楊潔，周利，余煥，孫荷芝，王新茹，張新忠，楊梅，陳宗懋，羅逢健

固相萃取和分散固相凈化-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定茶鮮葉和干茶中的農(nóng)藥殘留

楊潔1,2，周利1*，余煥1,2，孫荷芝1，王新茹1，張新忠1，楊梅1，陳宗懋1，羅逢健1*

1. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全研究中心，浙江 杭州 310008；2. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院，北京 100081

建立了茶鮮葉和干茶中9種農(nóng)藥的殘留分析方法。樣品中的殘留農(nóng)藥經(jīng)乙腈提取，F(xiàn)lorisil/GCB固相萃取柱和PSA/GCB分散固相聯(lián)合凈化，超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）和氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）測(cè)定。在0.005~1.000?mg·kg-1的添加水平下，目標(biāo)農(nóng)藥在鮮葉和干茶中的平均回收率在70.3%~103.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）＜20.0%。在0.005~2.000?mg·kg-1濃度范圍，目標(biāo)農(nóng)藥在鮮葉和干茶基質(zhì)中的線性關(guān)系良好，＞0.995?4。定量限（LOQ）為0.005?mg·kg-1。實(shí)際樣品檢測(cè)結(jié)果表明，該方法靈敏度高，重現(xiàn)性好，能夠滿足農(nóng)藥多殘留檢測(cè)的要求。

農(nóng)藥多殘留；超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜；氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用；茶；固相萃??；分散固相凈化

茶樹生長(zhǎng)在濕熱的環(huán)境中，病蟲草害較易發(fā)生，化學(xué)防治仍是其防治的方法之一[1]。在茶樹生長(zhǎng)期內(nèi)，通常需要施用化學(xué)農(nóng)藥以保障茶葉產(chǎn)量和質(zhì)量。由于農(nóng)藥抗性和農(nóng)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，茶園常用農(nóng)藥也需更新?lián)Q代[2]。研究表明，魚藤酮[3]、甲氧蟲酰肼[4-5]、嘧菌酯[6]等對(duì)茶園危害嚴(yán)重的茶尺蠖、假眼小綠葉蟬、斑點(diǎn)病等病蟲害具有較好的防治效果，具有在茶園登記應(yīng)用的潛力。聯(lián)苯菊酯早在1988年就在我國登記使用，對(duì)茶葉中的多種害蟲有較好的防治效果[7]。茚蟲威、蟲螨腈、苯醚甲環(huán)唑、氟啶蟲酰胺、吡唑醚菌酯是近年茶園中登記農(nóng)藥品種。

上述農(nóng)藥在茶葉中的前處理方法包括分散固相萃取法（dSPE，Dispersive solid-phase extraction）[8-12]、固相萃取法（SPE，Solid-phase extraction）[13-15]、加速溶劑萃取法[16]和凝膠滲透色譜法[17]等。其中常用的SPE柱有TPT柱[18]、Carb-NH2柱[19-20]、PSA柱[21-22]和Florisil柱[13,23]等，通常使用物質(zhì)的回收率和對(duì)基質(zhì)的凈化效果來判定SPE柱的適用性[24]。

我國茶葉農(nóng)藥多殘留分析方法國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 23204—2008《茶葉中519種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定氣相色譜-質(zhì)譜法》和GB/T 23200.13—2016《茶葉中448種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜法》中，均采用乙腈提取、TPT固相萃取柱凈化、質(zhì)譜儀測(cè)定茶葉中的農(nóng)藥多殘留，但是上述兩個(gè)國家標(biāo)準(zhǔn)中均無茶葉中氟啶蟲酰胺分析方法。茶葉中富含的茶多酚、生物堿、色素和糖[25]等內(nèi)含物質(zhì)易與目標(biāo)農(nóng)藥形成共流出物，對(duì)目標(biāo)化合物的分析造成干擾[26]，因此茶葉中農(nóng)藥殘留分析對(duì)樣品前處理要求較高。本試驗(yàn)通過比較TPT柱、Carb-NH2柱、Florisil＋GCB混合柱和Florisil＋GCB混合柱-分散固相萃取4種方法對(duì)茶鮮葉和干茶基質(zhì)的回收率、凈化效果和試驗(yàn)時(shí)間成本的差異，建立了茶鮮葉和干茶中9種農(nóng)藥的Florisil/GCB固相萃取柱結(jié)合PSA/GCB分散固相凈化的樣品前處理方法，并應(yīng)用于實(shí)際樣品測(cè)定。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Varian 450GC-300MS氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Varian公司）；Waters ACQUITY UPLC H-Class超高效液相色譜-Waters Vevo TQ-SMicro三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有MassLynx 4.1處理軟件（美國Waters公司）；3K-15冷凍離心機(jī)（德國Sigma公司）；Vortex Genie 2型渦旋振蕩器（美國Scientific Industries）；R-210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國IKA公司）；玻璃柱管（200?mm×10?mm，杭州常盛科教器具廠）；0.22?μm Filter Unit濾膜（天津博納艾杰爾科技有限公司）。

