劉學(xué)　邱紅燕　彭靜　劉春艷　曲書(shū)閱　馬瑩　許乾麗　沈祥春　陶玲　茅向軍

中圖分類號(hào) R286 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2020）05-0595-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.05.18

摘 要 目的：完善和提高咳清膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：根據(jù)2015年版《中國(guó)藥典》（四部）通則0502法對(duì)咳清膠囊中吉祥草、桑白皮進(jìn)行薄層色譜（TLC）鑒別[展開(kāi)劑分別為二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（10 ∶ 4 ∶ 0.2，V/V/V）、乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液（12 ∶ 2 ∶ 1，V/V/V）];采用高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測(cè)定咳清膠囊中嗎啡、磷酸可待因的含量[色譜柱為XBridge C18，流動(dòng)相為乙腈-0.01 mol/L磷酸二氫鉀水溶液（以5%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH至2.7）（5 ∶ 95，V/V），流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm，柱溫為35 ℃，進(jìn)樣量為10 ?L]。結(jié)果：在吉祥草、桑白皮供試品TLC圖譜中，與對(duì)照藥材圖譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性對(duì)照無(wú)干擾。嗎啡、磷酸可待因檢測(cè)進(jìn)樣量的線性范圍分別為0.301 56～2.110 90、0.064 93～0.454 52 ?g（r=0.999 9、0.999 9），檢測(cè)限分別為0.000 10、0.001 28 ?g，定量限分別為0.000 34、0.042 5 ?g，精密度、穩(wěn)定性（12 h）、重復(fù)性、耐用性試驗(yàn)的RSD均小于3%（n=6），平均加樣回收率分別為96.18%、95.95%（RSD=1.78%、2.07%，n=6）。18批咳清膠囊樣品中嗎啡、磷酸可待因的含量范圍分別為0.97～1.37、0.16～0.37 mg/g。結(jié)論：本研究建立了咳清膠囊吉祥草、桑白皮的TLC鑒別方法以及嗎啡、磷酸可待因的HPLC含量測(cè)定方法，操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確可靠、專屬性強(qiáng)，提升和完善了該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞 咳清膠囊;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);嗎啡;磷酸可待因;薄層色譜法;高效液相色譜法

Study on the Improvement of Quality Standard for Keqing Capsules

LIU Xue1，QIU Hongyan2，PENG Jing1，LIU Chunyan3，QU Shuyue3，MA Ying2，XU Qianli1，2，SHEN Xiangchun1，TAO Ling1，MAO Xiangjun1，2（1.Guizhou Provincial Engineering Center for High Efficacy Application of Natural Medicinal Resources/Key Laboratory of Natural Medicinal Pharmacology and Druggability Evaluation in Guizhou University/Guizhou Medical University-Guiyang City Joint Key Laboratory/Key Laboratory of Optimal Utilization of Natural Medicine Resources， School of Pharmacy， Guizhou Medical University， Guiyang 550025， China;2.Guizhou Provincial Food and Drug Inspection Institute， Guiyang 550004， China;3.School of Pharmacy， Guizhou University of TCM， Guiyang 550025， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To optimize and improve the quality standard for Keqing capsules. METHODS： According to general rule 0502 method stated in 2015 edition of Chinese Pharmacopeia （part Ⅳ）， TLC method was used to identify Reineckia carnea and Morus alba in Keqing capsules [the developing solvents were dichloromethane-ethyl acetate-formic acid （10 ∶ 4 ∶ 0.2， V/V/V） and ethyl acetate-carbinol-ammonia （12 ∶ 2 ∶ 1， V/V/V）， respectively]. The contents of morphine and codeine phosphate in Keqing capsules were determined by HPLC. The determination was performed on XBridge C18 column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.01 mol/L potassium dihydrogen phosphate aqueous solution （pH value adjusted to 2.7 with 5% phosphoric acid solution） （5 ∶ 95， V/V） at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 210 nm，and the column temperature was 35 ℃. The sample size was 10 ?L. RESULTS： In TLC of R. carnea and M. alba in samples， same color spots were shown in the corresponding positions of reference substance chromatogram without interference from negative control. The linear range of morphine and codeine phosphate were? ? ? 0.301 56-2.110 90 and 0.064 93-0.454 52 ?g （r=0.999 9，0.999 9），respectively. The detection limits were 0.000 10， 0.001 28 μg， respectively. The limits of quantitation were 0.000 34， 0.042 5 μg， respectively. RSDs of precision，reproducibility （12 h）， stability and durability tests were lower than 3% （n=6）. The average recoveries were 96.18% and 95.95% （RSD=1.78%，2.07%，n=6），respectively. The content ranges of morphine and codeine phosphate in 18 batches of Keqing capsules were 0.97-1.37，0.16-0.37 mg/g，respectively. CONCLUSIONS： TLC identification method for R. carnea and M. alba， as well as HPLC content determination method for morphine and codeine phosphate in Keqing capsules are established; the method is simple， accurate and reliable with strong specificity， which improves the quality standard of Keqing capsules.

