黎巧茹 鄒亞偉 賴(lài)文英 林春燕 李麗羽

[摘要]目的 明確CD4+細(xì)胞與CD8+細(xì)胞比值與新生兒缺氧缺血性腦病病情的相關(guān)性。方法 選取2015年10月～2018年6月中山市人民醫(yī)院新生兒科住院的60例HIE患兒及同期我院產(chǎn)科出生正常新生兒73例。應(yīng)用流式細(xì)胞儀測(cè)定血CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞及CD4+/CD8+比值。結(jié)果 HIE患兒T細(xì)胞亞群的表達(dá)均明顯低于正常新生兒（P均<0.05）;重度HIE患兒CD3+、CD4+細(xì)胞及CD4+/CD8+比值明顯均低于中度HIE患兒（P均<0.05），中度HIE患兒CD3+、CD4+細(xì)胞及CD4+/CD8+比值明顯均低于輕度HIE患兒（P均<0.05），而不同分度HIE的CD8+細(xì)胞則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）;CD3+、CD4+及CD4+/CD8+與HIE病情分度均呈負(fù)相關(guān)（P均<0.05）。結(jié)論 CD4+/CD8+比值與HIE新生兒的病情危重程度密切相關(guān)，可作為患兒病情嚴(yán)重程度的有效預(yù)測(cè)指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞]新生兒缺氧缺血性腦病;淋巴細(xì)胞;T淋巴細(xì)胞亞群;CD4+T淋巴細(xì)胞;CD8+T淋巴細(xì)胞

[中圖分類(lèi)號(hào)]R722.1

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]2095-0616（2020）01-14-04

新生兒缺氧缺血性腦?。╤ypoxic ischemicencephalopathy，HIE）是各種圍生期窒息所引起的部分或完全缺氧、腦血流減少或暫停而導(dǎo)致的胎兒或新生兒缺氧缺血性腦損傷（hypoxic ischemic braindamage，HIBD）[1]。HIE是新生兒窒息后的嚴(yán)重并發(fā)癥，也是圍產(chǎn)期新生兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害最常見(jiàn)的原因，其病情重、病死率高，并常導(dǎo)致永久性腦損傷或腦功能障礙，給家庭、社會(huì)帶來(lái)較大負(fù)擔(dān)。尋找快速、靈敏、高效的HIE診斷、病情嚴(yán)重程度和預(yù)后評(píng)估的指標(biāo)，是目前研究的一大熱點(diǎn)[2]。但由于新生兒神經(jīng)細(xì)胞可塑性較強(qiáng)，在治療時(shí)間窗予以積極的治療，可阻止病情進(jìn)展并且可一定程度的改善已發(fā)生的神經(jīng)損傷，因此早期對(duì)新生兒HIE做出診斷和病情嚴(yán)重程度的判斷，無(wú)疑是提高HIE患兒存活率、降低其致殘率的關(guān)鍵，大大減少HIE患兒后遺癥，對(duì)預(yù)后有著極為重要的意義[3]。目前國(guó)內(nèi)外新生兒科仍最常應(yīng)用Apgar評(píng)分來(lái)判斷新生兒出生后神經(jīng)系統(tǒng)的狀況，可以初步篩選HIE患兒[4]。后借助影像學(xué)手段對(duì)疾病進(jìn)行進(jìn)一步確診和病情的評(píng)估[5]。本研究旨在明確CD4+細(xì)胞與CD8+細(xì)胞比值與新生兒缺氧缺血性腦病的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料

選取2015年10月～2018年6月于我院新生兒科行住院治療的60例HIE及同期我院產(chǎn)科出生正常新生兒73例。其中HIE組患兒男39例，女21例;輕度19例，中度23例，重度18例;胎齡均為37～42周。缺氧新生兒納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）存在明確的圍生期缺氧病史;（2）患者具有腦電圖、顱腦B超或顱腦CT、MR檢查;（3）缺氧新生兒均于生后72h內(nèi)人院;（4）胎齡37～42周，患者均為足月兒;（5）缺氧患兒不合并血液病、自身免疫性疾病等其他可對(duì)血細(xì)胞組分造成影響的疾病，且亦無(wú)該類(lèi)疾病家族史;（6）母嬰均未使用過(guò)影響淋巴細(xì)胞測(cè)定的藥物。另選取同期在我院產(chǎn)科生產(chǎn)后體檢正常的新生兒73例，作為正常對(duì)照。正常對(duì)照組男35例，女38例，胎齡均為37～42周。

