李 滋，劉 帥，王 衛(wèi)

（天津市藥品檢驗研究院，天津 300070）

酚麻美敏口服溶液是復方制劑，用于普通感冒、流行性感冒及過敏性疾病等引起的發(fā)熱、頭痛、四肢酸痛、打噴嚏、流鼻涕、咳嗽等癥狀。該藥的主要成分包括對乙酰氨基酚、鹽酸偽麻黃堿、氫溴酸右美沙芬及馬來酸氯苯那敏。其中，對乙酰氨基酚在制備中由于乙酰化不完全，或在保存過程中發(fā)生水解，會生成對氨基酚［1，2］。對氨基酚毒性較大，可能會作用于腎臟血液等而引發(fā)相關的疾病或損傷，且具有一定的基因毒性［3，4］。《中國藥典》2015 年版二部［5］的對乙酰氨基酚及其單方制劑項下均收錄了對氨基酚檢查項。而酚麻美敏口服溶液的現(xiàn)行質(zhì)量標準［國家食品藥品監(jiān)督管理總局國家藥品標準WS-106（X-093）-2002-2015Z］中并沒有對對氨基酚的含量進行控制。本試驗采用高效液相色譜法測定酚麻美敏口服溶液中對氨基酚的含量，專屬性強，靈敏度高，具有較好的重復性和準確性。

1 儀器與試藥

HP-1100 高效液相色譜儀，華譜S6000 高效液相色譜儀，XSE 205 分析天平（METTLER TOLEDO），GL Sciences Inertsil C8柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），Agilent ZORBAX Eclipse Plus-C8柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；對氨基酚對照品（批號100802-201604），對乙酰氨基酚對照品（批號100018-201610），鹽酸偽麻黃堿對照品（批號171237-201510），氫溴酸右美沙芬對照品（批號100201-201201），馬來酸氯苯那敏對照品（批號100047-201507），均來自中國食品藥品檢定研究院；酚麻美敏口服溶液樣品（每毫升含對乙酰氨基酚32 mg、鹽酸偽麻黃堿3 mg、氫溴酸右美沙芬1 mg 和馬來酸氯苯那敏0.2 mg），來自于青島正大海爾制藥有限公司，批號分別為1901031、1901041、1901051；甲醇為色譜 純（Merck 公司），其余試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 采用HP-1100 高效液相色譜儀，GL Sciences Inertsil C8色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉8.95 g，磷酸二氫鈉3.9 g，加水溶解至1 000 ml，加10%四丁基氫氧化銨溶液12 ml）-甲醇（90∶10），流速：1.0 ml/min，柱溫：40 ℃，檢測波長：245 nm，進樣20 μl。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品貯備液的制備 臨用新制。取對氨基酚對照品約16 mg，置50 ml 量瓶中，加溶劑［甲醇-水（4 ∶6）］溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.2.2 對照品溶液的制備 臨用新制。分別取對氨基酚對照品與對乙酰氨基酚對照品16 mg，置同一100 ml量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取2 ml，置50 ml 量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻。

2.2.3 供試品溶液的制備 臨用新制。用內(nèi)容量移液管精密量取本品5 ml，置25 ml 量瓶中，用溶劑分次洗滌移液管內(nèi)壁，洗液并入量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.4 空白輔料溶液的制備 按處方比例，制備不含四種主成分的輔料溶液。按“2.2.3”項下方法制備空白輔料溶液。

2.2.5 陰性對照溶液 按處方比例取鹽酸偽麻黃堿、氫溴酸右美沙芬及馬來酸氯苯那敏制備陰性樣品，并按照“2.2.3”項下方法制備陰性對照溶液。

2.3 專屬性考查 按照“2.1”項下的色譜條件，精密量取對照品溶液、供試品溶液、空白輔料溶液及陰性對照溶液各20 μl，注入液相色譜儀，結(jié)果表明對氨基酚與對乙酰氨基酚的分離度為21.8，理論板數(shù)按對乙酰氨基酚計為13 667，空白輔料溶液及其他成分對對氨基酚的測定無干擾，見圖1。

圖1 對照品（A）供試品（B）空白輔料（C）陰性對照（D）HPLC 色譜圖

2.4 破壞試驗 精密量取供試品5 ml，置25 ml 量瓶中，進行不同條件下的降解試驗。①酸破壞：加1 mol/L鹽酸溶液2 ml，搖勻，放置30 min，用1 mol/L 氫氧化鈉溶液調(diào)至pH 值為中性，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過。②堿破壞：加1 mol/L 氫氧化鈉溶液2 ml，搖勻，放置30 min，用1 mol/L 鹽酸溶液調(diào)至pH 值為中性，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過。③氧化破壞：加10%過氧化氫溶液2 ml，搖勻，放置30 min，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過。④高溫破壞：加溶劑適量，搖勻，80 ℃水浴中加熱1 h，放冷，加溶劑至刻度，搖勻，濾過。⑤光照破壞：加溶劑稀釋至刻度，直接光照5 d 后搖勻，濾過。分別取上述5 種續(xù)濾液，按“2.1”項色譜條件測定。結(jié)果見圖2。結(jié)果表明：上述破壞條件下產(chǎn)生的其他雜質(zhì)峰與對氨基酚峰可以達到基線分離，不影響對氨基酚的測定，說明擬定的色譜條件專屬性較好。

