龍 莉 黃琳蕓 黃瑞松

廣西國際壯醫(yī)醫(yī)院,廣西 南寧 530219

瑤語所稱“凍你美”或“巴腩美”，民間也稱為“母豬藤”，俗名紅凍你美、母豬菜、五葉藤、止血藤等。植物來源為葡萄科植物烏蘞莓Cayratiajaponica(Thunb.) Gagnep.，廣西金秀、恭城瑤族民間多以全草作為藥材使用?，庒t(yī)認為，凍你美味酸、苦，性寒；屬風藥，具有清熱利濕、解毒消腫、活血止血、利尿的作用，主要用于治療肺癰、肺癆咯血、尿路感染、血尿、尿濁、黃疸肝炎、痛癥、無名腫毒、腮腺炎及風濕骨痛、痢疾、跌打損傷、骨折、癰腫瘡癤、無名腫毒、乳癰[1～2]。近年來研究表明，凍你美含黃酮類、內(nèi)脂類、香豆素類和咖啡酸類等多種成分[3]。但有關(guān)其生藥鑒別的方法目前未見有報道，給臨床用藥造成一定的混亂。為科學辨別瑤藥凍你美藥材的真?zhèn)?，確保其臨床用藥的安全有效，本研究對瑤凍你美進行了藥材生藥學方面的研究，建立了該藥材性狀、顯微和薄層鑒別的方法，為該藥材質(zhì)量標準的制訂提供了技術(shù)支撐。

1 材料與儀器

1.1 材料 樣品采自南寧市武鳴區(qū)、靖西市城區(qū)等地區(qū)，樣品信息表見表1。所用樣品經(jīng)我院黃瑞松主任藥師、廣西中醫(yī)藥大學韋松基教授、廣西中醫(yī)藥研究院黃云峰副研究員鑒定，為葡萄科植物烏蘞莓Cayratiajaponica(Thunb.) Gagnep.

表1 12批凍你美樣品采集信息

1.2 儀器 徠卡切片機(德國)、搖擺式粉碎機(浙江)、尼康高級生物顯微鏡及視頻成像裝置(日本)、數(shù)控超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)、紫外分析攝影儀(武漢藥科新技術(shù)開發(fā)有限公司)。

1.3 試劑 稀甘油(廣東光華科技股份有限公司)、水合氯醛(天津市大茂化學試劑廠)、無水乙醇(國藥集團化學試劑有限公司)、二甲苯(國藥集團化學試劑有限公司)、石蠟(國藥集團化學試劑有限公司)、藏紅T(國藥集團化學試劑有限公司)、固綠(國藥集團化學試劑有限公司)、中性樹膠(中國上海標本模型廠)，薄層所用化學試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀鑒別 通過看、摸、聞、嘗及水試、火試的直觀方法觀察藥材的形狀、大小、色澤、表面、質(zhì)地、氣、味等特征。通過對11批藥材進行觀察，藥材性狀為根圓柱形，扭曲，直徑可達2～3 cm，表面棕褐色至黑褐色，有縱皺紋，質(zhì)疏松，易折斷，斷面淺白色至黃白色。莖圓柱形，有縱棱紋，綠色至黃綠色，有分支，質(zhì)輕脆易折斷，折斷面髓部明顯，類白色，海綿狀或中空。卷須二岐分叉，與葉對生。葉皺縮易碎，深綠色或黃綠色，完整者展平后呈鳥足狀5小葉，中央小葉長橢圓形或橢圓披針形，長2.5～4.5 cm，寬1.5～4.5 cm，側(cè)生小葉橢圓形或長橢圓形，長1～7 cm，寬0.5～3.5 cm，邊緣具疏鋸齒；葉柄長1.5～10 cm，中央小葉柄長0.5～2.5 cm，側(cè)生小葉無柄或有短柄，側(cè)生小葉總柄長0.5～1.5 cm。氣微清香，味淡。見圖1。

圖1 凍你美藥材圖

2.2 顯微鑒別 選取具代表性根、莖、葉，用FAA固定液固定24 h。取出進行軟化處理，脫水，浸蠟，切片，染色和封固備用。將全株藥材打成粉末，取適量藥材粉碎過五號篩后按粉末制片法制作粉片，所有制片置于Ni-U尼康高級生物顯微鏡及視頻成像裝置觀察并拍攝成像。

2.2.1 根橫切面 呈不規(guī)則棱形，木栓層細胞數(shù)列，扁方形，有的已經(jīng)脫落。栓內(nèi)層窄，細胞類圓形，在棱角處有的有2～3個異型維管束分布。外韌型維管束環(huán)狀，韌皮部較寬，韌皮射線呈喇叭狀延伸至皮層，韌皮薄壁細胞與韌皮纖維相間排列。束間形成層明顯。木質(zhì)部較寬，導管單個或幾個相連放射狀分布，直徑30～200 μm，木射線細胞4～20余列。含草酸鈣針晶束的黏液細胞廣泛分布于皮層、韌皮部及射線組織中。見圖2。

