李 京，徐 群*，呂紅娟，周 娜，潘英芳，宋永紅

（山東省血液中心血型參比研究室，山東 濟(jì)南 250014）

隨著輸血事業(yè)的發(fā)展，各輸血實(shí)驗(yàn)室的儀器設(shè)備更加標(biāo)準(zhǔn)化，方法也更加敏感，不規(guī)則抗體陽性和正反定型不符樣本檢出率大大提高，只有準(zhǔn)確地鑒定血型和抗體特異性，并有針對性的輸血，才能提高輸血治療效果。本室常年開展新生兒溶血病、疑難血型鑒定和疑難配血等紅細(xì)胞血型和血型抗體檢測，積累了豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)，同時也收集了一些常見和部分罕見的有臨床意義的不規(guī)則抗體陽性和正反定型不符樣本。通過整理，擬建立一個不規(guī)則抗體陽性和稀有血型樣本庫，供大家觀摩、模擬和練習(xí)，從而能盡快提高實(shí)驗(yàn)者的操作技能。報告如下。

1 資料與方法

1.1 樣本

部分來自臨床送檢患者，部分來自本中心獻(xiàn)血員。

1.2 試劑和儀器

抗A、抗B、抗AB、抗H、抗A1、抗D（IgM、IgG、IgM+IgG）、IgM型抗C、抗c、抗E、抗e、抗M、抗N、抗P1、抗Lea、抗Leb抗 Jka、抗Jkb、IgG型抗Fya、抗Fyb、A1細(xì)胞、A2細(xì)胞、A2B細(xì)胞、B細(xì)胞、O細(xì)胞、篩選細(xì)胞、譜細(xì)胞、抗球蛋白（IgG、IgG+C3d、C3d）、凝聚胺、微柱凝膠卡分別來自上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司、Sanquin公司Diamed公司。離心機(jī)選用 KUBOTA公司的KA-2200型和HITACHI公司的himac MC450 Blood cell washing Centrifuge。

1.3 方法

均采用試管法和微柱凝膠方法。

1.3.1 ABO血型

首先用抗A、抗B、抗AB血清、A1細(xì)胞、B細(xì)胞做正反定型，如發(fā)現(xiàn)不符，則用抗A1、抗H血清、A2細(xì)胞、A2B細(xì)胞檢測是否具有亞型特點(diǎn)，同時用抗A或抗B血清對紅細(xì)胞做吸收放散實(shí)驗(yàn)，以證實(shí)紅細(xì)胞上是否具有較弱A或B抗原，用O型紅細(xì)胞檢測血清中是否存在IgM型不規(guī)則抗體，并放置室溫、4°C、37°C，比較不同溫度下的反應(yīng)情況，或選擇不同廠家的試劑進(jìn)行比較，如果條件允許，可以做唾液血型物質(zhì)檢測。

1.3.2 RH血型

首先用IgM抗D血清和紅細(xì)胞在鹽水介質(zhì)中檢測，如結(jié)果為陰性，再用IgG抗D或IgM+IgG抗D采用抗球蛋白方法檢測,以排除弱D或部分D血型。RH表現(xiàn)型選用IgM型C、c、E、e、抗血清和紅細(xì)胞，在室溫和37°C鹽水介質(zhì)中檢測。

1.3.3 其他血型

M、N、S、P1、Lea、Leb、Jka、Jkb抗原均采用鹽水試管法，s、Fya、Fyb抗原均采用抗球蛋白法。

1.3.4 直接抗球蛋白試驗(yàn)

用IgG+C3d、IgG、C3d試劑檢測，其中IgG+C3d采用試管和微柱凝膠法，IgG、C3d均采用試管法。

1.3.5 不規(guī)則抗體篩選

用國內(nèi)和國外一套或兩套篩選細(xì)胞（每套3個細(xì)胞），采用鹽水、抗球蛋白（試管、微柱凝膠）、凝聚胺等方法，并做自身對照。

1.3.6 不規(guī)則抗體鑒定

選用國內(nèi)和國外一套或兩套譜細(xì)胞（每套10～16個細(xì)胞），按3.5的方法，同時做針對性抗原檢測，以證實(shí)抗體鑒定的準(zhǔn)確性。