農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（德國CNW Technologies Gmb H公司，純度＞99.0%）。乙腈、正己烷、丙酮（色譜純，德國默克公司）；甲酸（色譜純，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司）；無水硫酸鎂、無水硫酸鈉、無水乙酸鈉（分析純，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司）；無水氯化鈉（分析純，廣東光華科技股份有限公司）；超純水（杭州娃哈哈有限公司）；GCB（120~400目）、PSA（40~60?μm）、Cleanert TPT凈化柱（1?g/6?mL）、Cleanert PestiCarb-NH2凈化柱（1?g/6?mL）（天津博納艾杰爾科技有限公司）；Florisil吸附劑（60~100目，溫州市化學(xué)用料廠）。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別稱取9種化合物標(biāo)準(zhǔn)品各0.01?g，用乙腈（色譜純）溶解并定容至10?mL，分別配制成1?000?mg·L-1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，–20℃保存。將上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用乙腈逐級(jí)稀釋成2.00、1.00、0.50、0.20、0.05、0.005?mg·L-1系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3 樣品的提取與凈化

準(zhǔn)確稱取2.0?g粉碎后的鮮葉或干茶樣品（精確至0.01?g）于50?mL離心管中（干茶中加入1?mL水混勻靜置10?min），加入20?mL乙腈，渦旋震蕩1?min，靜置15?min，再加入1?g無水氯化鈉和1?g無水硫酸鎂，渦旋震蕩1?min，8?000?r·min-1離心5?min后，取10?mL上清液于雞心瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，待凈化。4種凈化方式如下：

1.3.1 TPT柱凈化

用10?mL乙腈-苯（乙腈∶苯=3∶1）預(yù)淋洗TPT柱，25?mL乙腈-苯（乙腈∶苯=3∶1）分5次潤洗雞心瓶后上柱，接收流出液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干后吹干，加入1?mL乙腈溶解殘?jiān)^0.22?μm尼龍微孔濾膜后轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣小瓶，待進(jìn)樣分析。

1.3.2 Carb-NH2柱凈化

用10?mL乙腈-苯（乙腈∶苯=3∶1）預(yù)淋洗Carb-NH2凈化柱，25?mL乙腈-苯（乙腈∶苯=3∶1）分5次潤洗雞心瓶后上柱，接收流出液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干后吹干，加入1?mL乙腈溶解殘?jiān)?，過0.22?μm尼龍微孔濾膜后轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣小瓶，待進(jìn)樣分析。

1.3.3 Florisil＋GCB混合柱凈化

用5?mL丙酮-正己烷（丙酮∶正己烷=1∶1）預(yù)淋洗自制的Florisil＋GCB混合柱，用15?mL丙酮-正己烷（丙酮∶正己烷=1∶1）分3次潤洗雞心瓶后上柱，接收流出液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干后吹干，用1?mL乙腈定容，過0.22?μm尼龍微孔濾膜后轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣小瓶，待進(jìn)樣分析。

自制Florisil＋GCB混合柱：在玻璃層析柱中，從下至上依次裝入脫脂棉，1?g無水硫酸鈉，2.05?g混勻的Florisil和GCB（質(zhì)量比為2∶0.05），1?g無水硫酸鈉。Florisil吸附劑使用前在650℃下烘5?h，放入干燥器冷卻，使用時(shí)，按照超純水∶吸附劑=7∶100的比例加入超純水混勻靜置4?h后使用。

1.3.4 Florisil+GCB混合柱和dSPE聯(lián)合凈化

將1.3.3章節(jié)中定容后的乙腈溶液轉(zhuǎn)移到盛裝有30?mg PSA和30?mg GCB的2?mL離心管中，渦旋震蕩30?s，12?000?r·min-1離心1?min，過0.22?μm尼龍微孔濾膜后轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣小瓶，待進(jìn)樣分析。

1.4 添加回收率試驗(yàn)

