陳貴存

（河南省濮陽市安陽地區(qū)醫(yī)院輸血科 安陽455000）

不規(guī)則抗體指ABO血型系統(tǒng)之外的抗體，其中最常見的為Rh血型。不規(guī)則抗體是導(dǎo)致新生兒溶血病、血型鑒定困難、輸血不良反應(yīng)的重要原因，對(duì)既往有輸血史、妊娠史患者，通過檢驗(yàn)不規(guī)則抗體可有效提高輸血安全、預(yù)防新生兒溶血病[1]。血型鑒定與輸血安全密切相關(guān)，提高血型鑒定準(zhǔn)確率是確保輸血安全的重要保障，與患者生命安全息息相關(guān)。既往研究通過鹽水法、蛋白酶法、聚凝胺法進(jìn)行血型鑒定，配血時(shí)需反復(fù)洗滌紅細(xì)胞，操作復(fù)雜、繁瑣，對(duì)結(jié)果造成一定影響，降低檢驗(yàn)靈敏度。微柱凝膠抗人球蛋白試驗(yàn)（Microcolumn Gel Coombs Test,MGCT）法對(duì)血液樣本需求量少，污染相關(guān)影響較小，在輸血檢驗(yàn)中具有較高靈敏度，有助于快速匹配血型[2]。本研究將MGCT法應(yīng)用于ABO、Rh（D）血型鑒定及不規(guī)則抗體檢測(cè)，以分析其臨床價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2018年10月～2020年3月輸血科患者1 255例，其中男704例，女551例；年齡22～53歲，平均（37.51±7.08）歲；合并妊娠史247例，合并輸血史116例。

1.2 入組標(biāo)準(zhǔn)（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡18～60歲；無嚴(yán)重血液科疾病；新鮮血液標(biāo)本。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：合并嚴(yán)重臟器功能障礙、免疫抑制相關(guān)疾病、感染性疾病。

1.3 檢測(cè)方法 均以MGCT法、凝聚胺法鑒定ABO及Rh（D）血型。標(biāo)本采集：抽取空腹靜脈血2 ml，置入抗凝真空無菌采血管。（1）MGCT法檢測(cè)：選擇長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司的凝膠卡標(biāo)記，將譜紅細(xì)胞以低離子溶液配成0.6%～0.7%濃度，共3份，加入50μl至所標(biāo)記微管；分離血漿，分別在1、2、3孔加入50μl血漿，并對(duì)應(yīng)加入50μl不規(guī)則抗體篩查譜細(xì)胞；置入孵育器15 min，溫度設(shè)置為37℃；以離心機(jī)進(jìn)行離心操作，以900 r/min轉(zhuǎn)速離心2 min后，再以1 500 r/min轉(zhuǎn)速離心3 min；判斷結(jié)果。對(duì)MGCT法檢出陽性者行分型檢測(cè)，分別于Ctrl、IgG、C3d孔中加入1%紅細(xì)胞懸液50μl，孵育結(jié)果與上述方法一致。（2）凝聚胺法：選擇中山市生科試劑儀器有限公司的凝聚胺試劑盒，依次標(biāo)記相同試管3個(gè)為對(duì)照管、主測(cè)管及次測(cè)管；主測(cè)管及次測(cè)管取獻(xiàn)血者1滴4%左右紅細(xì)胞滴入受血者血漿，對(duì)照管取獻(xiàn)血者1滴4%左右紅細(xì)胞滴入陽性對(duì)照組血漿；均給予低離子溶液0.65 ml、凝聚胺溶液2滴，混勻后室溫下孵育；以離心10 s，轉(zhuǎn)速3 400 r/min，取0.1 ml上層清液檢測(cè)凝聚反應(yīng)，若無凝聚反應(yīng)則表明試驗(yàn)失敗。（3）統(tǒng)計(jì)不統(tǒng)疾病MGCT法檢出陽性分型情況。