圖2 酸破壞（A）堿破壞（B）氧化破壞（C）高溫破壞（D）光照破壞（E）HPLC 色譜圖

2.5 線性關系考查 精密量取對照品貯備液適量，加溶劑稀釋制成每1 ml 中含對氨基酚0.64、1.6、3.2、6.4和12.8 μg 的系列溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標（C），以峰面積為縱坐標（A），進行線性回歸。結(jié)果表明對氨基酚在0.64～12.8 μg/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關系，線性方程為A=35.521 C-0.8686（r=0.9999，n=5）。

2.6 重現(xiàn)性試驗 取同一批樣品（批號1901051）依“2.2.3”項下方法制備6 份供試品溶液，依“2.1”項下色譜條件進樣測定。結(jié)果對氨基酚的平均含量為0.016%，RSD 為1.2%，表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取對照品溶液和供試品溶液（批號1901051）在室溫條件下分別放置0、2、4、6、8、10、12 和24 h，依“2.1”項下的色譜條件進樣。結(jié)果在8 h 內(nèi)，對照品溶液和供試品溶液中對氨基酚峰面積的RSD 分別為1.6%和0.4%，說明對照品溶液及供試品溶液在8 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 檢出限試驗 精密量取對照品溶液適量，采用逐步稀釋法測定，按照S/N=3 計算，對氨基酚的檢出限為0.32 μg/ml。

2.9 回收率試驗 精密量取對照品貯備液5 ml，置50 ml 量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為濃對照品溶液。分別精密量取供試品（批號1901031，未檢出對氨基酚）5 ml 置9 個25 ml 量瓶中，分別精密加入濃對照品溶液4、5 和6 ml 各3 份，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液依“2.1”項下的色譜條件進樣，記錄色譜圖，計算平均回收率。結(jié)果平均回收率為99.7%，RSD 為0.8%，見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果（n=9）

2.10 耐用性試驗 采用不同的廠家的儀器和色譜柱進行耐用性考查。條件1：HP-1100 高效液相色譜儀，GL Sciences Inertsil C8色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；條件2：華譜S6000 液相色譜儀，Agilent ZORBAX Eclipse Plus-C8色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）。試驗結(jié)果見表2，結(jié)果基本一致，表明該方法的耐用性良好。

表2 耐用性試驗結(jié)果

2.11 樣品測定 照“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，照“2.1”項下色譜條件進行測定，計算供試品中對氨基酚的含量，結(jié)果見表3。

表3 含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 流動相的考查 文獻資料中采用了不同種類的流動相［6-8］，為了達到更好的分離效果，最終采用磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉8.95 g，磷酸二氫鈉3.9 g，加水溶解至1 000 ml，加10%四丁基氫氧化銨溶液12 ml）-甲醇（90 ∶10）為流動相，各峰能夠達到基線分離，滿足對氨基酚含量測定的要求。

3.2 供試品溶液的制備 《中國藥典》2015 年版二部對乙酰氨基酚質(zhì)量標準對氨基酚檢查項下，供試品溶液的濃度為20 mg/ml。本品若按20 mg/ml 濃度配制供試品溶液，則需精密量取本品15 ml 置25 ml 量瓶中并進行定容操作。由于本品為黏稠液體，需分次清洗移液管并將洗液一并轉(zhuǎn)移至量瓶中，會導致溶液總量易超出量瓶的刻度范圍。經(jīng)試驗，擬定方法為“用內(nèi)容量移液管精密量取本品5 ml，置25 ml 量瓶中，用溶劑分次洗滌移液管內(nèi)壁，洗液并入量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液”，其濃度為6.4 mg/ml，相應對照品溶液的濃度也調(diào)整為6.4 μg/ml。

3.3 限量的確定 《中國藥典》2015 年版的對乙酰氨基酚制劑中對氨基酚檢查項的限度均為0.1%，經(jīng)參考該限度并結(jié)合實際的試驗結(jié)果，將對氨基酚的限度擬定為0.1%。

采用HPLC 法測定酚麻美敏口服溶液中對氨基酚含量，靈敏度高，精密度好，具有較好的專屬性及準確性，適用于酚麻美敏口服溶液的質(zhì)量控制。