任 瑩 王 虎 韓 雙

安徽省太和縣中醫(yī)院，安徽 太和 236600

金英消食口服液是太和縣中醫(yī)院臨床應(yīng)用多年的特色院內(nèi)制劑，主要由雞內(nèi)金、麩炒白術(shù)、焦神曲、焦山楂、焦麥芽、姜半夏、蒲公英、陳皮、茯苓九藥味組成。功能健胃醒脾、消食化滯，主要用于脾虛食滯所致的腹脹、納呆、厭食、腹瀉、小兒疳積。金英消食口服液作為質(zhì)優(yōu)價(jià)廉且臨床應(yīng)用多年的醫(yī)院傳統(tǒng)中藥制劑，亟需建立完善的質(zhì)量控制及評(píng)價(jià)方法，以保障制劑質(zhì)量，為其進(jìn)一步在臨床推廣應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)通過高效液相色譜法建立金英消食口服液的指紋圖譜和橙皮苷的含量測(cè)定方法，并制定橙皮苷的含量限度。

1 儀器與材料

UltiMate3000高效液相色譜儀(DAD檢測(cè)器，賽默飛世爾科技有限公司)； XP205DR型十萬(wàn)分之一分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；KQ-500DE超聲波清洗儀(昆山超聲儀器有限公司)，萬(wàn)能粉碎機(jī)(上海賀帆儀器有限公司)。

對(duì)照品橙皮苷(批號(hào)：110721-201617，含量以96.1%計(jì))購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；乙腈、甲醇，均為色譜純，美國(guó)天地公司；磷酸，分析純，天津北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠；哇哈哈純凈水

金英消食口服液為太和縣中醫(yī)院中藥制劑室生產(chǎn)，批號(hào)分別為20160511、20160513、20160515、20180510、20180606、20180720、20180731、20180808、20180818、20180821、20181005、20181007、20190104、20190117、20190306、20190430、20190726、20190810、20190906。缺味陰性樣品均由中藥制劑室自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 取橙皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，置容量瓶中，加甲醇-0.1%磷酸溶液(1∶1)，制成濃度為每1 mL含10 μg的溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備 取金英消食口服液樣品，精密量取1 mL，置于10 mL的容量瓶中，加甲醇定容至刻度，混勻，取上清液5 mL置于20 mL的容量瓶中以甲醇-0.1%磷酸(1∶1)溶液定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 金英消食口服液缺陳皮溶液的制備 按金英消食口服液的制備工藝制得缺陳皮的陰性樣品，按“2.1.2”項(xiàng)下的制備方法制備缺陳皮陰性供試液。

2.2 色譜條件 UltiMate3000高效液相色譜儀，依利特Hypersil ODS2色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙腈-0.1%磷酸水溶液(20∶80,V/V)為流動(dòng)相，流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)283 nm。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性考察 按“2.2”色譜條件，分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、缺味陰性對(duì)照溶液，依次注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果顯示，各陰性對(duì)照均無(wú)干擾(如圖1所示)，說明該方法專屬性較好。

C圖1 對(duì)照品(A)、金英消食口服液供試品(B)、缺陳皮對(duì)照(C)HPLC圖

2.3.2 線性關(guān)系考察 將制備的濃度為11.12 μg/mL的對(duì)照品溶液，分別精密進(jìn)樣1、2、5、10、15、20 μL，記錄色譜圖及峰面積。以橙皮苷的量(μg)為縱坐標(biāo)(Y)，峰面積為橫坐標(biāo)(X)，進(jìn)行回歸分析，得回歸方程：Y=0.03021X-5.114×10-4；r=0.9999。結(jié)果表明，橙皮苷在為0.01112～0.2224μg的范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。見表1、圖2。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果

圖2 線性關(guān)系考察

2.3.3 精密度試驗(yàn) 取濃度為11.12 μg/mL的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，橙皮苷的平均峰面積是1.857，RSD為0.1%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取金英消食口服液(批號(hào)：20160511)6份，按照“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試液，分別進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果6次的峰面積平均值為1.731，RSD為0.3%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品(批號(hào)：20160511)溶液，在配制后0、2、5、8、10、12、24h分別進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果橙皮苷峰面積平均值為1.714，RSD為0.6%(n=6)，表明供試液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密移取已知含量為0.4144 mg/mL的金英消食口服液(批號(hào)：20160511)6份，每份0.5 mL，分別精密加入濃度為0.0556 mg/mL的橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液4 mL。按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試液，分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算回收率，平均回收率為99.9%(RSD=0.8%,n=6)，可見此方法測(cè)定橙皮苷回收率較高，準(zhǔn)確度較高。結(jié)果見表2。

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.4 含量限度考察 通過投料前對(duì)陳皮藥材中橙皮苷含量測(cè)定，及生產(chǎn)的成品中橙皮苷的含量比較，計(jì)算得到該工藝橙皮苷的轉(zhuǎn)移率。結(jié)果見表3。

