張君勝，解慧梅，倪黎剛，朱淑彬，趙旭庭

(江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院，江蘇 泰州 225300)

【研究意義】保育仔豬受到斷奶綜合應(yīng)激的影響容易發(fā)生多種疾病，生產(chǎn)中經(jīng)常采用添加抗生素來控制保育仔豬疾病的發(fā)生，抗生素的使用會(huì)導(dǎo)致仔豬微生態(tài)區(qū)系被破壞，耐藥菌產(chǎn)生等一系列問題[1]。益生菌添加劑可以調(diào)節(jié)微生物菌群結(jié)構(gòu)以及增強(qiáng)免疫耐受,改善動(dòng)物健康及降低發(fā)生食源性污染的風(fēng)險(xiǎn)所以研制益生菌制劑來防治仔豬大腸桿菌性腹灣具有廣泛的發(fā)展前景[2]?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】芽孢桿菌，進(jìn)入腸道內(nèi)能迅速消耗游離氧，使腸腔內(nèi)低氧，促進(jìn)厭氧性有益菌生長，且能產(chǎn)生乳酸、芽孢桿菌菌素和短桿菌肽等活性物質(zhì)，有效抑制致病菌增殖；芽孢桿菌還可合成淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶以及B族維生素等，促進(jìn)宿主動(dòng)物對(duì)飼料養(yǎng)分的消化[3]。【本研究切入點(diǎn)】蘇姜豬是以姜曲海豬、杜洛克豬為親本培育而成的優(yōu)質(zhì)瘦肉型新品種豬，于2013年8月通過國家畜牧種質(zhì)資源委員會(huì)審定，獲得了畜禽新品種證書[4]。隨著蘇姜豬產(chǎn)業(yè)化開發(fā)進(jìn)程的加快，迫切需要開展蘇姜豬健康養(yǎng)殖配套技術(shù)的研究。泰州綠圣元生物科技有限公司生產(chǎn)的凝結(jié)芽孢桿菌(Bacilluscoagulans)制劑菌體活性好，芽孢形成率高[5]，但該菌劑在仔豬養(yǎng)殖中的效果需要進(jìn)一步研究?！緮M解決的關(guān)鍵問題】本研究通過考察復(fù)合芽孢桿菌菌劑對(duì)保育仔豬的生長性能、腹瀉率、糞便中主要菌群以及主要血液免疫指標(biāo)影響，對(duì)芽孢桿菌制劑在蘇姜豬仔豬健康養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

復(fù)合芽孢桿菌菌劑是由泰州綠圣元有限公司的提供的統(tǒng)福菌復(fù)合飼用微生物制劑, 內(nèi)含凝結(jié)芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌等，總活芽孢數(shù)為1.0×1010cpf/g。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及分組處理

試驗(yàn)動(dòng)物：選擇同批斷奶(28日齡)的蘇姜豬斷奶仔豬90頭。隨機(jī)分成3組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10頭，分別為空白對(duì)照組(正常飼喂不添加芽孢桿菌制劑)、0.1 %菌劑添加組和0.5 %菌劑添加組。預(yù)實(shí)驗(yàn)7 d，正式試驗(yàn)35 d，全期均采用嘉吉公司仔豬料在同一間豬舍飼喂。試驗(yàn)期間由專人統(tǒng)一進(jìn)行同一模式的飼養(yǎng)管理，并記錄每天的發(fā)病情況，及時(shí)針對(duì)治療。

1.3 日增重測定

正試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)，以頭為單位對(duì)試驗(yàn)豬進(jìn)行全群稱重。在試驗(yàn)的第1和35天早晨空腹稱重，7:00-9:00依次分批稱重，稱重前先將豬哄起活動(dòng)15 min，待其排出糞尿后稱重，第一批稱重各處理組的第一重復(fù)組，第二批稱重各處理組的第二重復(fù)組，依此類推，直至稱完。平均日增重( ADG)=(結(jié)束體重-開始體重)/飼養(yǎng)天數(shù)。

1.4 飼料轉(zhuǎn)化率測定

飼料消耗的測定，采用“清箱底法”每7 d以重復(fù)組為單位結(jié)料1次。若有死亡和淘汰，及時(shí)稱重和結(jié)算飼料，以便試驗(yàn)結(jié)束時(shí)將死亡和淘汰豬只飼料消耗剔除。飼料轉(zhuǎn)化率即通常所說的料肉比( F /G)。它是指某一階段內(nèi)，育肥豬每增重1 kg所消耗的飼料數(shù)量。

飼料轉(zhuǎn)化率=測定期間飼料消耗總量/(結(jié)束體重-開始體重)

1.5 腹瀉率測定

每天記錄各組腹瀉豬頭數(shù)，統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)期間各組腹瀉率。腹瀉率( %)=試驗(yàn)期腹瀉總頭日數(shù)/試驗(yàn)期飼養(yǎng)總頭日數(shù)×100 %。