KEYWORDS? ?Keqing capsules; Quality standard; Morphine; Codeine phosphate; TLC; HPLC

咳清膠囊是貴州特色苗藥品種之一，由吉祥草、罌粟殼、矮地茶、虎耳草、枇杷葉和桑白皮6味藥材組成，具有潤(rùn)肺平喘、止咳化痰的功效，主要用于治療感冒及慢性支氣管炎引起的咳嗽[1]。該制劑處方中的罌粟殼屬于麻醉藥品管制品種，其含有的嗎啡和磷酸可待因作為其主要活性成分，在臨床上常用于鎮(zhèn)痛、止咳等[2-3]，這2種成分也是咳清膠囊治療感冒、咳嗽、氣喘等癥的主要有效成分。但二者同時(shí)也是強(qiáng)成癮性成分[4-5]，若對(duì)其用量控制不當(dāng)，不僅久服易成癮，還會(huì)對(duì)人體神經(jīng)系統(tǒng)造成損害，甚至有可能造成慢性中毒[6]。所以，為了確保該制劑的安全性及有效性，必須嚴(yán)格控制以上2種成分的含量。

目前，有關(guān)咳清膠囊質(zhì)量控制方面的研究報(bào)道較少，僅有席曉嵐等[7]采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定了咳清膠囊中磷酸可待因的含量。在咳清膠囊的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-10201（ZD-0201）-2002-2012Z]中，也僅涉及罌粟殼、枇杷葉2味藥材的薄層色譜（TLC）定性鑒別和罌粟殼中磷酸可待因一個(gè)成分的HPLC定量分析[1]，難以全面評(píng)價(jià)該制劑的質(zhì)量安全。并且，按該質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定方法操作，供試品前處理過(guò)程繁瑣，易導(dǎo)致平行樣偏差大，結(jié)果不易判定。鑒于此，本課題組按照國(guó)家藥典委員會(huì)2017年度國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)提高工作（中藥）任務(wù)書(shū)（No.462）有關(guān)要求，采用TLC法對(duì)咳清膠囊中吉祥草、桑白皮進(jìn)行定性鑒別研究，并通過(guò)簡(jiǎn)化供試品前處理方式及優(yōu)化色譜條件，建立HPLC法同時(shí)測(cè)定其中嗎啡和磷酸可待因的含量，使該制劑質(zhì)量可控性更強(qiáng)、檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)更加全面和完善，以提高其現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 材料

1.1 儀器

e2695型HPLC儀（美國(guó)Waters公司）;HH-6型電熱恒溫水浴鍋（北京科偉永興儀器有限公司）;ZF-7型三用紫外分析儀（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）;MS105DU型電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司];5804型臺(tái)式高速離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf公司）;薄層硅膠G板（青島海洋化工有限公司）;KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;UPW-UP-10型純水儀（成都天莘寧科技有限公司）。

1.2 藥品與試劑

18批咳清膠囊（貴州百靈企業(yè)集團(tuán)和仁堂藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20171106、20171107、20171202、20171204、20171205、20180102、20180301、20180501、20180502、20180602、20180603、20180604、20180605、20180608、20180609、20180610、20181107、20181204，規(guī)格：每粒裝0.35 g）;吉祥草對(duì)照藥材（批號(hào)：121314-201603）、桑白皮對(duì)照藥材（批號(hào)：121124-201608）、嗎啡對(duì)照品（批號(hào)：171201-201325，純度：93.6%）、磷酸可待因?qū)φ掌罚ㄅ?hào)：171201-201325，純度：96.9%）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC鑒別

2.1.1 吉祥草的TLC鑒別

取本品內(nèi)容物8 g，加70%乙醇50 mL，水浴加熱回流1.5 h，放冷，濾過(guò);濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL微熱溶解，移至錐形瓶中，再加鹽酸8 mL，水浴加熱回流2.5 h，放冷，濾過(guò);濾液用三氯甲烷分3次提取，每次30 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取吉祥草對(duì)照藥材2 g和缺吉祥草陰性空白膠囊內(nèi)容物（本課題組按咳清膠囊處方和工藝自制）8 g，同法制備吉祥草對(duì)照藥材溶液和缺吉祥草陰性樣品對(duì)照溶液。按照2015年版《中國(guó)藥典》（四部）通則0502法[8]進(jìn)行試驗(yàn)：吸取上述3種溶液各10 ?L，點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（10 ∶ 4 ∶ 0.2，V/V/V）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置于紫外光燈（波長(zhǎng)為365 nm）下檢視。結(jié)果，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且陰性對(duì)照無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.1.2 桑白皮的TLC鑒別

取本品內(nèi)容物10 g，加飽和碳酸鈉溶液40 mL，超聲（功率為300 W，頻率為40 kHz）處理30 min，以10 000? ?r/min離心5 min，濾過(guò);濾液加鹽酸調(diào)節(jié)pH至1～2，靜置30 min，濾過(guò);濾液用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取桑白皮對(duì)照藥材1 g和缺桑白皮陰性空白制劑內(nèi)容物（本課題組按咳清膠囊處方和工藝自制）10 g，同法制備桑白皮對(duì)照藥材溶液和缺桑白皮陰性對(duì)照溶液。按照2015年版《中國(guó)藥典》（四部）通則0502法[8]進(jìn)行試驗(yàn)：吸取上述3種溶液各5 ?L，點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液（12 ∶ 2 ∶ 1，V/V/V）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置于紫外光燈（波長(zhǎng)為365 nm）下檢視。結(jié)果，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且陰性對(duì)照無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖2。

2.2 嗎啡和磷酸可待因的含量測(cè)定

2.2.1 溶液的制備

（1）混合對(duì)照品溶液：精密稱取嗎啡對(duì)照品25 mg，置于25 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得質(zhì)量濃度為1 mg/mL的嗎啡對(duì)照品貯備液;精密稱取磷酸可待因?qū)φ掌?0 mg，置于25 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得質(zhì)量濃度為0.4 mg/mL的磷酸可待因?qū)φ掌焚A備液。精密量取嗎啡對(duì)照品貯備液2 mL和磷酸可待因?qū)φ掌焚A備液1 mL，置于同一25 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，制得嗎啡質(zhì)量濃度為80 μg/mL、磷酸可待因質(zhì)量濃度為16 μg/mL的混合對(duì)照品溶液。