QuEChERS結(jié)合HPLC－MS/MS法同時測定菜心中38種農(nóng)藥殘留

目前，色譜領(lǐng)域關(guān)于農(nóng)藥檢測方法的研究已經(jīng)有很多，比如，黃曉敏等采用氣相色譜-火焰光度檢測器測定蔬菜中30種有機磷農(nóng)藥；劉玲玲等采用氣相色譜-質(zhì)譜法分析土壤中23種有機氯農(nóng)藥；馮永巍等采用超高效液相色譜-串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜法測定綠茶中9種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥；王敏等采用UPLC-MS/MS法和HPLC法測定蘋果中9種氨基甲酸酯類農(nóng)藥，并對比分析兩種方法的優(yōu)缺點。

菜心在我國江南地區(qū)是食用習(xí)慣極廣的大路蔬菜，研究其農(nóng)藥殘留量具有重要意義。本文在前人基礎(chǔ)上，建立了QuEChERS結(jié)合HPLC-MS/MS法同時測定菜心中38種農(nóng)藥殘留的方法，以乙腈做提取溶劑，以N-丙基乙二胺（PSA）、十八烷基鍵合硅膠（C18）及石墨化炭黑做混合凈化劑，采取HPLC-MS/MS法分析檢測。該方法快速簡捷、穩(wěn)定可靠，可滿足蔬菜中常見的38種農(nóng)藥殘留量定性定量檢測的需要。

一、實驗部分

1.材料與試劑。Agilent 1290-6460高效液相色譜儀-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（HPLC-MS/MS），配有ESI源，美國Agilent公司；DS-1型高速組織搗碎機，上海標(biāo)模儀器廠；XW-80A型渦旋混合器，上海精科實業(yè)有限公司；JW-1048型低速離心機、JW-2017H型高速離心機，安微嘉文儀器裝備有限公司；QuEChERS提取包（4.0g MgSO4+1.0g NaCl+1.0g C6H5Na3O7·2H2O+0.5g C6H6Na2O7·1.5H2O）、凈化管（2.0mL離心管中裝有50mg C18、50mg PSA、150mg無水MgSO4，天津博納艾杰爾科技有限公司；石墨化炭黑，上海佰曄生物科技中心；38種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，1000μg/mL， 農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所；乙腈、甲醇、甲酸、乙酸銨，色譜純，廣州化學(xué)試劑廠；新鮮菜心，購于廣州市某超市，用組織搗碎機粉碎，制成待測樣品，備用。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。分別移取適量體積的標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈配制成1.0μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，用空白菜心基質(zhì)提取液將上述標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋為系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（38種農(nóng)藥含量均為1.0ng/mL-100ng/mL）。

3.樣品的前處理。（1）提取：稱取10g已經(jīng)均質(zhì)的菜心試樣（精確至0.01g）于50mL具塞離心管中，準(zhǔn)確加入10mL乙腈，用渦旋混合器震蕩提取2min，加入QuEChERS提取包，劇烈振搖2min，4000r/min離心3min，收集上清液待凈化。（2）凈化：稱取石墨化炭黑100mg放入凈化管中，再準(zhǔn)確加入1.0mL上述提取液，渦旋震蕩1min，12000r/min離心3min，取上清液過0.22μm有機微孔濾膜，HPLC-MS/MS測定。

4 .分析條件。（1）色譜條件：Thermo Accucore aQ C18色譜柱，2.1×100mm，2.6μm，賽默飛世爾（中國）公司；進樣量2.0μL，柱溫30℃，流速0.28mL/min；流動相A：2mmol/L乙酸銨+0.1%甲酸溶液，流動相B：甲醇。梯度洗脫程序為：0-0.5min，流動相A 65%-82%；2.00min，流動相A 50%；16.00-17.80min，流動相A 5%；18.00min，流動相A 95%；運行時間21.0min。（2）質(zhì)譜條件：AJS ESI離子源，Gas Temp為300℃，Gas Flow為5L/min，Shealth Gas Temp為250℃，Shealth Gas Flow為10L/min，Nebulizer為30psi，capillary為（+）4000V、（-）3500V，掃描方式為多重反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。38種農(nóng)藥的特征離子參考標(biāo)準(zhǔn)GB/T 20769-2008和GB/T 20770-2008。

二、結(jié)果與分析

1.凈化條件的優(yōu)化。為降低樣品污染，減少儀器損耗，本文利用石墨化炭黑作為除色劑對提取液除色。經(jīng)試驗發(fā)現(xiàn)，加入石墨化炭黑后，菜心提取溶液澄清透明，雖然個別檢測項目回收率有所下降，但都保持在80%-130%，符合多數(shù)標(biāo)準(zhǔn)要求。

