李發(fā)珍，謝 童，范彥英，楊彩紅

（山西醫(yī)科大學(xué)藥理學(xué)教研室，山西 太原 030001）

異羥肟酸類化合物是一類金屬離子螯合劑，其分子結(jié)構(gòu)中具有含孤對(duì)電子的氧和氮，并且位置相互靠近，使其能與金屬離子螯合生成穩(wěn)定的螯合物［1］。這種特殊結(jié)構(gòu)，使其在醫(yī)藥、溶劑萃取和廢水處理等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。醫(yī)藥領(lǐng)域中，異羥肟酸類組蛋白去乙?；敢种苿┛梢种平M蛋白去乙?；富钚?，提高對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，是目前抗癌藥物研究的熱點(diǎn)之一［2］。同時(shí)，異羥肟酸類組蛋白去乙?；敢种苿┡c其他藥物合用可協(xié)同增加療效［3］，但并未增加其副作用，有望成為臨床治療癌癥的新方向。乙酰異羥肟酸（acetohydroxamic acid，AHA）部分化學(xué)結(jié)構(gòu)與尿素相似，能競(jìng)爭(zhēng)性地與尿素酶中的鎳原子形成螯合物，抑制尿素酶活性，從而抑制尿素的分解，減少尿氨的形成，降低尿液pH值，防止尿結(jié)石的形成。且AHA具有弱酸性和抗菌活性［4］，不僅能防止尿結(jié)石的形成，而且還能預(yù)防尿路感染，故在臨床上常常用于治療尿結(jié)石及尿道感染［5］。本課題組在研究異羥肟酸類化合物抗腫瘤作用時(shí)發(fā)現(xiàn)，AHA具有降低血壓的作用，且動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明其毒性很小［6］，故本研究采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探究AHA對(duì)大鼠血壓和胸主動(dòng)脈血管形態(tài)的影響，采用離體實(shí)驗(yàn)探究AHA對(duì)大鼠離體胸主動(dòng)脈血管的作用及機(jī)制，為尋找一種新的高效低毒的降壓藥物提供思路。

1 材料與方法

1.1 藥物、試劑和儀器

AHA（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）。去甲腎上腺素（norepinephrine，NE）、苯腎上腺素（phenylephrine，PE）、乙酰膽堿（acetylcholine，ACh）、一氧化氮合酶抑制劑左旋硝基精氨酸甲酯（N-nitro-L-arginine methyl ester，L-NAME）、環(huán)氧合酶抑制劑吲哚美辛（indometacin，Indo）、鈣敏感性鉀通道（KCa）抑制劑溴化四乙胺（tetrathylammo?nium，TEA）、電壓依賴性鉀通道（Kv）抑制劑4-氨基吡啶（4-aminopyridine，4-AP）、內(nèi)向整流型鉀通道（KIR）抑制劑BaCl2和ATP敏感性鉀通道抑制劑格列苯脲（glibenclamide，Gli）（美國(guó)Sigma公司）；HE染色試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）；生理鹽溶液（physiological saline solution，PSS）成分（mmol·L-1：NaCl 144，KCl 5.8，CaCl22.5，MgCl21.2，葡萄糖11.1，HEPES 5）；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。動(dòng)物無(wú)創(chuàng)血壓儀、八通道離體組織器官恒溫灌流系統(tǒng)及HSS-1B數(shù)字式超級(jí)恒溫浴鍋（成都泰盟科技有限公司）；Power Lab生物信號(hào)采集分析系統(tǒng)及張力記錄儀（澳大利亞埃德公司）；雷磁pH計(jì)（上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司）；電子天平（奧豪斯國(guó)際貿(mào)易有限公司）；微量進(jìn)樣器（上海求精生化試劑儀器有限公司）；光學(xué)顯微鏡（日本Nikon公司）。

1.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

1.2.1 動(dòng)物分組和血壓監(jiān)測(cè)

