>0.05），最優(yōu)水平分別為0.04%、0.04%、0.06%、0.04%、0.04%;綠原酸各水平對紅白錦鯉組織和血清中T-AOC有顯著影響（P<0.05），但對于脾中T-AOC影響不顯著（P>0.05），最優(yōu)水平分別為0.03%、0.06%、0.03%、0.06%、0.03%;二者的交互作用對紅白錦鯉組織和血清中T-AOC也有顯著影響（P<0.05）。

2.2 飼料不同竹青素、綠原酸水平對紅白錦鯉CAT活性的影響

試驗結(jié)果表明（見表3）：紅白錦鯉肝胰臟、中腎、脾、血清中CAT活性均在Diet 2飼料組達到最高，且顯著高于其他飼料組（P<0.05）;肌肉中CAT活性在Diet 2飼料組達到最高，與Diet 5、Diet 8飼料組差異不顯著（P>0.05），但顯著高于其他飼料組（P<0.05）。

竹青素各水平對紅白錦鯉組織和血清中CAT活性有顯著影響（P<0.05），但對肌肉中CAT活性影響不顯著（P>0.05），最優(yōu)水平分別為0.04%、0.04%、0.04%、0.04%、0.04%;綠原酸各水平對紅白錦鯉組織和血清中CAT活性均有顯著影響（P<0.05），最優(yōu)水平分別為0.06%、0.09%、0.06%、0.06%、0.06%;二者的交互作用對紅白錦鯉組織和血清中CAT活性也有顯著影響（P<0.05），但對于肌肉中CAT活性影響不顯著（P>0.05）。

2.3 飼料不同竹青素、綠原酸水平對紅白錦鯉MDA含量的影響

試驗結(jié)果表明（見表4）：紅白錦鯉肝胰臟中MDA的含量在Diet 4飼料組達到最低，且與其他飼料組差異不顯著（P<0.05）;中腎中MDA的含量在Diet 1飼料組達到最低，與Diet 2飼料組差異不顯著（P>0.05），但顯著低于其他飼料組（P<0.05）;脾中MDA的含量在Diet 2飼料組顯著降低，與Diet 9飼料組差異不顯著（P>0.05）;血清中MDA的含量在Diet 2飼料組達到最低，與Diet 7和Diet 9差異不顯著（P>0.05）;肌肉中MDA的含量在Diet 8飼料組達到最低，與對照組、Diet 2、Diet 4、Diet 8飼料組差異不顯著（P>0.05）。

竹青素各水平對紅白錦鯉組織和血清中MDA的含量有顯著影響（P<0.05），但對肌肉中MDA的含量影響不顯著（P>0.05），最優(yōu)水平分別為0.06%、0.04%、0.08%、0.08%、0.06%;綠原酸各水平對紅白錦鯉組織和血清中MDA的含量有顯著影響（P<0.05），但對脾中MDA的含量影響不顯著（P>0.05），最優(yōu)水平分別為0.06%、0.03%、0.03%、0.06%、0.06%;二者的交互作用對紅白錦鯉組織和血清中MDA的含量也有顯著影響（P<0.05）。

2.4 飼料不同竹青素、綠原酸水平對紅白錦鯉T-SOD活性的影響

試驗結(jié)果表明（見表5）：紅白錦鯉肝胰臟中SOD活性在Diet 9飼料組時達到最大，與Diet 2、Diet 7飼料組差異不顯著（P>0.05），但顯著高于其他飼料組（P<0.05）;中腎中SOD活性在Diet 1飼料組達到最大，與Diet 2、Diet 6飼料組差異不顯著（P>0.05）;脾中SOD活性在Diet 2飼料組達到最大，與Diet 5飼料組差異不顯著（P>0.05）;血清中SOD活性在Diet 6時達到最大，且顯著高于其他飼料組（P<0.05）;肌肉中SOD活性在Diet 7飼料組達到最大，且顯著高于其他飼料組（P<0.05）。

竹青素各水平對紅白錦鯉組織和血清中SOD活性均有顯著影響（P<0.05），最優(yōu)水平分別為0.08%、0.04%、0.04%、0.06%、0.08%;綠原酸各水平對紅白錦鯉組織和血清中SOD活性均有顯著影響（P<0.05），最優(yōu)水平分別為0.06%、0.09%、0.06%、0.06%、0.03%;二者的交互作用對紅白錦鯉組織和血清中SOD活性也有顯著影響（P<0.05）。