在茶鮮葉和空白樣品中，分別添加標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，制備添加水平為0.005、0.05、1?mg·kg-1的茶鮮葉添加樣品，和添加水平為0.005、0.05、0.5?mg·kg-1的成茶添加樣品，每個(gè)添加水平5個(gè)重復(fù)，渦旋混勻后過夜放置，按照1.3.4章節(jié)進(jìn)行提取凈化。

1.5 儀器條件

1.5.1 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件

液相色譜條件：色譜柱ACQUITY UPLCBEH C18（2.1?mm×100?mm×1.7?μm）；流動(dòng)相A為乙腈（含1‰甲酸），流動(dòng)相B為超純水，進(jìn)樣量5?μL，流速0.25?mL·min-1，柱溫40℃，流動(dòng)相洗脫程序：0~0.5?min（A 5%~30%），0.5~3?min（A：30%~70%），3~5?min（A：70%~85%），5~6?min（A：85%~99%），7~8?min（A：99%~5%），8~9?min（A：5%）。離子源模式ESI+，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM模式；離子源溫度150℃；脫溶劑氣溫度350℃；毛細(xì)管電壓3.5?kV；脫溶劑氣N2；碰撞氣Ar；目標(biāo)化合物質(zhì)譜參數(shù)見表1。

1.5.2 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件

氣相色譜條件：色譜柱VF-5ms（30?m×0.25?mm×0.25?μm，美國安捷倫公司）；升溫程序80℃保持1?min，以20℃·min-1的速率升至200℃，以6℃·min-1的速率升至266℃，以1.5℃·min-1的速率升至280℃，保持5?min。

質(zhì)譜條件：離子源溫度230℃；傳輸線溫度280℃；進(jìn)樣口溫度250℃；載氣為高純氦氣，純度≥99.999%；離子化方式：EI；監(jiān)測(cè)模式為選擇離子監(jiān)測(cè)SIM，目標(biāo)化合物質(zhì)譜參數(shù)見表2。

表1 農(nóng)藥測(cè)定的ESI+-MS/MS條件

注：*：定量離子

Note: *: Quantification ions

表2 農(nóng)藥測(cè)定的EI-MS條件

1.5.3 定性定量方法

在與基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液相一致的保留時(shí)間下，所選擇的所有離子或離子對(duì)的豐度比與基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液樣品的離子豐度比相一致（相對(duì)豐度＞50%，允許±20%偏差；相對(duì)豐度＞20%~50%，允許±25%偏差；相對(duì)豐度＞10%~20%，允許±30%偏差；相對(duì)豐度≤10%，允許±50%偏差）[27]，則可判斷樣品中存在該目標(biāo)化合物。目標(biāo)化合物的定量采用外標(biāo)法，定量用溶液采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品前處理?xiàng)l件優(yōu)化

對(duì)比了1.3.1章節(jié)中TPT柱、1.3.2章節(jié)中Carb-NH2柱和1.3.3章節(jié)中Florisil＋GCB混合柱3種凈化方式對(duì)目標(biāo)化合物的回收率和基質(zhì)效應(yīng)（ME，采用單點(diǎn)校正方式，=(A－A)÷A×100%，其中A表示基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液的響應(yīng)，A表示溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液的響應(yīng)）。由表3可知，采用Carb-NH2柱凈化后物質(zhì)的回收率在56.7%~84.1%，而采用TPT和Florisil＋GCB兩種方法凈化后的回收率在71.2%~94.9%，RSD為1.2%~14.0%，滿足農(nóng)藥殘留測(cè)定要求[28]。TPT柱凈化后的基質(zhì)效應(yīng)稍大于Florisil＋GCB的基質(zhì)效應(yīng)。

但是Florisil＋GCB混合柱凈化后的定容溶液呈墨綠色，易對(duì)質(zhì)譜造成污染。采用1.3.4章節(jié)方法，即加入GCB和PSA分散固相吸附劑再次凈化后，溶液呈淺黃色，是由于GCB和PSA可去除基質(zhì)中的有機(jī)酸、糖類和極性色素等[29-31]。經(jīng)1.3.4章節(jié)處理后，目標(biāo)物質(zhì)的回收率在70.6%~108.4%，RSD＜20%。