18只SPF級(jí)雄性SD大鼠，體質(zhì)量250～300 g（山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心），許可證號(hào)為SCXK（晉）2009-0001。動(dòng)物飼養(yǎng)條件為室溫20～24℃，濕度45%～60%，自由攝食及飲水。SD大鼠隨機(jī)分為3組：正常對(duì)照組（ip生理鹽水）、AHA 50和100 mg·kg-1組。每5 d ip給予AHA 1次，共5次。分別在給藥前1 d、給藥第13天和第26天使用無(wú)創(chuàng)血壓計(jì)測(cè)收縮壓（systolic blood pressure，SBP）和舒張壓（diastolic blood pressure，DBP）。每只大鼠每次測(cè)6組數(shù)據(jù)，取平均值。

1.2.2 HE染色觀察大鼠胸主動(dòng)脈組織形態(tài)

測(cè)完最后1次血壓，戊巴比妥鈉（50 mg·kg-1）ip麻醉后迅速取出并分離大鼠胸主動(dòng)脈。制備胸主動(dòng)脈石蠟切片并置55℃烘箱中30 min，按二甲苯Ⅰ10 min、二甲苯Ⅱ10 min、無(wú)水乙醇Ⅰ5 min、無(wú)水乙醇Ⅱ5 min、95%乙醇5 min和70%乙醇5 min進(jìn)行脫蠟處理，蘇木素染色5 min，流水稍沖洗掉染液。1%鹽酸乙醇分化數(shù)秒，置蒸餾水中15 min，0.5%伊紅染色液染色1 min，蒸餾水稍沖，然后依次70%乙醇30 s、95%乙醇30 s、無(wú)水乙醇Ⅰ30 s、無(wú)水乙醇Ⅱ30 s、二甲苯Ⅰ2 min和二甲苯Ⅱ2 min，中性樹膠封片，顯微鏡觀察血管組織形態(tài)變化。

1.3 離體實(shí)驗(yàn)

1.3.1 大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)制備及基礎(chǔ)狀態(tài)下大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)張力測(cè)定［7］

將SD大鼠處死后，迅速取出胸主動(dòng)脈，置充有純氧的4℃PSS中，將其周圍結(jié)締組織去除，剪為3～4 mm長(zhǎng)的血管環(huán)為內(nèi)皮完整血管環(huán)，采用自制棉棒來(lái)回輕輕摩擦2次可得去內(nèi)皮血管環(huán)。將血管環(huán)通過(guò)一個(gè)三角形掛鉤和一個(gè)L形細(xì)鋼絲相連，水平懸掛于10 mL恒溫浴槽內(nèi)，下方固定，上方通過(guò)細(xì)鋼絲與張力換能器相連，用Power Lab數(shù)據(jù)采集分析系統(tǒng)檢測(cè)血管環(huán)張力變化。恒溫浴槽內(nèi)持續(xù)通入100%O2，加5 mL PSS，并保持溫度在36.8～37.2℃。主動(dòng)脈血管環(huán)懸掛在恒溫浴槽后，調(diào)節(jié)前負(fù)荷為2 g，平衡60 min，期間每隔15 min換PSS 1次。KCl（60 mmol·L-1）重復(fù)刺激2次，2次KCl收縮幅度差值＜10%證明血管活性良好。PE（1 μmol·L-1）收縮達(dá)穩(wěn)態(tài)時(shí)加ACh（10μmol·L-1），若胸主動(dòng)脈舒張程度＞80%，說(shuō)明內(nèi)皮完整性良好，為內(nèi)皮完整組。若其舒張程度＜10%，則認(rèn)為內(nèi)皮去除完全，為去內(nèi)皮組［8］。

基礎(chǔ)狀態(tài)（無(wú)NE和KCl預(yù)收縮）大鼠胸主動(dòng)脈血管環(huán)，用PSS平衡1 h后加累積濃度的AHA（0.1，1，3，10，30和100 μmol·L-1）；正常對(duì)照組加等體積生理鹽水，觀察血管張力變化。

1.3.2 NE和KCl預(yù)收縮狀態(tài)下內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮的大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)張力的測(cè)定

