吳倩文，祝 昊，曹渝珊，呂新全

頭頸部腫瘤中涎腺腫瘤及牙源性腫瘤占比較大[1]，腫瘤性肌上皮細(xì)胞在多種涎腺腫瘤中增生活躍，導(dǎo)致涎腺腫瘤的復(fù)雜多樣性[1-2]。牙源性腫瘤可分為3類(lèi)：上皮來(lái)源、間充質(zhì)/外胚層間充質(zhì)來(lái)源和混合型[1,3]。涎腺腫瘤與牙源性腫瘤種類(lèi)繁多，形態(tài)類(lèi)似，臨床病理診斷及鑒別診斷較為困難，因此尋找特異性免疫組化指標(biāo)具有重要價(jià)值。WT-1首次以抑癌基因從胎兒腎母細(xì)胞瘤中分離，是一種與細(xì)胞凋亡相關(guān)的抑制基因[4-5]。近年相關(guān)研究顯示W(wǎng)T-1具有癌基因的作用[6]，惡性腫瘤中缺氧誘導(dǎo)因子或原癌基因均可激活WT-1的轉(zhuǎn)錄，引發(fā)細(xì)胞凋亡受阻[7]。本文采用免疫組化SP法檢測(cè)WT-1在涎腺腫瘤和牙源性腫瘤中的表達(dá)，探討WT-1在兩者中的相關(guān)性及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 材料收集2011～2016年鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院確診的涎腺腫瘤141例及牙源性腫瘤84例；所有標(biāo)本均由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師分別閱片后共同診斷，其中包括多形性腺瘤(pleomorphic adenoma, PA)28例、基底細(xì)胞腺瘤(basal cell adenoma,BCA)29例、癌在多形性腺瘤中(carcinoma ex pleomorphic adenoma, CXPA)26例、腺樣囊性癌(adenoid cystic carcinoma, ACC)30例、腺泡細(xì)胞癌(acinic cell carcinoma, Aci CC)28例、成釉細(xì)胞瘤(ameloblastoma, AME)30例、牙源性腺樣瘤(adenomatoid odontogenic tumor, AOT)13例，牙源性角化囊腫(odontogenic keratocyst, OKC)30例，成釉細(xì)胞癌(ameloblastic carcinoma, AC)11例(表1)。

表1 涎腺腫瘤及牙源性腫瘤的臨床病理資料

PA.多形性腺瘤；BCA.基底細(xì)胞腺瘤；CXPA.癌在多形性腺瘤中；ACC.腺樣囊性癌；Aci CC.腺泡細(xì)胞癌；AME.成釉細(xì)胞瘤；OKC.牙源性角化囊腫；AOT.牙源性腺樣瘤；AC.成釉細(xì)胞癌

1.2 方法所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，3μm 厚連續(xù)切片，行HE及免疫組化SP法染色。

1.3 結(jié)果判定以已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。WT-1以胞質(zhì)呈棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。鏡下觀(guān)察切片內(nèi)無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞或陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10%為陰性(-)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>10%為陽(yáng)性(+)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，分析比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 正常涎腺組織中WT-1的表達(dá)正常涎腺組織中，導(dǎo)管細(xì)胞的WT-1呈彌漫胞質(zhì)陽(yáng)性(圖1)，少許腺泡細(xì)胞及肌上皮細(xì)胞中WT-1可呈陽(yáng)性(圖2)。

2.2 涎腺腫瘤及牙源性腫瘤中WT-1表達(dá)的相關(guān)性涎腺腫瘤中WT-1呈胞質(zhì)陽(yáng)性；牙源性腫瘤中WT-1偶可陽(yáng)性。WT-1在涎腺腫瘤PA、BCA、CXPA、ACC、Aci CC中陽(yáng)性率分別為92.86%(26/28)、75.86%(22/29)、69.23%(18/26)、53.33%(16/30)、46.43%(13/28)(圖3～7)。在牙源性腫瘤AME、AOT、OKC、AC中陽(yáng)性率分別為13.33%(4/30)、7.69%(1/13)、0(0/30)、0(0/11)。WT-1在上述腫瘤中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。WT-1在涎腺腫瘤和牙源性腫瘤中的表達(dá)：涎腺腫瘤中的陽(yáng)性率為67.37%(95/141)，牙源性腫瘤中的陽(yáng)性率為5.95%(5/84)，WT-1在涎腺腫瘤中的陽(yáng)性率明顯高于牙源性腫瘤，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001，表2)。另外，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)WT-1可在腫瘤組織的血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)(圖8)。

表2 涎腺腫瘤及牙源性腫瘤中WT-1表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

涎腺中有上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transdifferentiation,EMT)[5,8]，WT-1參與間充質(zhì)-上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化(mesenchymal-epithelial transdifferentiation, MET)和EMT的過(guò)程，顯示上皮-肌上皮細(xì)胞分化，可能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)[9-10]。肌上皮細(xì)胞分化的多樣性是涎腺腫瘤分類(lèi)及鑒別的重點(diǎn)，尋找相關(guān)肌上皮細(xì)胞標(biāo)志物十分關(guān)鍵。文獻(xiàn)報(bào)道，翻譯后磷酸化的過(guò)程會(huì)導(dǎo)致WT-1蛋白在腫瘤細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核中移動(dòng)，使WT-1在腫瘤中呈細(xì)胞質(zhì)彌漫顆粒狀陽(yáng)性[5,8-9,11]。