2.5 飼料不同竹青素、綠原酸水平對紅白錦鯉GOT、GPT活性的影響

試驗結(jié)果表明（見表6）：紅白錦鯉肝胰臟中GOT活性在Diet 2飼料組達到最高，與Diet 1飼料組差異不顯著（P>0.05），但顯著高于其他飼料組（P<0.05）;血清中GOT活性在Diet 2飼料組達到最低，與Diet 9飼料組差異不顯著（P>0.05），但顯著高于其他飼料組（P<0.05）。肝胰臟中GPT活性在Diet 4飼料組達到最低，且顯著低于Diet 7、Diet 8飼料組（P<0.05）;血清中GPT活性在Diet 6飼料組最低，且顯著低于Diet 3、Diet 7飼料組（P<0.05）。

竹青素各水平對紅白錦鯉肝胰臟中GOT、GPT及血清中GOT活性均有顯著影響（P<0.05），但對血清中GPT活性影響不顯著（P>0.05），最優(yōu)水平均為0.04%;綠原酸各水平對紅白錦鯉肝胰臟中GOT、GPT活性有顯著影響（P<0.05），但對血清中GOT、GPT活性影響不顯著（P>0.05），最優(yōu)水平均為0.06%;二者的交互作用對紅白錦鯉組織和血清中GOT、GPT活性也有顯著影響（P<0.05）。

3? 討論

綠原酸主要來源于植物，是一種具有抗氧化、抗菌抗病毒和免疫調(diào)節(jié)等作用的新型環(huán)保添加劑[1]，竹青素是以剛竹屬竹子為原料萃取而來的有效成分，是一種卓越的生物抗氧化劑、脂代謝調(diào)節(jié)劑和免疫功能增強劑[2]。

吳衛(wèi)星用綠原酸、多糖、黃酮等制成復(fù)方中草藥飼喂鯉魚，測定SOD、CAT、GPT活力，發(fā)現(xiàn)0.2%的復(fù)方中草藥添加組鯉魚生長、免疫力得到顯著提升[3];張純等研究發(fā)現(xiàn)低劑量綠原酸隨著飼喂時間的延長對SOD提高作用逐漸增強，添加適量的綠原酸可顯著提高建鯉血漿CAT活力，建鯉血漿中T-AOC顯著升高，MDA含量顯著降低，提高建鯉抗氧化能力的綠原酸最適添加量為200～400mg/kg[4];楊天俊等研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)飼料中綠原酸含量為400mg/kg時可顯著地提高了草魚幼魚血清CAT和肝胰臟中SOD活力，降低血清及肝胰臟中MDA的含量[5];李乃順等人在對草魚的研究中報道了0.04%綠原酸可顯著提高草魚魚種肝胰臟SOD活性[6];韓兆紅在團頭魴的飼料中添加了福樂星（主要成分綠原酸、生物堿和黃酮的），其研究成果表明中草藥提取物能夠顯著增強團頭魴SOD活力[7]。張英等研究發(fā)現(xiàn)，竹提取物對SOD的活性具有顯著的誘導(dǎo)作用[8]。黃駱鐮等研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加不同水平竹青素可以降低肉雞血清中MDA的含量，同時發(fā)現(xiàn)1.5g/kg和3g/kg添加量極顯著地提高了肉雞血清中SOD活性[9]。該試驗結(jié)果與上述試驗結(jié)果相似，由此可，見飼料中添加適量綠原酸可有效改善紅白錦鯉組織抗氧化能力。Aitani等報道了口服綠原酸可減少大鼠內(nèi)臟脂肪的蓄積，降低大鼠機體脂質(zhì)含量[10]。楊天俊等研究發(fā)現(xiàn)高脂飼料中添加不同濃度綠原酸均能提高草魚幼魚肝胰臟中GOT、GPT活性[5]，而該試驗結(jié)果與以上結(jié)果相似，表明綠原酸和竹青素對紅白錦鯉免疫力提升確有促進作用。

4? 結(jié)語

該試驗測定了能提現(xiàn)錦鯉體質(zhì)健康程度的5個生理生化指標(biāo)，通過試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在該試驗條件下，紅白錦鯉飼料中最適竹青素、綠原酸添加，搭配為0.04%/0.06%。

參考文獻

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[7] 韓兆紅.中草藥提取物對團頭魴生長及免疫力的影響[D].蘇州大學(xué)，2008.

[8] 張英.天然功能性添加劑——竹葉提取物[J].精細與專用化學(xué)品，2002（7）：20-22.

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