血管穩(wěn)定后，內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮的大鼠胸主動(dòng)脈血管環(huán)用NE（1 μmol·L-1）或KCl（60 mmol·L-1）預(yù)收縮，穩(wěn)定后，實(shí)驗(yàn)組每10 min累積加AHA（0.1，1，3，10，30和100 μmol·L-1），正常對(duì)照組加等體積生理鹽水，計(jì)算舒張血管百分比。舒張血管百分比（%）=（NE或KCI誘發(fā)的血管環(huán)最大收縮張力-給AHA后血管環(huán)張力）/（NE或KCI誘發(fā)的血管環(huán)最大收縮張力-血管環(huán)基礎(chǔ)張力）×100%。

1.3.3 經(jīng)L-NAME、Indo預(yù)處理和NE預(yù)收縮的大鼠離體胸主動(dòng)脈內(nèi)皮完整血管環(huán)張力的測(cè)定

待大鼠離體胸主動(dòng)脈內(nèi)皮完整血管環(huán)平衡穩(wěn)定后，分為正常對(duì)照組、AHA組、AHA+L-NAME組和AHA+Indo組。AHA+L-NAME組和AHA+Indo組分別加入L-NAME（0.1 mmol·L-1）或Indo（0.01 mmol·L-1），AHA組加入等體積的生理鹽水，孵育30 min后，加NE（1 μmol·L-1）預(yù)收縮，血管收縮穩(wěn)定后，AHA組、AHA+L-NAME組和AHA+Indo組均累積加入AHA（0.1，1，3，10，30和100 μmol·L-1），正常對(duì)照組依次加入等體積的生理鹽水。計(jì)算累積濃度AHA舒張血管百分比，計(jì)算方法同1.3.2。

1.3.4 經(jīng)鉀通道阻滯劑預(yù)處理和NE預(yù)收縮的大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)張力的測(cè)定

采用內(nèi)皮完整的血管環(huán)，PSS平衡穩(wěn)定后，實(shí)驗(yàn)組分別加4-AP（1 mmol·L-1）、Gli（0.01 mmol·L-1）、TEA（1 mmol·L-1）和BaCl2（0.1 mmol·L-1），AHA組加等體積生理鹽水，孵育30 min，之后同1.3.3測(cè)定，求得各組累積濃度AHA舒張血管百分比，計(jì)算方法同1.3.2。

1.3.5 AHA預(yù)處理無(wú)鈣生理鹽溶液中經(jīng)NE預(yù)收縮大鼠離體胸主動(dòng)脈內(nèi)皮完整血管環(huán)張力的測(cè)定［9-10］

待大鼠離體胸主動(dòng)脈內(nèi)皮完整血管環(huán)穩(wěn)定后，用含鈣離子鰲合劑乙二醇雙（2-氨基乙基醚）四乙酸（ethylenebis oxyethylenenitrilo tetraacetic acid，EGTA）的無(wú)鈣PSS預(yù)孵20 min，以此絡(luò)合細(xì)胞外鈣，使細(xì)胞外液達(dá)到一種無(wú)鈣的理想狀態(tài)，將浴液更換為無(wú)鈣不含EGTA的PSS，排除EGTA對(duì)復(fù)鈣后血管收縮反應(yīng)的影響。10 min后，更換為含NE（1 μmol·L-1）無(wú)鈣PSS 5 mL預(yù)孵10 min后，實(shí)驗(yàn)分為AHA 1，10和100 μmol·L-1組，分別加入不同濃度的AHA，正常對(duì)照組加入等體積生理鹽水，預(yù)孵30 min后加入累積濃度的CaCl2（0.1，0.3，1，3和10 mmol·L-1），觀察不同濃度AHA對(duì)外鈣內(nèi)流引起大鼠離體胸主動(dòng)脈內(nèi)皮完整血管環(huán)收縮的影響。以正常對(duì)照組累積加入CaCl2后引起的收縮張力最大值為100%，血管收縮張力百分比（%）=（正常對(duì)照組CaCl2誘發(fā)的血管環(huán)最大收縮張力-預(yù)孵AHA后血管環(huán)張力）/（正常對(duì)照組CaCl2誘發(fā)的血管環(huán)最大收縮張力-血管環(huán)基礎(chǔ)張力）×100%。

