劉長德，焦明遠(yuǎn)，高 超，張德懷，崔麗艷

(1.北京市回民醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100054；2.北京市通州區(qū)婦幼保健院檢驗(yàn)科，北京 101101；3.上?；壑性\斷技術(shù)有限公司，上海 200085；4.北京大學(xué)第三醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京100191)

新型冠狀病毒感染的肺炎(下稱新冠肺炎)作為急性呼吸道傳染病，已于2020年1月20日被國家衛(wèi)健委發(fā)布的2020年1號(hào)公告歸為《中華人民共和國傳染病防治法》規(guī)定的乙類傳染病，按甲類傳染病管理。

新型冠狀病毒屬于β屬的冠狀病毒[1-2]，該病毒有包膜，顆粒呈圓形或橢圓形，常為多形性，直徑60～140 nm，傳播途徑主要是呼吸道飛沫和接觸傳播[3]，但已有關(guān)于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員感染新冠病毒的報(bào)道，因此專家認(rèn)為新冠病毒也可通過氣溶膠傳染。

根據(jù)新冠肺炎診療方案，56 ℃加熱30 min可有效滅活新型冠狀病毒。因此，本研究收集北京市回民醫(yī)院門診和住院患者靜脈血標(biāo)本，分別檢測(cè)標(biāo)本滅活前和滅活后的生化指標(biāo)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，旨在評(píng)價(jià)滅活對(duì)生化檢測(cè)結(jié)果的影響，為今后在常規(guī)實(shí)驗(yàn)條件下通過加熱滅活病毒開展檢測(cè)提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2020年1月本院門診和住院患者35例，其中男20例，平均年齡58歲，女15例，平均年齡63歲。由臨床采用非可替真空采血管(批號(hào)D190735H)采集靜脈血3 mL，標(biāo)本無溶血、脂血。

1.2標(biāo)本處理和檢測(cè) 采集的靜脈血標(biāo)本經(jīng)1 200 g離心10 min分離血清，并將血清分成兩份。一份血清用于檢測(cè)38項(xiàng)生化指標(biāo)(滅活前組)，另一份血清放置于56 ℃溫箱孵育30 min后再進(jìn)行生化檢測(cè)(滅活后組)。生化檢測(cè)采用貝克曼全自動(dòng)生化分析儀5811，檢測(cè)項(xiàng)目包括離子、肝功能、腎功能、血脂、心肌酶譜等。

1.3結(jié)果評(píng)價(jià) 用兩種評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)判斷熱滅活是否對(duì)該檢測(cè)指標(biāo)有影響：(1)根據(jù)國家衛(wèi)生健康委員會(huì)臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，定義滅活前后檢測(cè)值最大允許偏差=1/3可接受范圍[4]，≥80.00%標(biāo)本滅活前后檢測(cè)值偏差小于最大允許偏差，判為熱滅活對(duì)該檢測(cè)指標(biāo)無影響。(2)對(duì)滅活前和滅活后的標(biāo)本檢測(cè)值進(jìn)行比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)時(shí)，判為熱滅活對(duì)該檢測(cè)指標(biāo)無影響。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果做描述性統(tǒng)計(jì)分析和相關(guān)性分析，連續(xù)變量通過正態(tài)性檢驗(yàn)后，組間比較采用參數(shù)檢驗(yàn)[4]。

2 結(jié) 果

2.1最大允許誤差評(píng)價(jià) 血清滅活前和滅活后各項(xiàng)生化項(xiàng)目結(jié)果偏差見表1和表2，平均偏差=(滅活后均值-滅活前均值)/滅活前均值×100.00%。

表1列出了新冠肺炎診療方案中要求檢測(cè)的生化項(xiàng)目，在標(biāo)本滅活前后檢測(cè)值平均偏差較大(超過±10.00%)，的項(xiàng)目有丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、肌酸激酶(CK)、堿性磷酸酶(ALP)，為整體降低的趨勢(shì)，其他項(xiàng)目平均偏差均在±5.00%之內(nèi)。滅活前后檢測(cè)值相對(duì)穩(wěn)定的項(xiàng)目是C-反應(yīng)蛋白(CRP)。用表中列出的最大允許誤差做評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，酶類標(biāo)志物均受滅活影響。