1.2資料采集和觀(guān)察指標(biāo)

收集我院新生兒科住院治療的60例HIE及同期我院產(chǎn)科出生正常新生兒73例的性別、年齡、胎齡、日齡、出生體重、分娩方式（剖宮產(chǎn)、順產(chǎn)、產(chǎn)鉗助產(chǎn)）等基本情況。另外對(duì)于HIE新生兒其圍生期缺氧史，低氧原因（宮內(nèi)窘迫、產(chǎn)時(shí)窒息），生后有無(wú)反應(yīng)差、發(fā)紺、抽搐、神經(jīng)系統(tǒng)癥狀及體征、臍帶、胎盤(pán)情況、羊水污染程度等臨床表現(xiàn)，Apgar評(píng)分（1、5min），重要輔助檢查等臨床資料進(jìn)行收集。

另收集缺氧患兒急性期（出生24h時(shí)）以及病情穩(wěn)定后（恢復(fù)期，出生14d）T淋巴細(xì)胞亞群參數(shù)（CD3+淋巴細(xì)胞、CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞、CD4+/CD8+），同時(shí)收集同期正常對(duì)照新生兒以上各指標(biāo)。

1.3檢測(cè)方法

T淋巴細(xì)胞亞群（CD3+淋巴細(xì)胞、CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞、CD4+/CD8+）的檢測(cè)：另采集研究對(duì)象靜脈血2mL于1.15% EDTA-K2抗凝的試管中，用貝克曼庫(kù)爾特CytoFLEX流式細(xì)胞儀，于采血后2h內(nèi)完成測(cè)試。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)采用SPSS21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以（x±s）表示，多組數(shù)據(jù)若符合正態(tài)分布，采用方差分析法，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用X2檢驗(yàn)，Spearman相關(guān)性分析淋巴細(xì)胞相關(guān)參數(shù)與HIE新生兒病情的嚴(yán)重程度行相關(guān)性分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1HIE組與正常組間淋巴細(xì)胞相關(guān)參數(shù)比較

HIE組患兒CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞所占比例明顯低于正常對(duì)照組患兒，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.05）;HIE組患兒CD4+/CD8+比例明顯低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;但兩組患兒間CD8+T淋巴細(xì)胞所占比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表1。

2.2HIE亞組間淋巴細(xì)胞相關(guān)參數(shù)比較

重度HIE患兒CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞所占比例明顯低于輕度和中度HIE患兒（P均<0.05），而中度HIE組CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞所占比例也明顯低于輕度組（P均<0.05）;重度HIE患兒CD4+/CD8+值明顯低于輕度和中度HIE患兒，中度HIE組CD4+/CD8+值也明顯低于輕度患兒（P均<0.05）;但HIE各亞組間CD8+T淋巴細(xì)胞所占比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均>0.05），見(jiàn)表2。

2.3HIE病情與淋巴細(xì)胞參數(shù)之間的相關(guān)性分析

HIE病情嚴(yán)重程度分為輕、中、重度3個(gè)等級(jí)，對(duì)HIE病情與淋巴細(xì)胞參數(shù)進(jìn)行采用Spearman等級(jí)相關(guān)性分析，結(jié)果顯示：T淋巴細(xì)胞亞群分析，CD4+T淋巴細(xì)胞所占比例與患兒病情嚴(yán)重程度呈明顯負(fù)相關(guān)（r=-0.531，P<0.05），而CD8+T淋巴細(xì)胞所占比例與患兒病情嚴(yán)重程度無(wú)明顯的相關(guān)性（P>0.05），CD4+/CD8+比值與患兒病情也呈現(xiàn)一定的負(fù)相關(guān)（r=-0.436，P<0.05）。見(jiàn)表3。