1.3.6 AHA對(duì)無(wú)鈣生理鹽溶液中經(jīng)NE預(yù)收縮由內(nèi)鈣釋放引起大鼠離體胸主動(dòng)脈內(nèi)皮完整血管環(huán)收縮張力的測(cè)定

待大鼠離體胸主動(dòng)脈內(nèi)皮完整血管環(huán)穩(wěn)定后，用無(wú)鈣含EGTA的PSS預(yù)孵20 min后，將浴液換成無(wú)鈣不含EGTA的PSS；10 min后，實(shí)驗(yàn)組分別加入AHA（1，10 和100 μmol·L-1），正常對(duì)照組加入等體積的生理鹽水；孵育30 min后，加入NE（1 μmol·L-1），觀察不同濃度AHA對(duì)內(nèi)鈣釋放引起大鼠離體胸主動(dòng)脈內(nèi)皮完整血管環(huán)收縮的影響。血管收縮張力（g）=正常對(duì)照組NE誘發(fā)的血管環(huán)最大收縮張力-預(yù)孵AHA后NE誘發(fā)的血管環(huán)最大收縮張力。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 AHA對(duì)大鼠血壓的影響

給藥第13天，正常對(duì)照組、AHA50和100mg·kg-1組的SBP分別為18.6±0.3，17.5±0.2和（16.6±0.3）kPa，DBP分別為15.7±0.4，14.7±0.5和（13.9±0.3）kPa；給藥第26天，正常對(duì)照組、AHA 50和100 mg·kg-1組的SBP分別為18.4±0.4，16.4±0.2和（16.3±0.3）kPa；DBP分別為15.4±0.6，13.7±0.5和（12.7±0.4）kPa（圖1）。隨著給藥時(shí)間的推移，正常SD大鼠SBP和DBP均顯著下降（P＜0.01），提示AHA可降低正常SD大鼠血壓。

2.2 AHA對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈組織形態(tài)的影響

HE染色發(fā)現(xiàn)，正常對(duì)照組和AHA組大鼠胸主動(dòng)脈組織形態(tài)無(wú)明顯改變，中膜無(wú)增厚，各層彈力纖維排列整齊，無(wú)明顯紊亂現(xiàn)象（圖2）。

2.3 AHA對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下大鼠離體胸主動(dòng)脈內(nèi)皮完整血管環(huán)張力的影響

累積濃度AHA 0.1，1，3，10，30和100 μmol·L-1對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)張力無(wú)明顯的收縮和舒張作用（圖3）。

2.4 AHA對(duì)NE和KCl預(yù)收縮狀態(tài)下內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)張力的影響

Fig.1 Effectofacetohydroxamicacid（AHA） on blood pressure of SD rats.SD rats were randomly divided into 3 groups：normal control group（ip equal volume of normal saline），AHA 50 and 100 mg·kg-1group.The drug was adminis?tered once every 5 days for a total of 5 times，and the systolic and diastolic blood pressure（SBP and DBP）of the rats were measured with a non-invasive sphygmomanometer on the day before，the 13thand the 26thday of administration.±s，n=6.＊＊P＜0.01，compared with normal control group.

由圖4所示，累積濃度AHA 0.1，1，3，10，30和100 μmol·L-1對(duì)NE（1 μmol·L-1）預(yù)收縮狀態(tài)下內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)均具有濃度依賴性的舒張作用（r=0.988，P＜0.01），最大累積濃度AHA對(duì)內(nèi)皮完整組及去內(nèi)皮胸主動(dòng)脈血管環(huán)的舒張率分別為（55.2±2.9）%和（31.4±1.4）%（P＜0.01，圖4E）。正常對(duì)照組內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮胸主動(dòng)脈血管張力無(wú)顯著差異。累積濃度AHA對(duì)KCl預(yù)收縮狀態(tài)下內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)張力無(wú)明顯收縮和舒張作用（圖4F）。