比較體積比為9∶1、8∶2、7∶3、1∶1的正己烷-丙酮洗脫溶液對(duì)Florisil＋GCB混合柱凈化后回收率的影響（圖1），結(jié)果表明，隨著丙酮比例的增加，目標(biāo)化合物回收率增加。在正己烷∶丙酮=1∶1混合溶液洗脫時(shí)，9種農(nóng)藥的添加回收率增加到73.9%~107.3%。洗脫溶劑體積對(duì)回收率的影響如圖2所示，隨著洗脫溶劑體積增加，目標(biāo)化合物回收率增加，當(dāng)洗脫溶液體積增加到15?mL時(shí)，物質(zhì)的回收率達(dá)83.0%~97.6%，因此采用15?mL正己烷∶丙酮=1∶1混合溶液作為最佳洗脫溶劑。

比較洗脫溶劑體積對(duì)TPT柱回收率的影響（圖3），當(dāng)洗脫溶劑（乙腈∶苯=3∶1）體積增加到20?mL時(shí)，目標(biāo)物的回收率達(dá)到農(nóng)殘測(cè)定要求，在72.2%~88.4%。此方法與采用15?mL體積比為1∶1的正己烷-丙酮洗脫Florisil＋GCB混合柱相比，需要使用更多的洗脫溶劑；與正己烷和丙酮相比，乙腈的高沸點(diǎn)使得洗脫溶液的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮時(shí)間增加，因此本試驗(yàn)選擇1.3.4章節(jié)中的方法分析茶葉中9種目標(biāo)化合物的殘留量。

表3 農(nóng)藥經(jīng)過不同的凈化材料的回收率和ME

注：A：甲氧蟲酰肼；B：魚藤酮；C：嘧菌酯；D：苯醚甲環(huán)唑；E：茚蟲威；F：氟定蟲酰胺；G：吡唑嘧菌酯；H：聯(lián)苯菊酯；I：蟲螨腈。下同

圖2 Florisil+GCB混合柱的洗脫溶劑體積對(duì)農(nóng)藥回收率的影響

圖3 TPT柱的洗脫溶劑體積對(duì)農(nóng)藥回收率的影響

2.2 線性方程和基質(zhì)效應(yīng)

制備鮮葉和干茶的基質(zhì)空白溶液，并用空白基質(zhì)溶液配置質(zhì)量濃度為2.00、1.00、0.50、0.20、0.05、0.005?mg·L-1的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液。

以溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液與鮮葉和干茶的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液的斜率計(jì)算基質(zhì)效應(yīng)[32]：

=(K－K)/K×100%

其中K為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率，K為溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。結(jié)果如表4所示，在0.005~2?mg·kg-1的濃度范圍內(nèi)，目標(biāo)化合物在溶劑、鮮葉基質(zhì)和干茶基質(zhì)中的線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)在0.995?4~0.999?8。

鮮葉中9種農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)在–29.3%~23.7%，其中除氟啶蟲酰胺（–29.3%）和聯(lián)苯菊酯（23.7%）的基質(zhì)效應(yīng)高于20%外，其他7種農(nóng)藥在茶鮮葉基質(zhì)中的基質(zhì)效應(yīng)不顯著。干茶中9種農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)明顯高于鮮葉中，除了蟲螨腈在干茶中的基質(zhì)效應(yīng)小于鮮葉中外，其他8種農(nóng)藥干茶中的基質(zhì)效應(yīng)明顯高于鮮葉中，范圍在–77.8%~58.9%，干茶基質(zhì)引起的基質(zhì)增強(qiáng)或基質(zhì)減弱效應(yīng)明顯。因此，茶葉中目標(biāo)化合物定量均采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3 回收率和精密度

鮮葉和干茶基質(zhì)中9種農(nóng)藥的添加回收率和精密度見表5。在0.005~1.000?mg·kg-1的添加范圍內(nèi)，目標(biāo)化合物的回收率范圍在70.3%~103.9%，RSD＜20.0%。LOQ以最小添加濃度表示，為0.005?mg·kg-1。

表4 農(nóng)藥的線性方程和相關(guān)系數(shù)

表5 農(nóng)藥的添加回收率和LOQ（n=5）

2.4 實(shí)際樣品測(cè)定

采用本文方法測(cè)定了市售27份茶葉樣品，其中2份檢出茚蟲威（0.007~0.008?mg·kg-1）、14份檢出聯(lián)苯菊酯（0.006~0.400?mg·kg-1），2份檢出蟲螨腈（0.005~0.200?mg·kg-1），8份檢出苯醚甲環(huán)唑（0.008~0.300?mg·kg-1），7份檢出吡唑嘧菌酯（0.005~0.030?mg·kg-1），檢出樣品的農(nóng)藥殘留量均遠(yuǎn)低于我國GB/T 2763—2019[33]中規(guī)定的相關(guān)農(nóng)藥的最大殘留限量水平（茚蟲威5?mg·kg-1，聯(lián)苯菊酯5?mg·kg-1，蟲螨腈20?mg·kg-1，苯醚甲環(huán)唑10?mg·kg-1，吡唑醚菌酯10?mg·kg-1）。所有茶樣均未檢出甲氧蟲酰肼、嘧菌酯、魚藤酮和氟定蟲酰胺。