1.3.7 抗體效價

根據(jù)不同抗體特異性，選用鹽水、抗球蛋白等方法在室溫、4°C、37°C進(jìn)行檢測。

1.3.8 交叉配血

首先根據(jù)抗體特異性，選用鹽水、抗球蛋白等方法，篩選沒有針對抗體特異性抗原的紅細(xì)胞，再與患者血清按照1.3.5的方法進(jìn)行配血。

1.3.9 樣本保存和練習(xí)

樣本可以室溫或冰凍保存。練習(xí)者可以現(xiàn)場觀摩、親自操作，也可以通過接收本室發(fā)放的質(zhì)控樣本，參加血型室間質(zhì)控。

2 結(jié) 果

2.1 檢出的ABO血型為

A1、A2、A2B、A3、B3、A3B、AB3、Ax、Bx、AxB、ABx、B(A)、CisAB、等。

2.2 RH血型

RHD陰性、弱D或部分D，表現(xiàn)型包括：ccdee、Ccdee、CCdee、ccdEe、CcdEe等。

2.3 其他血型

M型、N型、S型、s型、P2型、Lea-b+、Lea+b-、Jka+b-、Jka-b+、Fya（-）等。

2.4 直接抗球蛋白試驗(yàn)

直抗陰性和直抗陽性（IgG陽性、IgG+C3d陽性、C3d陽性）。

2.5 單特異性抗體

抗D、抗E、抗c、抗C、抗e、抗M、抗N、抗S、抗P1、抗Lea、抗Leb、抗Jka、抗Jkb、抗Fya、抗Fyb等；多特異性抗體為：抗D+C 、D+E、C+D+E、D+Lea、C+e、C+D+E+Jkb、c+E+Jkb、M+E等。

檢出的所有抗體，均做了抗體效價，需要輸血的患者根據(jù)抗體的異性，均進(jìn)行了針對性配血。

從2001年到2005年曾連續(xù)五次在本地區(qū)開展血型室間質(zhì)控。發(fā)放樣本的血型包括：ABO系統(tǒng)的A1、A2型、Rh系統(tǒng)的RhD陰性和弱D或部分D型；不規(guī)則抗體包括：抗D、抗D+C、抗E、抗c、抗M等。

3 討 論

（1）為患者提供輸注合適相容的血液或血液成分過程中，從獻(xiàn)血員篩選、血液處理、供受雙方血樣檢驗(yàn)到相應(yīng)血液的發(fā)放，輸血實(shí)驗(yàn)室在這條“輸血鏈”中扮演著重要角色。輸注不相容或不合適的血液，可使患者產(chǎn)生不良反應(yīng)甚至死亡，因此對于臨床上血型不明確或配血不合者，一定要按正確的程序處理，防止輸血反應(yīng)的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)室擬建一個不規(guī)則抗體陽性和稀有血型樣本庫，通過庫中樣本練習(xí)，幫助實(shí)驗(yàn)人員找到正確處理疑難血型和疑難配血的程序和方法。

（2）影響ABO血型的因素有很多，如ABO亞型（血清中存在不規(guī)則抗A1或抗B抗體）、白血病等其他惡性疾病導(dǎo)致的抗原減弱、近期輸注了ABO不同型的紅細(xì)胞及ABO不同型的骨髓移植、新生兒或老人抗A、抗B抗體陰性或減弱，淋巴瘤、骨髓瘤患者血清出現(xiàn)緡錢狀凝集、血清中的不規(guī)則抗體和冷自身抗體等。因此，本文對ABO血型正反不符者采用了多種試劑和方法進(jìn)行檢測，保證了血型鑒定的準(zhǔn)確性。