2.5 AHA對(duì)經(jīng)L-NAME和Indo預(yù)處理及NE預(yù)收縮大鼠離體胸主動(dòng)脈內(nèi)皮完整血管環(huán)舒張作用的影響

NE（1 μmol·L--1）預(yù)收縮下，AHA+L-NAME組和AHA+Indo組最大累積濃度AHA舒張率分別為（33.2±2.7）%和（31.2±3.8）%，單給AHA最大累積濃度舒張率為（55.2±2.9）%。L-NAME和Indo明顯減弱AHA的舒血管作用（P＜0.01，圖5）。

2.6 AHA對(duì)經(jīng)鉀通道阻滯劑預(yù)處理和NE預(yù)收縮的大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)張力的影響

Fig.2 Effect of AHA on morphology of thoracic aorta of rats by HE staining.See Fig.1 for the rat treatment.

Fig.3 Effect of AHA on basic tension of rats thoracic aorta.The experimental group was added with a cumulative concentration of AHA，while the normal control group was added with an equal volume of normal saline to observe changes in vascular tone.A and B were the original records of vascular tension in normal control group and AHA group；C was the data statistics chart.±s，n=6.

Fig.4 Effect of AHA on tension of endothelium-intact(End+)and de-endothelialized(End-)isolated thoracic aorta precontracted with norepinephrine(NE)1 μmol·L-1or KCl 60 mmol·L-1of rats.When the rat thoracic aortic ring with End+and End-was pre-contracted with NE(1 μmol·L-1)and KCl(60 mmol·L-1)for 10 min,AHA(0.1,1,3,10,30 and 100 μmol·L-1)and sa?line were cumulatively added into organ bath.Relaxation rate(%)=(the maximal tension induced by NE or KCl-vascular tension after AHA)/(the maximal tension induced by NE or KCl-vascular basal tension)×100%.±s,n=6. ＊＊P＜0.01,compared with normal control group;##P＜0.01 compared with corresponding End+group.

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明（圖6），特異性鈣敏感性鉀通道（KCa）抑制劑TEA和內(nèi)向整流型鉀通道（KIR）抑制劑BaCl2可抑制NE（1 μmol·L-1）預(yù)收縮下AHA的舒血管作用，且最大累積濃度AHA的舒張率分別為（25.2±1.8）%和（34.3±3.2）%（P＜0.01）；而ATP敏感性鉀通道（KATP）抑制劑Gli和電壓依賴性鉀通道（KV）抑制劑4-AP無(wú)此作用，提示AHA對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈血管環(huán)的舒張作用可能與KCa和KIR的開放有關(guān)，而與KATP和KV無(wú)關(guān)。

2.7 AHA對(duì)經(jīng)NE預(yù)收縮由細(xì)胞外鈣內(nèi)流引起大鼠離體胸主動(dòng)脈內(nèi)皮完整血管環(huán)收縮作用的影響

在含NE（1 μmol·L-1）無(wú)鈣PSS中累積加CaCl20.1，0.3，1，3和10 mmol·L-1，得CaCl2量效曲線。預(yù)先分別孵育AHA 1，10和100 μmol·L-1，可濃度依賴性地減弱CaCl2對(duì)血管的收縮效應(yīng)，并使CaCl2收縮作用量效曲線右移，且正常對(duì)照組與AHA 1，10 和 100 μmol·L-1的-lgEC50分別為 4.03，2.61，2.51和2.12，與正常對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，圖7）。

Fig.5 Effect of AHA on relaxation rate of isolated End+thoracic aorta rings pretreated with NG-nitro-L-arginine methyl ester（L-NAME）and indomethacin（Indo）and then precontracted with NE.Thoracic aorta rings were incubated with L-NAME（0.1 mmol·L-1），Indo（0.01 mmol·L-1）and propranolol for 30 min，then precontracted by NE 1 μmol·L-1.AHA（0.1，1，3，10，30 and 100 μmol·L-1）was cumulatively added into the organ bath.x ± s，n=6. ＊＊P＜0.01，compared with normal control group；##P＜0.01，compared with AHA group.