1.4 判定標(biāo)準(zhǔn)（1）MGCT法。陽性：紅細(xì)胞聚集塊在凝膠中端或表面，或出現(xiàn)溶血反應(yīng)，表明獻(xiàn)血者與受血者交叉配血不合。陰性：紅細(xì)胞沉降在底部，表示獻(xiàn)血者與受血者交叉配血相合。（2）凝聚胺法。顯微鏡下未見凝集則表示受血者及獻(xiàn)血者交叉配血相合，若出現(xiàn)凝集則表示配血不合。

1.5 觀察指標(biāo)（1）統(tǒng)計(jì)MGCT法與凝聚胺法對(duì)ABO及Rh（D）血型鑒定結(jié)果。（2）統(tǒng)計(jì)MGCT法與凝聚胺法不規(guī)則抗體檢出情況。（3）對(duì)MGCT法檢出陽性者行分型檢測(cè)

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 通過SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以（±s）表示，行t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以%表示，行χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)α＝0.05，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MGCT法與凝聚胺法ABO及Rh（D）血型鑒定結(jié)果比較MGCT法ABO血型鑒定準(zhǔn)確1 246例，凝聚胺法ABO血型鑒定準(zhǔn)確1 214例，兩種方法比較，MGCT法ABO血型鑒定準(zhǔn)確率99.28%（1 246/1 255）高于凝聚胺法96.73%（1 214/1 255）（χ2=20.896，P＜0.001）。MGCT法Rh（D）血型鑒定準(zhǔn)確1250例，凝聚胺法Rh（D）血型鑒定準(zhǔn)確1 226例，兩種方法比較，MGCT法Rh（D）血型鑒定準(zhǔn)確率99.60%（1 250/1 255）高于凝聚胺法97.69%（1 226/1 255）（χ2=17.174，P＜0.001）。

2.2 MGCT法與凝聚胺法不規(guī)則抗體檢出情況比較MGCT法不規(guī)則抗體檢出率1.20%與凝聚胺法0.64%比較，無明顯差異（P＞0.05）。見表1。

表1 MGCT法與凝聚胺法不規(guī)則抗體檢出情況比較[例（%）]

2.3 MGCT陽性分型檢出結(jié)果MGCT法檢出陽性者中存在IgG型37例、C3d型5例、IgG+C3d型13例。見表2。

表2 MGCT陽性分型檢出結(jié)果（例）

3 討論

若輸注的紅細(xì)胞與機(jī)體血清免疫抗體不合，則會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重輸血反應(yīng)，因此臨床輸血前需對(duì)有輸血史、妊娠史患者進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查。為預(yù)防輸血不良反應(yīng)發(fā)生，美國血庫協(xié)會(huì)規(guī)定進(jìn)行交叉配血前需檢測(cè)紅細(xì)胞抗原中的不規(guī)則抗體。常規(guī)輸血前檢查方法如凝聚胺法操作過程繁瑣，受人為因素影響較大，自動(dòng)化程度低，檢測(cè)準(zhǔn)確率、效率受到一定影響。輸血患者多為危重癥，輸血不及時(shí)會(huì)增加致死風(fēng)險(xiǎn)，而輸注血型不合則出現(xiàn)抗凝現(xiàn)象，因此，快速、有效進(jìn)行不規(guī)則抗體檢測(cè)及血液配對(duì)極為重要。