3 結(jié)論

本研究通過優(yōu)化茶鮮葉和干茶基質(zhì)中目標(biāo)農(nóng)藥的前處理?xiàng)l件，比較4種方法對(duì)茶葉中目標(biāo)物質(zhì)回收率、基質(zhì)效應(yīng)、溶劑使用量和試驗(yàn)時(shí)間成本的差異，建立了乙腈提取，F(xiàn)lorisil+GCB混合柱和PSA/GCB分散固相聯(lián)合凈化，UPLC-MS/MS和GC-MS測(cè)定茶葉中氟啶蟲酰胺等9種農(nóng)藥的低成本測(cè)定方法。對(duì)市售27份茶葉樣品的篩查結(jié)果表明，該方法適用于茶葉中目標(biāo)農(nóng)藥殘留的定量分析檢測(cè)。

[1] 李加成. 我國農(nóng)業(yè)病蟲害防治現(xiàn)狀及建議分析[J]. 種子科技, 2017, 35(6): 106-108. Li J C. Status analysis and suggestions of the disease and pest control in China [J]. Seed Science & Technology, 2017, 35(6): 106-108.

[2] 羅宗秀, 蘇亮, 陳宗懋. 茶園農(nóng)藥須注意更新?lián)Q代[J]. 中國茶葉, 2018, 40(3): 36-38. Luo Z X, Su L, Chen Z M. Attention should be paid to update the pesticide in tea garden [J]. China Tea, 2018, 40(3): 36-38.

[3] 田新湖, 陳益生. 魚藤酮等生物農(nóng)藥防治茶假眼小綠葉蟬藥效試驗(yàn)[J]. 上海農(nóng)業(yè)科技, 2012, 28(1): 127-130. Tian X H, Chen Y S. Control efficacy of rotenone and other biological pesticides on the tea green leafhopper [J]. Shanghai Agricultural Science and Technology, 2012, 28(1): 127-130.

[4] 趙豐華, 任紅樓, 蔣雙豐, 等. 豫南茶園主要害蟲防治藥劑篩選研究[J]. 天津農(nóng)業(yè)科學(xué), 2014, 20(12): 94-98. Zhao F H, Ren H L, Jiang S F, et al. Screening of main pests insecticides in South Henan tea garden [J]. Tianjin Agricultural Sciences, 2014, 20(12): 94-98.

[5] 盧兆成, 趙海英, 喬利. 13種殺蟲劑防治茶尺蠖室內(nèi)藥效試驗(yàn)[J]. 農(nóng)藥科學(xué)與管理, 2012, 33(6): 46-50. Lu Z C, Zhao H Y, Qiao L. The laboratory test of thirteen in secticides againstWehrli [J]. Pesticide Science and Administration, 2012, 33(6): 46-50.

[6] 趙曉珍, 段長(zhǎng)流, 李冬雪, 等. 茶葉斑點(diǎn)病的藥劑篩選及田間防治技術(shù)初步研究[C]//中國植物保護(hù)學(xué)會(huì). 綠色生態(tài)可持續(xù)發(fā)展與植物保護(hù)——中國植物保護(hù)學(xué)會(huì)第十二次全國會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)年會(huì)論文集. 北京: 2017. Zhao X Z, Duan C L, Li D X, et al. Preliminary research on chemicals screening and field control of tea spot disease [C]//Chinese Society of Plant Protection. Sustainable Development of Green Ecology and Plant Protection: Proceedings of the 12th National Congress of the Chinese Society of Plant Protection. Beijing: 2017.

[7] 周曉東, 王潤龍, 黃亞輝, 等. 天王星（聯(lián)苯菊酯）在茶葉生產(chǎn)上的安全性試驗(yàn)[J]. 茶葉通訊, 2002(3): 24-25. Zhou X D, Wang R L, Huang Y H, et al. Safety test of uranus (bifenthrin) in tea production [J]. Journal of Tea Communication, 2002(3): 24-25.