1.6 糞便樣品采集與主要菌群測定

采樣前要將鑷子和5 mL試管洗凈后用高壓滅菌箱進(jìn)行滅菌，同時(shí)準(zhǔn)備好封口袋、酒精棉球、磁盤等，并帶好冰袋對(duì)樣品進(jìn)行生物活性保存。在飼養(yǎng)試驗(yàn)的第34天對(duì)每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選擇2頭豬進(jìn)行新鮮糞樣采樣，采樣后將樣品放入4 ℃冰箱中保存，并在1 d內(nèi)完成試驗(yàn)。分別采用EC肉湯瓊脂培養(yǎng)基、TPY瓊脂培養(yǎng)基、MRS瓊脂培養(yǎng)基測定大腸桿菌群、雙歧桿菌群、乳酸菌群數(shù)。

1.7 血液樣品采集與主要生化參數(shù)測定

試驗(yàn)結(jié)束的當(dāng)天每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選擇2頭豬，前腔靜脈采血10 mL，使用邁瑞全自動(dòng)生化分析檢測儀BS-220檢測血清中主要生化參數(shù)。使用廣州濟(jì)恒生物科技有限公司SH-1000 lab 酶標(biāo)儀檢測血清中的免疫球蛋白G(IgG)的含量。

1.8 統(tǒng)計(jì)分析

使用spass軟件處理與分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，末重、平均日增重、糞便菌群、血清學(xué)指標(biāo)采用F檢驗(yàn)鄧肯式法分析，腹瀉率采用卡方檢驗(yàn)法分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合芽孢桿菌制劑對(duì)生長性能和腹瀉率的影響

由表1可知，初始重3個(gè)組之間差異不顯著(P>0.05)，末重和平均日增重復(fù)合芽孢桿菌制劑添加組均極顯著增加(P<0.01)，但是在0.1 %和0.5 %的添加量中，兩組間差異不顯著(P>0.05)，腹瀉率復(fù)合芽孢桿菌制劑添加組極顯著低于對(duì)照組，表明復(fù)合芽孢桿菌制劑的添加有降低腹瀉發(fā)生的趨勢。

表1 復(fù)合芽孢桿菌制劑對(duì)仔豬生長性能和腹瀉率的影響

由表2可見復(fù)合芽孢桿菌制劑添加組仔豬的日采食量分別為579和605 g，均高于對(duì)照組525 g；復(fù)合芽孢桿菌制體添加組料重比分別為1.41和1.42，均低于對(duì)照組1.63。這說明復(fù)合芽孢桿菌制劑的添加可以增加仔豬的采食量，提高消化率，降低料重比。

表2 復(fù)合芽孢桿菌制劑對(duì)飼料轉(zhuǎn)化率影響

2.2 復(fù)合芽孢桿菌制劑對(duì)糞便影響

由表3可見，芽孢桿菌制劑的添加顯著的降低了糞便的pH值。對(duì)照組糞便中大腸菌群數(shù)含量極顯著高于兩試驗(yàn)組(P<0.01)，對(duì)照組雙歧桿菌和大腸桿菌數(shù)均顯著低于試驗(yàn)組(P<0.01)。結(jié)果表明芽孢桿菌制劑添加有效改善了仔豬腸道微生態(tài)體系。

表3 復(fù)合芽孢桿菌制劑對(duì)豬糞樣微生物的影響

2.3 復(fù)合芽孢桿菌制劑對(duì)血液生化指標(biāo)影響

由表4可見，復(fù)合芽孢桿菌添加組的總蛋白、球蛋白、免疫球蛋白G含量均較對(duì)照組顯著提高；谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性顯著提高，尿素氮含量顯著降低；復(fù)合菌劑添加0.1 %組和0.5 %組差異不顯著；復(fù)合芽孢桿菌添加對(duì)總膽固醇和甘油三酯濃度影響差異不顯著。

表4 復(fù)合芽孢桿菌制劑對(duì)血液生化指標(biāo)的影響

3 討 論

3.1 對(duì)斷奶仔豬促生長的影響

芽孢桿菌進(jìn)入仔豬腸道后可以迅速繁殖產(chǎn)生大量的消化酶和營養(yǎng)物質(zhì)供仔豬吸收利用，提高生產(chǎn)性能[6]。王曉丹等在斷奶仔豬飼料中添加枯草芽孢桿菌顯示有良好的促生長效果，可以顯著降低斷奶仔豬豬的腹瀉率，日增重[7]。本研究中添加的統(tǒng)福菌復(fù)合芽胞桿菌制劑中的芽胞桿菌以芽孢的方式進(jìn)入豬體內(nèi)，具有耐酸耐膽堿能力強(qiáng)，可以在仔豬腸道內(nèi)能夠迅速萌發(fā)快速繁殖形成優(yōu)勢菌群，其本身含有大量的營養(yǎng)物質(zhì)，合成多種維生素等營養(yǎng)物質(zhì)。研究結(jié)果表明統(tǒng)福菌可以有效地幫助仔豬消化飼料，提高飼料的消化率，增加仔豬日增重，具有促進(jìn)生長作用。