表2列出了其他生化項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果，二氧化碳總量(TCO2)檢測(cè)值在滅活前后平均偏差較大(超過±10.00%)且為整體降低趨勢(shì)，檢測(cè)值相對(duì)穩(wěn)定的項(xiàng)目有鉀(K)、鈉(Na)、氯(Cl)、葡萄糖(Glu)、尿素(Urea)、肌酐(Crea)、尿酸(UA)、血清總蛋白(TP)、清蛋白(ALB)、膽固醇(CHO)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、血清載脂蛋白A1(ApoA1)、Apo-B等。用表中列出的最大允許誤差做評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，受滅活影響的項(xiàng)目有TCO2、TP、ALB和總膽紅素(TBIL)。

綜合表1和表2，滅活前后，大部分檢測(cè)項(xiàng)目的平均偏差在±5.00%以內(nèi)，天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、血清球蛋白(GLO)、TBIL、間接膽紅素(IBIL)等項(xiàng)目平均偏差較小，但波動(dòng)較大。根據(jù)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(1)，酶類標(biāo)志物、TCO2、TP、ALB和TBIL受滅活影響。

表1 新冠肺炎相關(guān)生化指標(biāo)滅活前后檢測(cè)值偏差

表2 其他生化指標(biāo)滅活前后檢測(cè)值偏差

注：-表示無數(shù)據(jù)。

2.2相關(guān)性分析和配對(duì)標(biāo)本t檢驗(yàn)評(píng)價(jià) 對(duì)新冠肺炎相關(guān)的8項(xiàng)生化指標(biāo)做相關(guān)性分析，這8項(xiàng)指標(biāo)在標(biāo)本滅活前和滅活后檢測(cè)值的相關(guān)系數(shù)的P值均小于0.05，說明存在相關(guān)關(guān)系。相關(guān)系數(shù)全部大于0，說明滅活前和滅活后的測(cè)值均呈正相關(guān)關(guān)系。滅活前后CK測(cè)值的相關(guān)系數(shù)為0.499，為低度相關(guān)；滅活前后ALP測(cè)值的相關(guān)系數(shù)為0.730，為中度相關(guān)；其余6項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)的相關(guān)系數(shù)均接近1，為高度相關(guān)。

對(duì)這8項(xiàng)生化指標(biāo)做正態(tài)性檢驗(yàn)，證實(shí)滅活前組和滅活后組檢測(cè)值符合正態(tài)分布，因此做配對(duì)標(biāo)本t檢驗(yàn)(H0：均值相等，H1：均值不等)，結(jié)果見表3。AST、LDH和CRP的P值大于0.05，說明滅活前和滅活后檢測(cè)值的均值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，可以認(rèn)為這3項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)值在滅活前后是一致的。ALT、GGT、CK、ALP和CHE的P值均小于0.05，說明滅活前和滅活后的檢測(cè)值的均值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與滅活前相比，分別平均下降了16.76%、2.53%、56.77%、34.39%和7.31%。

對(duì)本次檢測(cè)的其他生化指標(biāo)做相關(guān)性檢驗(yàn)，標(biāo)本滅活前和滅活后檢測(cè)值的相關(guān)系數(shù)的P值均等于0.00，說明存在相關(guān)關(guān)系。相關(guān)系數(shù)均大于0.80，接近1，說明滅活前和滅活后的測(cè)值呈高度正相關(guān)關(guān)系。對(duì)這些指標(biāo)做正態(tài)性檢驗(yàn)，證實(shí)滅活前組和滅活后組檢測(cè)值符合正態(tài)分布，因此做配對(duì)標(biāo)本t檢驗(yàn)(H0：均值相等，H1：均值不等)，最大/最小測(cè)值偏差超過±10.00%的9項(xiàng)指標(biāo)配對(duì)標(biāo)本t檢驗(yàn)結(jié)果見表4，DBIL和CG的P值均大于0.05，說明滅活前和滅活后檢測(cè)值的均值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，可以認(rèn)為這兩項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)值在滅活前后是一致的；其余7項(xiàng)指標(biāo)的P值均小于0.05，說明滅活前和滅活后檢測(cè)值的均值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與滅活前相比，滅活后TCO2、GLO、TBIL、IBIL、HDL、PA和β2-MG分別平均下降了11.09%、2.55%、4.08%、4.89%、6.16%、2.08%和3.65%。最大/最小檢測(cè)值偏差在±10.00%以內(nèi)的指標(biāo)滅活前后的檢測(cè)值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表3 滅活前后新冠肺炎相關(guān)生化指標(biāo)檢測(cè)值配對(duì)標(biāo)本t檢驗(yàn)結(jié)果