[8] 張新忠, 羅逢健, 陳宗懋, 等. 分散固相萃取凈化超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法研究茶葉與茶湯中茚蟲威殘留降解規(guī)律[J]. 分析測(cè)試學(xué)報(bào), 2013, 32(1): 1-8. Zhang X Z, Luo F J, Chen Z M, et al. Study of indoxacarb residue degradation in tea and tea Infusion by ultra high performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry after dispersive solid phase extraction cleanup [J]. Journal of Instrumental Analysis, 2013, 32(1): 1-8.

[9] 錢承敬, 史曉梅, 謝云峰, 等. 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定茶葉茶湯中多種農(nóng)藥殘留量[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào), 2017, 8(8): 3218-3230. Qian C J, Shi X M, Xie Y F, et al. Determination of multi-pesticide residue in tea and tea infusion by gas chromatography-tandem mass spectrometry [J]. Journal of Food Safety & Quality, 2017, 8(8): 3218-3230.

[10] Wu C. Multiresidue method for the determination of pesticides in Oolong tea using QuEChERS by gas chromatography-triple quadrupole tandem mass spectrometry [J]. Food Chemistry, 2017, 229: 580-587.

[11] 王兵, 李斌, 張媛媛, 等. QuEChERS-高效液相色譜法測(cè)定綠茶中蟲螨腈殘留[J]. 中國食品學(xué)報(bào), 2017, 17(1): 240-245. Wang B, Li B, Zhang Y Y, et al. Determination of chlorfenapyr in green tea by QuEChERS-high-performance liquid chromatography [J]. Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology, 2017, 17(1): 240-245.

[12] 李瑋, 賈彥博, 林偉杰, 等. 分散固相萃取凈化-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定茶葉中7種殺螨殺蟲類農(nóng)藥殘留[J]. 食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào), 2017, 8(9): 3485-3490. Li W, Jia Y B, Lin W J, et al. Determination of 7 pesticides residues in tea by gas chromatography-mass spectrometry combined with dispersive solid phase extration [J]. Journal of Food Safety & Quality, 2017, 8(9): 3485-3490.

[13] Zhang X Z, Luo F J, Lou Z Y, et al. Simultaneous and enantioselective determination of-epoxiconazole and indoxacarb residues in various teas, tea infusion and soil samples by chiral high performance liquid chromatography coupled with tandem quadrupole-time-of-flight mass spectrometry [J]. Journal of Chromatography A, 2014, 1359: 212-223.

[14] 吳林, 吳曉波, 張承聰, 等. 固相萃取-氣相色譜法同時(shí)檢測(cè)茶葉中多種農(nóng)藥和多氯聯(lián)苯殘留[J]. 食品科學(xué), 2011, 32(14): 223-226. Wu L, Wu X B, Zhang C C, et al. Multiresidue determination of pesticides and polychlorinated biphenyls in tea by solid-phase extraction and gas chromatography [J]. Food Science, 2011, 32(14): 223-226.

[15] Song W H, Xie L P, Shao T F. Determination of 33 pesticides in tea by accelerated solvent extraction-gel permeation and solid-phase extraction purification-gas chromatography-mass spectrometry [J]. Chinese Journal of Chromatography, 2008, 26(1): 22-28.

[16] 徐敦明, 盧聲宇, 陳達(dá)捷, 等. 加速溶劑萃取-氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定茶葉中10種吡唑和吡咯類農(nóng)藥的殘留量[J]. 色譜, 2013, 31(3): 218-222. Xu D M, Lu S Y, Chen D J, et al. Determination of ten pesticides pyrazoles and pyrroles in tea by accelerated solvent extraction coupled with gas chromatography-tandem mass spectrometry [J]. Chinese Journal of Chromatography, 2013, 31(3): 218-222.

[17] 李軍明, 鐘讀波, 王亞琴, 等. 在線凝膠滲透色譜-氣相色譜/質(zhì)譜法檢測(cè)茶葉中的153種農(nóng)藥殘留[J]. 色譜, 2010, 28(9): 840-848. Li J M, Zhong D B, Wang Y Q, et al. Determination of 153 pesticides in tea using online gelpermeation chromatography-gas chromatography/mass spectrometry [J]. Chinese Journal of Chromatography, 2010, 28(9): 840-848.

[18] 唐吉旺, 王建秀, 袁列江, 等. 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定茶葉中24種農(nóng)藥殘留量[J]. 理化檢驗(yàn)(化學(xué)分冊(cè)), 2015, 51(11): 1557-1561. Tang J W, Wang J X, Yuan L J, et al. GC-MS/MS determination of residual amounts of 24 pesticides in tea [J]. Physical Testing and Chemical Analysis (Part B: Chemical Analysis), 2015, 51(11): 1557-1561.