2.8 AHA對(duì)經(jīng)NE預(yù)收縮由內(nèi)鈣釋放引起大鼠離體胸主動(dòng)脈內(nèi)皮完整血管環(huán)收縮作用的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示（圖8），預(yù)先用EGTA處理20 min后，在無(wú)鈣PSS中分別用AHA（1，10和100 μmol·L-1）孵育血管環(huán)30 min后，與正常對(duì)照組相比，AHA可濃度依賴性地抑制由內(nèi)鈣釋放引起的血管收縮，其血管收縮張力分別是0.34±0.06，0.22±0.03和（0.12±0.03）g，與正常對(duì)照組（0.61±0.06）g相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，圖8E）。

Fig.6 Effect of AHA relaxation rate of isolated End+thoracic aorta rings pretreated with barium chloride（BaCl2），tetra?ethylammonium（TEA），glibenclamide（Gli）and 4-aminopyridine（4-AP）and then precontracted with NE.The End+thoracic rings were incubated with 4-AP 1 mmol·L-1，Gli 0.01 mmol·L-1，TEA 1 mmol·L-1and BaCl20.1 mmol·L-1for 30 min，then precontracted by NE 1 μmol·L-1.±s，n=6.＊＊P＜0.01，compared with the normal control group；##P＜0.01，compared with AHA group.

Fig.7 Effect of AHA on contraction of isolated End+thoracic aorta rings precontracted with NE.Different concentra?tions of AHA（1，10，and 100 μmol·L-1）groups were added to the experimental group，and cumulative concentrations of CaCl2（0.1，0.3，1，3 and 10 mmol·L-1）were added after pre-incubation for 30 min.±s，n=6.＊＊P＜0.01，compared with normal control group；#P＜0.05，##P＜0.01，compared with AHA（1 μmol·L-1）group；△△P＜0.01，compared with AHA（10 μmol·L-1）group.

Fig.8 Effect of AHA on contraction of isolated End+thoracic aorta rings induced by release of intracellular calcium under NE precontraction in rats.After pre-incubation with each concentration of AHA and inhibition of vasoconstriction caused by the release of internal calcium in a concentration-dependent manner.±s，n=6.＊＊P＜0.01，compared with normal control group；##P＜0.01，compared with AHA（1 μmol·L-1）group；△△P＜0.01，compared with AHA（10 μmol·L-1）group.

3 討論

本研究動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，使用AHA后，對(duì)胸主動(dòng)脈的組織形態(tài)無(wú)明顯影響，同時(shí)還產(chǎn)生降低正常大鼠血壓的作用。離體血管環(huán)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，AHA對(duì)NE預(yù)收縮內(nèi)皮完整組的胸主動(dòng)脈血管環(huán)有劑量依賴性的舒張作用，而對(duì)KCl預(yù)收縮的血管環(huán)未能產(chǎn)生舒張作用；在去除內(nèi)皮后，AHA也有舒張胸主動(dòng)脈血管環(huán)的作用，但舒張作用明顯減弱，表明AHA舒張血管的作用部分依賴于血管內(nèi)皮。

在孵育L-NAME和Indo后發(fā)現(xiàn)，AHA對(duì)血管的舒張作用明顯減弱，而L-NAME和Indo分別是一氧化氮合酶和環(huán)氧合酶的抑制劑，能抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞NO和PGI2的合成。NO和PGI2是2類由內(nèi)皮細(xì)胞釋放的血管舒張因子，在調(diào)節(jié)血管的收縮和舒張中發(fā)揮重要作用［11］。NO主要通過(guò)影響環(huán)鳥苷酸（cyclic guanosine monophosphate，cGMP）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，進(jìn)而舒張血管，說(shuō)明AHA可能是通過(guò)NO-cGMP途徑舒張血管。而PGI2則是通過(guò)激活腺苷酸環(huán)化酶，使ATP轉(zhuǎn)變成環(huán)腺苷酸（cyclic adenosine mono?phosphate，cAMP），抑制細(xì)胞鈣離子的內(nèi)流，從而產(chǎn)生舒張血管的作用［12］，說(shuō)明AHA還有可能通過(guò)PGI2-cAMP途徑來(lái)舒張血管。