3.2 對(duì)有害微生物的頡抗作用

仔豬斷奶階段受到應(yīng)激，容易造成消化吸收功能紊亂、腹瀉，在養(yǎng)豬生產(chǎn)中普遍采用添加低劑量的抗生素來控制仔豬斷奶腹瀉，但從生態(tài)效益和長遠(yuǎn)發(fā)展來看這種方法是不可取的。2017年6月22日，農(nóng)業(yè)部印發(fā)了《全國遏制動(dòng)物源細(xì)菌耐藥行動(dòng)計(jì)劃(2017-2020年)》提出，推進(jìn)獸用抗生素物減量化使用，實(shí)施“退出行動(dòng)”，在2020年底以前，飼料端“禁抗”，養(yǎng)殖端減抗、降抗為必然。目前很多研究都在尋找預(yù)防仔豬腹瀉的方法，其中添加益生菌制劑是一條重要的解決思路。益生菌可以通過調(diào)整腸道菌群的平衡抑制有害微生物的生長，達(dá)到改善豬體健康的目的[8]。華洵璐等研究表明芽孢桿菌進(jìn)入豬體內(nèi)以后可以抑制腸道內(nèi)大腸桿菌、沙門氏菌等病原菌生長，促進(jìn)乳酸菌和雙歧桿菌等有益微生物生長，改善消化道菌群平衡, 有效預(yù)防仔豬腹瀉[9]。本研究結(jié)果也可以看到添加芽孢桿菌制劑后，大腸桿菌極顯著的降低，雙歧桿菌和乳酸菌等益生菌極顯著提高，說明統(tǒng)福菌具有很好的對(duì)有害微生物拮抗作用。

3.3 對(duì)血清免疫指標(biāo)的影響

血清免疫指標(biāo)反映了仔豬生長代謝的能力同時(shí)也反映了仔豬抗病能力。在飼料中添加益生菌，在豬腸道內(nèi)迅速增殖，可以促進(jìn)雙歧桿菌和乳酸菌的繁殖，從而達(dá)到維持腸道菌群平衡，有增強(qiáng)仔豬免疫功能的效果[10]。喬宏興等將黃芪和枯草芽孢桿菌結(jié)合飼喂保育仔豬顯著提高了保育仔豬體內(nèi)總蛋白和免疫球蛋白的含量[11]。劉輝等研究發(fā)現(xiàn)添加益生菌可以顯著提高豬血液中免疫球蛋白總量和免疫球蛋白G的含量[12]。本研究結(jié)果中仔豬體內(nèi)總蛋白、免疫球蛋白和免疫球蛋白G含量顯著提高說明本研究所采用的復(fù)合芽孢桿菌制劑具有良好的提高仔豬免疫力的效果。血液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性和氨氮含量是反映豬體內(nèi)氮代謝的主要指標(biāo)[13]。本研究結(jié)果中符合芽孢桿菌添加組內(nèi)谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性均有顯著提高說明仔豬體內(nèi)蛋白質(zhì)合成代謝有所增加，仔豬生長代謝旺盛，復(fù)合菌劑在增強(qiáng)仔豬蛋白質(zhì)合成代謝上有一定的促進(jìn)作用。

3.4 復(fù)合菌劑添加量的影響

足夠數(shù)量的活菌數(shù)是益生菌發(fā)揮作用的關(guān)鍵，研究表明，如果一種細(xì)菌在盲腸內(nèi)容物中的濃度低于107個(gè)/g，則該菌產(chǎn)生的酶及代謝產(chǎn)物不足以影響宿主,難以滿足治療需要[14]。本次試驗(yàn)所采用的泰州綠圣元有限公司的提供的統(tǒng)福菌復(fù)合芽孢桿菌制劑活菌數(shù)達(dá)到1.0×1010cpf/g，活菌數(shù)充足。在本次試驗(yàn)中添加0.5 %的菌劑效果與添加0.1 %菌劑對(duì)保育仔豬生長性能和腹瀉率的影響效果差異不顯著，可能是由于芽孢桿菌制劑中細(xì)菌以芽孢的方式存活，芽孢抗逆性強(qiáng)，耐儲(chǔ)存、耐酸、耐膽堿，能夠很好的穿過胃和十二指腸，芽孢活化后菌體具有極快的繁殖速度，足夠數(shù)量的芽孢桿菌進(jìn)入腸道后迅速繁殖形成優(yōu)勢菌群，達(dá)到了調(diào)整微生態(tài)平衡的效果。

4 結(jié) 論

在蘇姜豬斷奶仔豬飼料中添加0.1 %的復(fù)合芽孢桿菌制劑添加能夠極顯著的提高斷奶仔豬的日增重(P<0.01)、極顯著的降低腹瀉率(P<0.01)，提高仔豬采食量，改善仔豬腸道微生態(tài)平衡，提高機(jī)體免疫力(P<0.05)，促進(jìn)了機(jī)體蛋白質(zhì)合成代謝(P<0.05)。芽孢桿菌制劑作為微生態(tài)制劑具有宜運(yùn)輸、耐儲(chǔ)藏的優(yōu)點(diǎn)，是一種優(yōu)質(zhì)的益生菌添加劑。