[19] 周華, 張?zhí)N, 吳平谷, 等. 固相萃取-氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定茶葉中溴蟲腈和茚蟲威[J]. 衛(wèi)生研究, 2016, 45(5): 817-820. Zhou H , Zhang Y , Wu P G, et alDetermination of chlorfenapyr and indoxacarb in tea by gas chromatography-mass spectrometry with solid phase extraction [J]. Journal of Hygiene Research, 2016, 45(5): 817-820.

[20] 許欣欣, 王冰, 陳慧玲, 等. 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定茶葉中溴蟲腈、啶蟲脒和茚蟲威[J]. 預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志, 2017, 33(9): 901-904. Xu X X, Wang B, Chen H L, et al. Determination of chlorfenapyr, acetamiprid and indoxacarb in tea by gas chromatography/mass spectrometry [J]. Journal of Preventive Medicine Information, 2017, 33(9): 901-904.

[21] 姚銘棟. 固相萃取-氣相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定茶葉中49種農(nóng)藥殘留量[J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2014, 24(15): 2170-2173. Yao M D. Determination of 49 pesticides in tea by solid phase extraction-gas chromatography/tandem mass spectrometry [J]. Chinese Journal of Health Laboratory Technology, 2014, 24(15): 2170-2173.

[22] 王興寧, 蔡秋, 朱明, 等. 固相萃取凈化-氣相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定茶葉中54種農(nóng)藥殘留量[J]. 分析試驗(yàn)室, 2011, 30(11): 110-116. Wang X N, Cai Q, Zhu M, et al. Determination of 49 pesticide residues in tea using solid-phase extraction and gas chromatography-triple quadrupole mass spectrometry [J]. Chinese Journal of Analysis Laboratory, 2011, 30(11): 110-116.

[23] Tewary D K, Kumar V, Ravindranath S D, et alDissipation behavior of bifenthrin residues in tea and its brew [J]. Food Control, 2005, 16(3): 231-237.

[24] Hou X, Lei S, Guo L, et al. Optimization of a multi-residue method for 101 pesticides in green tea leaves using gas chromatography-tandem mass spectrometry [J]. Revista Brasileira de Farmacognosia, 2016; 26(4): 401-407.

[25] Rajski ?, Lozano A, Belmonte-Valles N, et al. Comparison of three multiresidue methods to analyse pesticides in green tea with liquid and gas chromatography/tandem mass spectrometry [J]. Analyst, 2013, 138(3): 921-931.

[26] Peng C F, Kuang H, Li X Q, et al. Evaluation and interlaboratory validation of a GC-MS method for analysis of pesticide residues in teas [J]. Chemical Papers, 2007, 61(1): 1-5.

[27] European Communities. Commission Decision 2002/657/EC of 12 August 2002 implementing Council Directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and the interpretation of results [S]. Official Journal of the European Communities, 2002: 8-36.

[28] 全國認(rèn)證認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可分技術(shù)委員會(huì). 合格評(píng)定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南: GB/T 27417—2017[S]. 北京: 中國標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2017. Subcommittee 1 on Laboratory Accreditation of National Technical Committee 261 on Certification and Accreditation of Standardization Administration of China. Comformity assessment—Guidance on validation and verification of chemical analytical methods: GB/T 27417—2017 [S]. Beijing: Standards Press of China, 2017.

[29] 張新忠, 羅逢健, 陳宗懋, 等. 超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定茶葉、茶湯和土壤中氟環(huán)唑、茚蟲威和苯醚甲環(huán)唑殘留[J]. 分析化學(xué), 2013, 41(2): 215-222. Zhang X Z, Luo F J, Chen Z M, et al. Residue determination of epoxiconazole, indoxacarb and difenoconazole in tea, tea infusion and soil using ultra high performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry [J]. Chinese Journal of Analytical Chemistry, 2013, 41(2): 215-222.

[30] Chen G, Cao P, Liu R. A multi-residue method for fast determination of pesticides in tea by ultra performance liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry combined with modified QuEChERS sample preparation procedure [J]. Food Chemistry, 2011, 125(4): 1406-1411.

[31] Díez C, Traag W A, Zommer P, et al. Comparison of an acetonitrile extraction/partitioning and “dispersive solid-phase extraction” method with classical multi-residue methods for the extraction of herbicide residues in barley samples [J]. Journal of Chromatography A, 2006, 1131(1/2): 11-23.