圖2 凍你美根橫切面顯微圖1.木栓層 2.栓內(nèi)層 3.韌皮部 4. 韌皮纖維 5.木質(zhì)部 6.射線 7.黏液細胞

2.2.2 莖橫切面 呈六棱狀或不規(guī)則多棱形，表皮細胞1列，方圓形。皮層窄，棱角處有厚角組織分布，有的薄壁細胞內(nèi)有棕黃色分泌物。外韌型維管束數(shù)個排列成環(huán)，維管束上方有大小不一的纖維束環(huán)狀排列；韌皮部較寬，韌皮薄壁細胞內(nèi)有的有棕黃色分泌物；木質(zhì)部由木薄壁細胞、導管和木纖維組成，導管單個或幾個相連放射狀分布，直徑20～180 μm，射線細胞3～10余列。髓部較寬，細胞類圓形。本品有的薄壁細胞內(nèi)存在草酸鈣簇晶，直徑12～21 μm，黏液細胞含草酸鈣針晶束，廣泛分布于皮層、髓部及射線組織中。見圖3。

圖3 凍你美莖橫切面顯微圖1. 表皮 2.中柱鞘纖維 3.皮層 4.黏液細胞 5.厚角組織 6.韌皮部 7.木質(zhì)部 8.非腺毛 9.髓部 10.射線

2.2.3 葉橫切面 上下表皮細胞1列，長方形或方圓形，上、下表皮均有非腺毛；柵欄組織細胞1列，不通過主脈。主脈維管束1～7個，上方單個的維管束較小，外韌型，木質(zhì)部導管幾個相連放射狀排列，韌皮部較窄。中脈上下有2～3列厚角組織細胞。上表皮中脈尖凸，下表皮中脈凸出。中脈周圍及葉肉組織內(nèi)有含草酸鈣針晶束的黏液細胞散在。見圖4。

圖4 凍你美葉橫切面顯微圖1.非腺毛 2.上表皮 3.柵欄組織 4.海綿組織 5.黏液細胞 6.木質(zhì)部 7.韌皮部 8.下表皮

2.2.4 粉末鑒別 粉末灰綠色。纖維成束或分離，先端圓鈍或折斷，纖維壁較薄，直徑15～25 μm。非腺毛由2～10余個細胞組成，稍彎曲，壁薄，長12～395 μm，直徑18～33 μm。草酸鈣針晶束較多，成束散在或存在于黏液細胞內(nèi)，針晶長 80～160 μm；草酸鈣簇晶散在或存在于薄壁細胞內(nèi)，直徑6～65 μm。導管為具緣紋孔導管和螺紋導管，直徑30～120 μm。見圖5。

圖5 凍你美粉末顯微圖1.非腺毛 2.草酸鈣針晶 3.纖維 4.草酸鈣簇晶 5.導管

2.3 薄層鑒別 取11批本品樣品粉末各0.5 g，加50%乙醇10 ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加95%乙醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取凍你美對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部0502)試驗，吸取供試品溶液0.5～2 μL，對照藥材溶液2 μL分別點于同一聚酰胺薄層板上，以冰醋酸-水(5∶5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，熱風吹干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主熒光斑點。見圖6。

圖6 12批凍你美TLC色譜圖1.對照藥材 2-12.凍你美 A:黃色熒光斑點

3 討論

凍你美在是廣西瑤族民間常用藥材。為了確保該藥材臨床用藥的安全有效，有必要建立藥材質(zhì)量標準。本實驗對凍你美進行生藥學鑒別研究。所建立的性狀、顯微、薄層鑒別方法操作簡便易行，實驗結(jié)果穩(wěn)定可靠，專屬性和重現(xiàn)性好，可作瑤藥凍你美鑒別真?zhèn)蔚囊罁?jù)。

通過以上實驗結(jié)果表明，藥材性狀鑒別點為卷須二歧分叉，與葉對生；葉皺縮，展平后為鳥足狀復(fù)葉，小葉5。顯微鑒別點為根、莖、葉的黏液細胞含草酸鈣針晶，莖薄壁細胞存在草酸鈣簇晶。粉末呈灰綠色。有非腺毛，草酸鈣針晶束較多，成束散在,或于黏液細胞內(nèi)；草酸鈣簇晶散在或存在于薄壁細胞內(nèi)。陸大忠[4]、李曉晨[5]、郭琰[6]、王太霞[7]分別對烏蘞莓莖、葉進行顯微鑒別，肖文[8]對烏蘞莓根、莖進行顯微鑒定研究，實驗結(jié)果均表明烏蘞莓根、莖、葉黏液細胞含有草酸鈣針晶。本研究發(fā)現(xiàn)凍你美根、莖、葉黏液細胞含有草酸鈣針晶，與文獻報道一致。陳慧濃[9]曾報道烏蘞莓含黃酮類成分。本研究首次對烏蘞莓黃酮類成分進行薄層鑒別。薄層鑒別中，11批藥材與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主熒光斑點。實驗結(jié)果穩(wěn)定可靠，專屬性好，可作為其薄層鑒別的依據(jù)。