免疫溶血反應(yīng)是輸血嚴(yán)重不良反應(yīng)，其中以不規(guī)則抗體所致居多。本研究通過MGCT法、凝聚胺法檢測(cè)均發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體抗-C、抗-c、抗-D、抗-E，且上述抗體皆屬于免疫球蛋白G（IgG）抗體。IgG抗體是由輸血免疫刺激產(chǎn)生，屬溫抗體，具有紅細(xì)胞致敏作用，同時(shí)IgG效價(jià)強(qiáng)弱會(huì)直接影響輸血反應(yīng)，可誘發(fā)遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)[3]。本研究經(jīng)檢測(cè)，MGCT法不規(guī)則抗體檢出率為1.20%，凝聚胺法不規(guī)則抗體檢出率為0.64%。陳麗娟等[4]在分析不規(guī)則抗體篩查陽性結(jié)果時(shí)發(fā)現(xiàn)，不規(guī)則抗體篩查陽性率為1.16%（22/1 896），與本研究MGCT法檢測(cè)結(jié)果相近，證實(shí)本研究結(jié)果可靠。而本研究中MGCT法不規(guī)則抗體檢出率略高于凝聚胺法，其原因可能在于IgG抗體分子長度僅為24 nm，分子鏈較短，難以有效凝聚。

本研究中MGCT法ABO及Rh（D）血型鑒定準(zhǔn)確率均高于凝聚胺法（P＜0.05），提示MGCT法可提高ABO及Rh（D）血型鑒定準(zhǔn)確率。凝聚胺法以低價(jià)離子介質(zhì)破壞紅細(xì)胞表面負(fù)電荷并促使其聚集，加入凝聚液后通過凝集情況判定結(jié)果，凝集散開代表非特異性，凝集不散開代表特異性。但凝聚胺法結(jié)果受存放時(shí)間長短、液體加入量多少等因素影響，導(dǎo)致血型鑒定準(zhǔn)確率有所降低。而MGCT法是新型血型配對(duì)方法，是由凝膠分子技術(shù)與抗原抗體反應(yīng)相結(jié)合而形成的產(chǎn)物，可通過系統(tǒng)進(jìn)行離心速率調(diào)整，通過控制凝膠濃度調(diào)節(jié)分子篩孔徑大小，凝膠顆粒網(wǎng)能快速分離凝結(jié)及非凝結(jié)紅細(xì)胞，單一微柱孔徑僅允許1個(gè)紅細(xì)胞通過，若紅細(xì)胞凝結(jié)無法通過則表示為陽性，若紅細(xì)胞通過則表示為陰性[5～6]。MGCT法通過標(biāo)準(zhǔn)化定量操作降低操作人員對(duì)結(jié)果評(píng)判的主觀性，且重復(fù)性好，分離游離紅細(xì)胞及凝集紅細(xì)胞后可清晰顯示檢測(cè)結(jié)果，檢測(cè)結(jié)果確切、客觀，可最大程度避免人為因素對(duì)結(jié)果的干擾。與傳統(tǒng)檢測(cè)方式相比，MGCT法靈敏度較高，金燕萍等[7]報(bào)道稱MGCT應(yīng)用于臨床不規(guī)則抗體鑒定，靈敏度可達(dá)97.96%，對(duì)確保輸血安全有重要價(jià)值。因此，MGCT法有助于提高不規(guī)則抗體檢出準(zhǔn)確率。

本研究對(duì)不同疾病MGCT法陽性患者進(jìn)行分型檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)IgG型明顯較多，而通過對(duì)不同疾病患者進(jìn)行分型檢測(cè)，有助于明確該疾病嚴(yán)重程度，對(duì)輔助疾病診斷有積極作用。另外，MGCT法精簡(jiǎn)紅細(xì)胞洗滌過程，操作更為簡(jiǎn)單，對(duì)檢測(cè)標(biāo)本量需求較少，尤其適用于大面積燒傷、嬰幼兒等難以采集血液標(biāo)本患者，適用性廣，且標(biāo)本保存時(shí)間長，便于后續(xù)行回顧性研究或原始資料查找。

綜上所述，MGCT法具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高等優(yōu)勢(shì)，應(yīng)用于輸血科ABO及Rh（D）血型鑒定可明顯提高準(zhǔn)確率，有效檢出不規(guī)則抗體，同時(shí)可輔助疾病診斷，評(píng)估疾病嚴(yán)重程度，具有較高應(yīng)用價(jià)值。