（3）應(yīng)用IgM和IgG抗D進(jìn)行RHD血型檢測，可排除弱D或部分D型。特別是血站輸血實(shí)驗(yàn)室，如果對初篩為RhD陰性的血液不進(jìn)行確認(rèn)，將弱D型當(dāng)做RhD陰性，患者輸注后可能產(chǎn)生抗D抗體，對今后輸血及妊娠造成影響，已有DVI紅細(xì)胞用于D陰性婦女第1次妊娠中，引起了第2中等程度HDN的報道，應(yīng)引起高度重視[1]。

（4）通過對RhD陰性獻(xiàn)血員的表現(xiàn)形檢測，可了解本地區(qū)Rh表型分布特點(diǎn)，特別是針對RhD陰性血清中產(chǎn)生抗D+C、D+E+C 、抗D+C+E+Jkb、抗 E者，可快速從各種表型的RhD陰性獻(xiàn)血員中選擇沒有C或E及Jkb抗原的血液進(jìn)行配血，否則隨意輸注RhD陰性血，會造成血液浪費(fèi)，增加病人負(fù)擔(dān)，延誤治療時間。

（5）對于配血不合的病人，通過抗體篩選和鑒定，可檢出有臨床意義的不規(guī)則抗體，而臨床有意義抗體一般指：引起新生兒溶血病，引起溶血性輸血反應(yīng)，或者使輸入的紅細(xì)胞存活期減少的，在37°C反應(yīng)的同種異型抗體[2]。利用多種篩選細(xì)胞和譜細(xì)胞，采用多種方法才能準(zhǔn)確檢出各種不規(guī)則抗體，尤其是在多特異性抗體鑒定時，一套篩選細(xì)胞和譜細(xì)胞的抗原性比較局限，不能準(zhǔn)確鑒定抗體特異性。另外，抗體的性質(zhì)不同，在不同介質(zhì)和不同溫度的反應(yīng)也不相同，檢測方法也會有差異。每種方法都有一定的局限性，所以要用多種不同方法在不同介質(zhì)和溫度觀察結(jié)果。

（6）通過抗體效價檢測，可了解抗體的強(qiáng)弱。

（7）交叉配血時，首先要根據(jù)抗體性質(zhì)，選用不同方法、溫度和介質(zhì)篩選針對性抗原陰性者，由于每個血型系統(tǒng)抗原頻率不同，篩選的獻(xiàn)血員數(shù)量也不同。篩選時要參考其抗原頻率，進(jìn)行篩選，多特異性抗體患者篩選時，要先篩選頻率較高者，再選頻率較低者。同時利用多種方法進(jìn)行交叉配血，使其在特異性方面互相驗(yàn)證，確保臨床輸血安全有效。

（8）血型室間質(zhì)控 參考全國血型室間質(zhì)控的形式，結(jié)合本地區(qū)的實(shí)際情況，發(fā)放的樣本從易到難，包括了血型檢測、抗體篩選和鑒定、交叉配血，同時包括了檢測方法和試劑廠家、結(jié)果報告和發(fā)放的全部過程。各實(shí)驗(yàn)室在實(shí)驗(yàn)方法、試劑、儀器等方面更加標(biāo)準(zhǔn)化，提高了本地區(qū)輸血技術(shù)水平。

（9）庫中的樣本，采用了國內(nèi)外多個試劑廠家的試劑和方法進(jìn)行檢測，保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性，并且可以根據(jù)微機(jī)系統(tǒng)存儲信息，隨機(jī)取樣，隨時補(bǔ)充，樣本始終處于流動狀態(tài)，適合長期使用練習(xí)。隨著時間的推移，會補(bǔ)充更多稀有血型和多特異性抗體的練習(xí)，使庫中樣本種類更加豐富。