注：滅活前后均值的差值=滅活前檢測(cè)值均值-滅活后檢測(cè)值均值。

表4 滅活前后最大/最小檢測(cè)值偏差超過±10.00%的生化指標(biāo)配對(duì)t檢驗(yàn)結(jié)果

注：滅活前后均值的差值=滅活前檢測(cè)值均值-滅活后檢測(cè)值均值。

2.3兩者綜合評(píng)價(jià) 綜合評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(1)和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(2)，血清滅活對(duì)16項(xiàng)生化指標(biāo)有影響，它們是ALT、AST、LDH、GGT、CK、ALP、CHE、TCO2、TP、ALB、GLO、TBIL、IBIL、HDL、PA和β2-MG，對(duì)其余22項(xiàng)生化指標(biāo)無影響。

3 討 論

氣溶膠傳播是指飛沫(大小為0.001～100.000 μm)懸浮在空氣中，吸入后造成的傳播。新冠肺炎患者的血液標(biāo)本暴露在空氣里可能形成氣溶膠。因此，氣溶膠傳播可能成為檢驗(yàn)科感染新冠病毒的最大風(fēng)險(xiǎn)因素。

56 ℃加熱30 min可有效滅活新型冠狀病毒。本研究涵蓋檢驗(yàn)科大部分生化檢測(cè)項(xiàng)目，采用相同熱滅活方式處理標(biāo)本，證實(shí)血清滅活對(duì)22項(xiàng)生化指標(biāo)無影響，對(duì)ALT、GGT、CK、ALP、CHE、TCO2等16項(xiàng)生化指標(biāo)有影響，與國內(nèi)外的研究報(bào)道基本一致[4-7]。酶類項(xiàng)目滅活后的檢測(cè)值顯著低于滅活前，這是因?yàn)?6 ℃加熱30 min處理影響了酶的活性；TCO2受滅活影響顯著是因?yàn)榧訜崾沟醚逯械亩趸紒G失所致，另外TCO2也易受標(biāo)本采集后到上機(jī)檢測(cè)的時(shí)間長短的影響；其他受影響的項(xiàng)目可能是由于加熱引起被檢物變性所致。對(duì)于受影響的項(xiàng)目，建議參照該項(xiàng)目的平均偏差，對(duì)結(jié)果進(jìn)行校正，以便減少偏差。

4 結(jié) 論

血清標(biāo)本56 ℃加熱30 min處理對(duì)22項(xiàng)生化指標(biāo)無影響，16項(xiàng)指標(biāo)受到影響。受滅活影響的指標(biāo)，在臨床應(yīng)用前，應(yīng)進(jìn)行必要的校正，以減小偏差。該方法簡單易行、無需昂貴的設(shè)備，是防止新型冠狀病毒氣溶膠感染風(fēng)險(xiǎn)的有效措施。本文存在的不足之處是標(biāo)本量較少，且入組標(biāo)本檢測(cè)值過于集中，因此結(jié)論僅供參考，建議有條件的實(shí)驗(yàn)室收集更多標(biāo)本評(píng)估加熱滅活對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)的影響，以制訂合適的標(biāo)本處理方式，降低實(shí)驗(yàn)室人員醫(yī)源性感染的風(fēng)險(xiǎn)。