2.色譜條件的優(yōu)化。采用正離子掃描模式時，目標(biāo)分析物易形成[M+H]+或[M+NH4]+加合離子；采用負離子掃描模式時，則會形成[M-H]-加合離子。通常情況下，會在流動相中添加0.1%-0.5%甲酸或易揮發(fā)銨鹽，以增強目標(biāo)物質(zhì)的離子化效率。本實驗考察了乙酸銨溶液、甲酸溶液、甲醇及乙腈對目標(biāo)物質(zhì)的分離度、峰型及靈敏度的影響，結(jié)果表明：甲酸濃度從0.1%升到0.5%時，部分物質(zhì)出峰時間往前，分離度變?。灰宜徜@濃度從2mmol/L到5mmol/L，各參數(shù)變化不大；有機相由甲醇換成乙腈，目標(biāo)物質(zhì)靈敏度增高，但是分離度減小。綜合上述情況，本實驗選用2mmol/L乙酸銨+0.1%甲酸溶液-甲醇體系作為流動相。

3.基質(zhì)效應(yīng)的考察?；|(zhì)效應(yīng)分為基質(zhì)增強效應(yīng)和基質(zhì)減弱效應(yīng)兩種類型。本實驗分別用乙腈和菜心空白樣品提取溶液作稀釋液，配制兩種混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按公式計算：基質(zhì)效應(yīng)=（基質(zhì)曲線斜率/溶劑曲線斜率-1）×100。結(jié)果表明，甲胺磷基質(zhì)效應(yīng)為-54.9%，超過-50%，屬于強基質(zhì)效應(yīng)；氧樂果、涕滅威亞砜、除蟲脲、氟啶脲、溴氰菊酯及氟胺氰菊酯6種目標(biāo)物質(zhì)基質(zhì)效應(yīng)在（±）20%～（±）50%之間，為中等基質(zhì)效應(yīng)；其他31種目標(biāo)物質(zhì)基質(zhì)效應(yīng)均在-20%～20%之間，為弱基質(zhì)效應(yīng)。為降低基質(zhì)效應(yīng)對目標(biāo)分析物定量結(jié)果的影響，本實驗采用基質(zhì)配標(biāo)法。

4.方法學(xué)驗證。（1）線性關(guān)系及檢出限。配制濃度為1.0μg/L-100μg/L的38種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用UPLC-MS/MS法測定，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度為橫坐標(biāo)（X），得到各目標(biāo)物質(zhì)的回歸方程。38種目標(biāo)物質(zhì)的線性相關(guān)系數(shù)r均達到0.992以上。當(dāng)試樣溶液濃度為1.0ng/mL時，38種目標(biāo)物質(zhì)定性、定量離子質(zhì)譜峰信噪比皆大于3。按公式計算：檢出限=3S/N，當(dāng)取樣量為10g、定容體積為10mL時，該方法38種農(nóng)藥的檢出限均可達到1.0μg/kg，滿足大部分現(xiàn)行農(nóng)藥殘留的測定標(biāo)準(zhǔn)。（2）回收率及精密度。在菜心陰性樣品中分別添加濃度、為5μg/kg、10μg/kg、50μg/kg的38種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，在重復(fù)性條件下，每個濃度梯度做6個平行。用UPLC-MS/MS法測定，并計算出方法的精密度及平均回收率。38種農(nóng)藥的平均回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為：5μg/kg，81.1%-128.2%，6.4%-9.8%；10μg/kg，86.7%-112.3%，1.3%-7.0%；50μg/kg，90.2%-105.0%，0.7%-5.9%。

5.實際樣品的檢測。應(yīng)用上述方法測定廣州某超市的10個菜心樣品，有1個樣品在1.0μg/kg附近有啶蟲脒檢出，其他9個樣品均未檢出上述38種農(nóng)藥。

綜上所述，本文采用QuEChERS結(jié)合HPLC-MS/MS法同時測定菜心中有機磷、有機氯、有機氮、菊酯類、氨基甲酸酯類等多種類別共38種農(nóng)藥，前處理過程簡單快速，測定結(jié)果準(zhǔn)確，回收率高，能夠滿足菜心中常見農(nóng)藥殘留量的檢測或大批量快速篩查的需求。

作者簡介：韋譽（1986-），女，廣西東蘭，碩士，主要研究方向：有機物污染物的檢測分析。