血管收縮和舒張活動(dòng)除與NO與PGI2有關(guān)外，還與鉀通道活性密切相關(guān)，鉀通道活性的改變可引起血管平滑肌細(xì)胞膜電位興奮性的改變，從而調(diào)節(jié)血管的收縮和舒張［13］。血管平滑肌細(xì)胞膜上有多種鉀離子通道，其中主要包括 KV，KCa，KIR和 KATP通道［14］。本研究使用多個(gè)鉀通道抑制劑TEA（KCa通道抑制劑）、Gli（KATP通道抑制劑）、BaCl2（KIR通道抑制劑）及4-AP（KV通道抑制劑）后發(fā)現(xiàn)，TEA和BaCl2能減弱NE預(yù)收縮下AHA的舒張血管作用，而Gli和4-AP無(wú)明顯作用，表明AHA的舒張血管作用可能與血管平滑肌細(xì)胞上的KCa和KIR通道有關(guān)。

鈣離子在血管收縮和舒張調(diào)節(jié)過(guò)程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用［15］。血管平滑肌收縮所需要的鈣離子主要來(lái)自于細(xì)胞外鈣內(nèi)流和細(xì)胞內(nèi)鈣庫(kù)釋放。外鈣內(nèi)流和內(nèi)鈣釋放主要由鈣離子通道介導(dǎo)，影響鈣離子通道的開放和關(guān)閉則影響血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，從而調(diào)節(jié)血管平滑肌的收縮和舒張。鈣離子通道主要包括電壓依賴性鈣通道和受體依賴性鈣離子通道［16］。以往的研究表明，雖然NE和KCl的血管收縮機(jī)制都是引起血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度升高，但其具體的機(jī)制不同。NE主要是激活血管上的α受體，進(jìn)而引起受體依賴性鈣離子通道開放，導(dǎo)致鈣離子內(nèi)流，并激活三磷酸肌醇，引起肌漿網(wǎng)內(nèi)鈣離子釋放，從而引起血管平滑肌的收縮［17］。而KCl主要是引起血管平滑肌細(xì)胞超極化，開放細(xì)胞膜上的電壓依賴性鈣通道，促進(jìn)細(xì)胞外鈣內(nèi)流，從而引起血管平滑肌的收縮［18］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，AHA能濃度依賴性地舒張NE預(yù)收縮的血管環(huán)，但不舒張KCl預(yù)收縮的血管環(huán)，說(shuō)明AHA的舒張血管的作用可能與血管平滑肌細(xì)胞膜上的電壓依賴性鈣通道無(wú)關(guān)，而可能與抑制血管平滑肌細(xì)胞肌漿網(wǎng)內(nèi)鈣離子釋放和受體依賴性鈣通道開放有關(guān)。本研究中，AHA能顯著抑制無(wú)鈣PSS中NE誘導(dǎo)的血管收縮，并使CaCl2收縮曲線右移，進(jìn)一步表明AHA可能是通過(guò)抑制血管平滑肌細(xì)胞的內(nèi)鈣釋放和外鈣內(nèi)流發(fā)揮舒張血管作用。

綜上所述，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，AHA在降低正常大鼠血壓的同時(shí)，對(duì)血管組織形態(tài)學(xué)無(wú)明顯影響。離體實(shí)驗(yàn)表明，AHA對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)和KCl預(yù)收縮的大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)張力無(wú)明顯影響，但對(duì)NE預(yù)收縮內(nèi)皮完整的大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)具有濃度依賴性的舒張作用，且舒張作用部分依賴于內(nèi)皮且可能與NO-cGMP途徑和PGI2-cAMP通路有關(guān)。AHA舒張血管除與上述機(jī)制有關(guān)外，還與KIR通道、KCa通道、內(nèi)鈣釋放和外鈣內(nèi)流相關(guān)。本研究?jī)H為AHA擴(kuò)張大鼠血管降低血壓作用的初步探索，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)尚有不足，如作為臨床降血壓研發(fā)新藥還需結(jié)合臨床給藥劑量，針對(duì)實(shí)驗(yàn)分組及其給藥方式、給藥頻率等做詳細(xì)合理設(shè)計(jì)，通過(guò)檢測(cè)血藥濃度進(jìn)一步評(píng)價(jià)藥物的降壓作用。