表3 轉(zhuǎn)移率計(jì)算結(jié)果

結(jié)果表明，批號(hào)為20160511、20160513、20160515三批金英消食口服液中橙皮苷的含量為0.410～0.411 mg/mL，生產(chǎn)原料陳皮(批號(hào)：16030102)中橙皮苷的含量為2.95%～2.98%，制成制劑后相當(dāng)于每mL含橙皮苷為1.97～1.99mg，最低轉(zhuǎn)移率為20.7%。批號(hào)為20161228、20161229、20161230三批金英消食口服液中橙皮苷的含量為0.650～0.686 mg/mL，生產(chǎn)原料陳皮(批號(hào)：16090205)中橙皮苷的含量為3.80%～3.81%，制成制劑后相當(dāng)于每mL含橙皮苷為2.53～2.54 mg，最低轉(zhuǎn)移率為25.6%。根據(jù)中國(guó)藥典2015年版一部規(guī)定：陳皮飲片中橙皮苷的含量不得少于2.5%，按最低轉(zhuǎn)移率為20.7%計(jì)算，制成制劑后相當(dāng)于每mL不得少于0.35 mg，故擬定該制劑每mL含橙皮苷不低于0.35 mg。

2.5 指紋圖譜的建立[1-4]取16批金英消食口服液樣品，分別按照“2.1.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜數(shù)據(jù)，將數(shù)據(jù)導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件(2012)”，以S1為參照，采用平均數(shù)法，時(shí)間寬度為0.6，多點(diǎn)校正，自動(dòng)匹配，生成對(duì)照?qǐng)D譜，確定13個(gè)共有峰，并計(jì)算相似度。16批金英消食口服液疊加圖譜及對(duì)照?qǐng)D譜見圖3。相似度結(jié)果均大于0.9，結(jié)果見表4?？梢姴煌蔚慕鹩⑾晨诜簶悠分g具有較好的相似性，建立的對(duì)照?qǐng)D譜特征性較強(qiáng)。

圖3 16批金英消食口服液指紋圖譜及其對(duì)照指紋圖譜

表4 相似度分析結(jié)果

3 討論

醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑尤其是中藥制劑品種是我國(guó)新藥的來源，如三九胃泰、復(fù)方丹參滴丸、大青葉注射液、地龍注射液等都是醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑轉(zhuǎn)化成新藥的產(chǎn)物。新藥的研制在醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑基礎(chǔ)上，經(jīng)過長(zhǎng)期臨床療效驗(yàn)證，可以有效縮短研發(fā)投入和時(shí)間，提高研發(fā)注冊(cè)成功率。將特色優(yōu)秀的醫(yī)療制劑轉(zhuǎn)化為新藥，可提高我國(guó)新藥研發(fā)質(zhì)量和水平，促進(jìn)醫(yī)藥領(lǐng)域健康發(fā)展。

金英消食口服液處方系太和縣中醫(yī)院名老中醫(yī)遵照中醫(yī)理論，結(jié)合多年臨床經(jīng)驗(yàn)，治療功能性消化不良證屬脾虛食滯所擬定的方劑，臨床應(yīng)用多年，療效顯著(尤其是用于小兒疳積)。金英消食口服液中雞內(nèi)金[5-6]、焦神曲[7-8]、焦麥[9-10]芽現(xiàn)代研究中尚未有特異的指標(biāo)性成分；焦山楂[11-12]、姜半夏[13-14]、麩炒白術(shù)[15]、蒲公英[16]、茯苓[17]雖然在中國(guó)藥典及文獻(xiàn)中有以氨基酸、有機(jī)酸等為對(duì)照品的薄層鑒別，但這些成分在動(dòng)植物中廣泛存在，在復(fù)方制劑的質(zhì)控方面專屬性不佳，實(shí)際運(yùn)用較少。故利用常規(guī)的薄層鑒別方法對(duì)該制劑進(jìn)行定性研究存在較大困難。定量分析方面，上述藥味在藥典中均無(wú)含量控制的指標(biāo)性成分，只有陳皮規(guī)定了含量測(cè)定的指標(biāo)即橙皮苷。

有效控制中藥的質(zhì)量，是保證中醫(yī)臨床療效的前提。2016年國(guó)務(wù)院印發(fā)《中醫(yī)藥發(fā)展戰(zhàn)略規(guī)劃綱要(2016-2030)》，提出“推進(jìn)實(shí)施中藥標(biāo)準(zhǔn)化行動(dòng)計(jì)劃，構(gòu)建中藥產(chǎn)業(yè)全鏈條的優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)體系”。指紋圖譜技術(shù)是目前國(guó)際上公認(rèn)的天然藥物質(zhì)量控制的有效方式之一，突破了長(zhǎng)期以來以單一指標(biāo)或幾個(gè)化學(xué)成分評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量的限制，可以全面反映中藥所含的化學(xué)成分的種類和數(shù)量。本實(shí)驗(yàn)研究建立金英消食口服液的指紋圖譜，并測(cè)定橙皮苷的含量，方法特征性強(qiáng)、專屬性好、穩(wěn)定可靠，可用于金英消食口服液的質(zhì)量控制并納入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為金英消食口服液的質(zhì)量控制提供更全面可靠的依據(jù)，進(jìn)而保證制劑質(zhì)量，確保臨床療效。實(shí)驗(yàn)建立了金英消食口服液的指紋圖譜，并確定了13個(gè)共有峰，為該制劑進(jìn)一步的物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供參考。