PA屬于良性腫瘤，具有多樣的肌上皮細(xì)胞分化。Langman等[5]提出WT-1是PA中有效的腫瘤性肌上皮細(xì)胞標(biāo)志物[10-11]。另外，WT-1陽(yáng)性細(xì)胞可能經(jīng)歷MET與EMT的過(guò)程[5,9-11]。WT-1被認(rèn)為是MET的誘導(dǎo)因子，可能參與涎腺腫瘤的分化及形成[8]。WT-1影響EMT的過(guò)程與其在腫瘤性肌上皮細(xì)胞中的表達(dá)并不排斥，因?yàn)榻?jīng)歷EMT的腫瘤細(xì)胞會(huì)失去細(xì)胞間凝聚和肌纖維的細(xì)胞質(zhì)積聚，這可能是形成腫瘤性肌上皮細(xì)胞的因素之一[5,9,11]。CXPA是來(lái)自PA的惡性上皮性腫瘤，良惡性成分的比例變化大[1]，本實(shí)驗(yàn)WT-1陽(yáng)性病例中，癌變部分多為肌上皮癌或上皮-肌上皮癌，有大量腫瘤性肌上皮細(xì)胞。文獻(xiàn)報(bào)道，β-catenin基因的突變與PA的生成及癌變有密切關(guān)系[12]，活化的β-catenin基因可促使細(xì)胞進(jìn)入早期EMT過(guò)程[9]，WT-1、β-catenin基因、EMT三者之間存在緊密聯(lián)系[2,9]，β-catenin基因在許多癌組織中被激活，具有致癌作用[12]。BCA中存在基底樣肌上皮細(xì)胞和少量導(dǎo)管細(xì)胞[1]，并具有β-catenin的免疫表達(dá)及基因突變[13]，腫瘤性肌上皮細(xì)胞的分化及β-catenin基因的異常表達(dá)可以解釋W(xué)T-1的表達(dá)。ACC是由導(dǎo)管上皮及肌上皮細(xì)胞構(gòu)成的腫瘤，不同個(gè)體中，兩種細(xì)胞比例不同，多由形態(tài)較為一致的腫瘤性肌上皮細(xì)胞構(gòu)成。β-catenin基因在部分ACC中呈弱表達(dá)[1,11]。涎腺腫瘤中，WT-1的表達(dá)與β-catenin基因的活化可能有部分重疊[9]。β-catenin在Aci CC中存在異常表達(dá)[12]，且Aci CC偶爾可見(jiàn)肌上皮分化[1]。β-catenin基因的活化或部分分化的肌上皮細(xì)胞可能是導(dǎo)致WT-1在該腫瘤中稍低表達(dá)的原因，在診斷中具有一定參考性[11]。

圖1WT-1在正常涎腺組織的導(dǎo)管細(xì)胞中呈細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性，SP法圖2WT-1在正常涎腺組織的少許腺泡細(xì)胞及肌上皮細(xì)胞中呈陽(yáng)性，SP法圖3WT-1在PA中呈陽(yáng)性，SP法圖4WT-1在BCA中呈陽(yáng)性，SP法圖5WT-1在CXPA中呈陽(yáng)性，該例癌變類(lèi)型為肌上皮癌，SP法圖6WT-1在ACC篩狀結(jié)構(gòu)的腫瘤細(xì)胞中呈陽(yáng)性，SP法圖7WT-1在Aci CC中呈陽(yáng)性，SP法圖8WT-1在腫瘤組織內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞中呈陽(yáng)性，SP法

牙源性腫瘤來(lái)源于成牙器官或其殘余上皮、外胚間充質(zhì)和(或)間充質(zhì)成分[1,3]，不具有腫瘤性肌上皮的分化，也不參與MET與EMT過(guò)程，WT-1在牙源性腫瘤中偶有表達(dá)，可能是外界因素所致。

另外，WT-1在腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)[6,11,14]。文獻(xiàn)報(bào)道[6,10,15]WT-1可以調(diào)節(jié)一組促進(jìn)血管增生的基因表達(dá)，如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、血栓素A2、血管生成素等，提示W(wǎng)T-1可能是腫瘤血管生成的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因素。

綜上所述，WT-1在涎腺正常組織中主要表達(dá)于導(dǎo)管細(xì)胞，肌上皮細(xì)胞較少表達(dá)。WT-1在涎腺腫瘤中多表達(dá)于腫瘤性肌上皮細(xì)胞，導(dǎo)管細(xì)胞中少見(jiàn)表達(dá)，在牙源性腫瘤中不表達(dá)或偶表達(dá)。WT-1有望成為鑒別涎腺腫瘤與牙源性腫瘤的免疫組化標(biāo)志物。