3 討論

本研究納入HIE患兒T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)參數(shù)（CD3+淋巴細(xì)胞、CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞、CD4+/CD8+），以期進(jìn)一步闡釋HIE患兒的細(xì)胞免疫狀態(tài)。HIE有著極為復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制，近年研究表明，HIE的發(fā)生機(jī)制與免疫炎癥損傷有關(guān)，免疫系統(tǒng)及其功能異常在圍產(chǎn)期窒息和HIE發(fā)病中也起著重要作用[6]。有學(xué)者認(rèn)為，HIE后免疫抑制（淋巴細(xì)胞參與）與免疫應(yīng)答間的平衡一旦被打破，會(huì)引起腦缺血進(jìn)一步加重甚至導(dǎo)致二次損傷[7]。另外有研究報(bào)道，新生兒臍血、外周血的淋巴細(xì)胞亞群水平低下，窒息可進(jìn)一步加重新生兒的T淋巴細(xì)胞亞群紊亂，而且窒息程度越嚴(yán)重，免疫功能降低越嚴(yán)重，從而提出了圍產(chǎn)期窒息可導(dǎo)致新生兒免疫功能紊亂[8]。對(duì)HIE的T淋巴細(xì)胞亞群的變化進(jìn)行研究，將有利于臨床對(duì)于HIE的診治。國(guó)內(nèi)有研究顯示，新生兒HIE的CD3+淋巴細(xì)胞、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比值均明顯低于正常新生兒。而且與HIE病情程度密切相關(guān)，HIE病情越嚴(yán)重，CD3+淋巴細(xì)胞降低越明顯，提示缺氧、缺血可導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞亞群紊亂，表明新生兒HIE時(shí)細(xì)胞免疫功能受抑制，在HIE發(fā)病過(guò)程中免疫介導(dǎo)損傷起著重要的啟動(dòng)性作用[9-10]。另外，有研究顯示CD3+淋巴細(xì)胞和CD4+T淋巴細(xì)胞表達(dá)與HIE患兒羊水污染存在負(fù)相關(guān)，而與出生體重和Apgar評(píng)分呈正相關(guān)，提示羊水污染程度越重，出生體重越低，Apgar評(píng)分越低，細(xì)胞免疫功能低下越明顯[11]。本研究結(jié)果顯示，HIE新生兒其急性期血常規(guī)中的淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)較無(wú)HIE缺氧新生兒和正常對(duì)照新生兒明顯降低。HIE新生兒T淋巴細(xì)胞亞群的分析顯示，HIE組患兒CD3+淋巴細(xì)胞和CD4+T淋巴細(xì)胞以及CD4+/CD8+所占比例明顯低于正常對(duì)照組患兒;但兩組患兒間CD8+T淋巴細(xì)胞所占比例無(wú)明顯差異;而HIE重度患兒其CD3+淋巴細(xì)胞、CD4+T淋巴細(xì)胞以及CD4+/CD8+所占比例也明顯低于中度和輕度HIE患兒，而中度病情患兒其上述指標(biāo)也較輕度患兒明顯降低，另外，患兒病情的嚴(yán)重程度也與患兒以上指標(biāo)呈明顯的正相關(guān)，故CD3+淋巴細(xì)胞、CD4+T淋巴細(xì)胞以及CD4+/CD8+比值與HIE新生兒的病情危重程度密切相關(guān)，可作為患兒病情嚴(yán)重程度的有效預(yù)測(cè)指標(biāo)。