[32] Besil N, Cesio V, Heinzen H, et al. Matrix effects and interferences of different citrus fruits coextractives in pesticide residue analysis using ultra high-performance liquid chromatography—high-resolution mass spectrometry [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2017: 65(23): 4819-4829.

[33] 中華人民共和國國家衛(wèi)生健康委員會(huì). 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量: GB 2763—2019[S]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2019. National Health Commission of the People's Republic of China. National food safety standard—Maximum residue limits for pesticides in food: GB 2763—2019 [S]. Beijing: China Agriculture Press, 2019.

Determination of Pesticide Residue in Fresh Tea Leaves and Dry Tea by Solid Extraction and Dispersive Solid Extraction Cleanup Coupled with Tandem Mass Spectrum

YANG Jie1,2, ZHOU Li1*, YU Huan1,2, SUN Hezhi1, WANG Xinru1, ZHANG Xinzhong1, YANG Mei1, CHEN Zongmao1, LUO Fengjian1*

1. Research Center of Quality Safety for Agricultural Products, Tea Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences Hangzhou 310008, China; 2. Graduate School of Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China

A method for the determination of 9 pesticide residues in fresh and dry tea was established. Residual pesticides in samples were extracted by acetonitrile, purified by Florisil/GCB solid phase extraction column, followed by absorbent of PSA and GCB as dispersed solid phase, and determined by ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) and gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). In the spiked range of 0.005-1.000?mg·kg-1, the average recoveries of target pesticides in fresh leaves and dried tea were 70.3%-103.9%, and the relative standard deviations (RSD) were less than 20%. In the range of 0.005-2.000?mg·kg-1, the linear relationship of target pesticides in fresh leaves and dry tea matrix was good, with>0.995?4. The limit of quantity (LOQ) was 0.005?mg·kg-1. The test results of actual samples showed that the method was highly sensitive and reproducible, and can meet the requirements of multi-residue detection.

multi-residue of pesticides, UPLC-MS/MS, GC-MS, tea, solid phase extraction, dispersive solid-phase extraction

世界首個(gè)“國際茶日”

2020年5月21日，是聯(lián)合國確定的首個(gè)“國際茶日”。國家主席習(xí)近平向“國際茶日”系列活動(dòng)致信表示熱烈祝賀。

習(xí)近平指出，茶起源于中國，盛行于世界。聯(lián)合國設(shè)立“國際茶日”，體現(xiàn)了國際社會(huì)對(duì)茶葉價(jià)值的認(rèn)可與重視，對(duì)振興茶產(chǎn)業(yè)、弘揚(yáng)茶文化很有意義。作為茶葉生產(chǎn)和消費(fèi)大國，中國愿同各方一道，推動(dòng)全球茶產(chǎn)業(yè)持續(xù)健康發(fā)展，深化茶文化交融互鑒，讓更多的人知茶、愛茶，共品茶香茶韻，共享美好生活。

茶是世界三大飲品之一，全球產(chǎn)茶國和地區(qū)達(dá)60多個(gè)，飲茶人口超過20億。2019年12月，聯(lián)合國大會(huì)宣布將每年5月21日確定為“國際茶日”，以贊美茶葉的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)和文化價(jià)值，促進(jìn)全球農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。今年“國際茶日”期間，我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部與聯(lián)合國糧農(nóng)組織、浙江省政府以“茶和世界共品共享”為主題，通過網(wǎng)絡(luò)開展系列宣傳推廣活動(dòng)。

5月21日下午，中國茶葉學(xué)會(huì)在線舉辦了“美美與共”云茶會(huì)。云茶會(huì)邀請(qǐng)了廣大民眾在同一時(shí)間一同飲茶，多地聯(lián)動(dòng)，打破時(shí)間和空間束縛，以“名家、名茶、名匠、民族”為核心展示內(nèi)容。旨在分享茶健康知識(shí)，彰顯制茶人匠心，展示茶民俗文化，提振疫情后產(chǎn)業(yè)信心，推廣貧困地區(qū)茶品牌，帶動(dòng)茶農(nóng)增收致富，體現(xiàn)我國茶業(yè)總體風(fēng)貌，促進(jìn)中國與世界各國茶文化交融互鑒和全球農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展。

S571.1；S482

A

1000-369X(2020)03-397-10

2019-09-27

2020-01-04

國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃子課題（2016YFD0200207-2）、浙江省自然科學(xué)基金（LY18C16005）

楊潔，女，碩士研究生，主要從事茶園有害生物綜合治理研究。*通信作者：lizhou@tricaas.com，lfj@tricaas.com

投稿平臺(tái)：http://cykk.cbpt.cnki.net