目前關(guān)于HIE患兒T淋巴細(xì)胞亞群異常的機(jī)制尚不完全清楚。目前認(rèn)為其可能存在的機(jī)制包括：缺血缺氧損傷可誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡加速，使T淋巴細(xì)胞活性、數(shù)量下降[12]。中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有調(diào)節(jié)免疫功能的作用，而HIE常導(dǎo)致中樞神經(jīng)受損[13]。使其免疫調(diào)節(jié)功能下降，從而使T細(xì)胞活性降低;同時(shí)，當(dāng)人體處于應(yīng)激狀態(tài)下時(shí)，糖皮質(zhì)激素、兒茶酚胺等水平升高有關(guān)會(huì)抑制淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生[14]。另外，有研究顯示，HIE可使NK細(xì)胞活性降低，由于NK細(xì)胞具有增強(qiáng)T淋巴細(xì)胞活性的作用，故NK細(xì)胞的活性下降會(huì)在一定程度上影響T淋巴細(xì)胞亞群的功能[15]。

綜上所述，淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)尤其CD4+與CD8+比值可用于HIE新生兒的診斷、病情危險(xiǎn)度及恢復(fù)情況的評(píng)價(jià)和預(yù)后評(píng)估多個(gè)方面，具有重要的意義。

[參考文獻(xiàn)]

[1]中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)新生兒學(xué)組.新生兒缺血缺氧性腦病診斷標(biāo)準(zhǔn)[J].中華兒科雜志，2005，43（8）： 584.

[2]Ferriero DM.Neonatal brain injury[J].N Engl J Med， 2014，351（19）：1985-1995.

[3]Edwards AD， Brocklehurst P，Gunn AJ， et al.Neurological-outcomes at 18momhs of age after moderate hypothermiaforperinatal hypoxic schaemic encephalopathy：Synthesis andmeta-analysis of trial data[J].BMJ， 2017， 12（9）：340-363.

[4]Shankaran S，Bames PD， Hintz SR， et al.Brain injuryfollowing trial of hypothermia for neonatal hypoxicischaemic encephalopathy[J].Arch Dis Child Fetal NeonatalEd， 2015， 97（6）：398-404.

[5]張桂青，李慶豐.新生兒缺血缺氧腦病早期MRI表現(xiàn)及分型[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù)，2000，15（5）：355-357.

[6]張曉燕，林麗星，王潔，等.缺氧缺血性腦病新生兒自然殺傷細(xì)胞與T細(xì)胞亞群的變化及其相關(guān)因素[J].實(shí)用兒科臨床雜志，2006，21（14）：906-907.

[7]劉敬，孟繁婉，戎小平，等.新生兒缺氧缺血性腦病的免疫學(xué)研究[J].中華圍產(chǎn)學(xué)雜志，2002，5（2）： 113-117.

[8]楊梅，林麗星，王潔，等.缺氧缺血性腦病新生兒體液免疫功能的變化及其影響因素[J].實(shí)用臨床兒科雜志，2009，24（2）：119-121.

[9]鄭振文，李吉昌，李桂英，等.T細(xì)胞亞群，IL-2，NSE與新生兒HIE的研究及臨床意義[J].濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，31（1）： 25-27.

[10]Douglas-Escobar M， weiss MD.Biomarkers of hypoxic-ischemic encephalopathy in newboms[J].Front Neuml，2012，3（4）：144.

[11]劉文彬，周穎，劉華君.新生兒缺氧缺血性腦病免疫功能研究[J].中國(guó)優(yōu)生及遺傳雜志2004，12（3）：80-81.

[12]Colbourne F，Sutherland GR， Auer RN， et al.Electronmicroscopic evidence against apoptosis as the mechanismof neuronal death in global ischemia[J].J Neurosci， 2015，19（11）：4200-4210.

[13]Wei L，Han BH， Li Y， et al.Cell death mechanism andprotective effect of erythropoietin after focal ischemia inthe whisker-barrel cortex of neonatal rats[J].Journal ofPharmacology and Experimental Therapeutics， 2016，317（1）：109-116.

[14]Yokobori S， Hosein K， Burks S， et al.Biomarkers for theclinical differential diagnosis in traumatic brain injury asystematic review[J].CNs Neuroscience&Therapeutics，2013，19（8）：556-565.

[15]Lv H， Wang Q， Wu S， et al.Neonatal hypoxic ischemicencephalopathy related biomarkers in serunl and cerebrospinalfluid[J].Clin Chim Acta，2015，450（10）：282-297.

（收稿日期：2019-05-13）