董彩霞 鄧永超 向仕婷 聶新民

流行性感冒（流感）是一種急性呼吸道傳染病，由流感病毒引起，該病毒屬于正黏病毒科，分為甲、乙、丙3 種類型［1］，其中以甲型流感病毒最常見。在全球范圍內，流感的發(fā)病率和病死率均很高［2］，因此被世界衛(wèi)生組織判定為全球性監(jiān)測疾病。由于缺乏特異性表現(xiàn)，實驗室病原學檢測成為流感的主要診斷依據(jù)。目前對病毒的分離和培養(yǎng)鑒定結果是診斷流感的“金標準”［3］，但此方法對實驗室條件要求較高，且耗時長，不利于疾病的早期發(fā)現(xiàn)和治療。抗原快速檢測法操作簡單，分析迅速，結果明確，易于判讀，且成本較低，因此在臨床上廣受歡迎。本研究采集流感樣癥狀患兒的鼻咽部標本，分別經(jīng)鼻和口采集鼻拭子（nasopharyngeal swabs，NP）和咽拭子（oropharyngeal swabs，OP），進行流感病毒抗原快速檢測，比較檢出病毒的陽性率，從而探討兩種樣本在流感病毒抗原檢測中的應用，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象與一般資料 收集2020 年2 月1 日—2 月29 日在本院急診科就診的320 例流感樣病例患兒的臨床資料，其中男性178 例，女性142 例；年齡0～17 歲。診斷標準參照國家衛(wèi)生健康委制定的流行性感冒診斷標準中流感樣病例的定義：① 體溫≥38 ℃者；② 伴咳嗽或咽痛癥狀之一者；③ 缺乏其他實驗室指標檢查結果用于確診的急性上呼吸道感染患者。

1.2 標本采集和處理

1.2.1 鼻拭子 將拭子插入患兒鼻腔中，至分泌物最多處，輕柔轉動并向患兒鼻腔內移動拭子，到達鼻甲受阻處（與鼻孔距離約為2.0～2.5 cm），緊貼鼻腔壁旋轉拭子3 次，取出拭子。

1.2.2 咽拭子 將拭子從患兒口腔完全插入咽喉中，以上顎扁桃體發(fā)紅部位和咽喉壁為中心，適度擦拭咽后壁及雙側扁桃體，應避免觸及舌根，取出拭子。采集拭子后，放入專用的拭子袋內密封，立即送檢，采用試劑盒樣本提取液進行處理。

1.3 流感病毒抗原快速檢測 應用廣州萬孚生物技術股份有限公司生產(chǎn)的甲型/乙型流感病毒抗原快速檢測試劑盒，采用膠體金免疫層析技術定性檢測流感病毒抗原。在樣本提取管內加入樣本提取液，將拭子插入樣本溶液中，貼近試管壁旋轉。沿提取管內壁擠壓棉簽頭，取出并棄去拭子，向測試卡的加樣孔中滴加處理后的提取物。15～20 min 內觀察結果，在30 min 后顯示的結果無臨床意義。對鼻拭子和咽拭子檢測結果不一致的樣本進行熒光聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）驗證，該試劑由廣州達安基因股份有限公司提供。

1.4 倫理學 本研究符合醫(yī)學倫理學標準，并經(jīng)本院醫(yī)學倫理委員會審批（審批號：HCHLL-2021-58），對患兒進行的檢測均獲得過監(jiān)護人知情同意。

1.5 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 24.0 軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以例（%）表示，采用配對χ2檢驗。P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 鼻拭子和咽拭子中流感病毒抗原檢測結果比較 320 例患兒提供的鼻拭子和咽拭子樣本中，咽拭子檢出陽性45 例，陰性275 例；鼻拭子檢出陽性65 例，陰性255 例。鼻拭子抗原檢測陽性率明顯高于咽拭子〔20.3%（65/320）比14.1%（45/320）〕，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。見表1。

表1 鼻拭子和咽拭子流感病毒抗原檢測結果比較

2.2 采用鼻拭子和咽拭子檢測不同類型流感病毒抗原結果比較 本研究320 例患兒中，鼻拭子和咽拭子流感病毒抗原檢測結果雙陽性共45 例（包括甲型流感27 例，乙型流感18 例），與熒光PCR 檢測結果一致；鼻拭子檢測陽性、咽拭子檢測陰性的患兒有20 例（包括甲型流感2 例，乙型流感18 例），上述20 例患兒的PCR 驗證結果為甲型流感2 例，乙型流感16 例，未測出2 例。見表2。乙型流感的鼻拭子陽性檢出率明顯高于咽拭子，差異有統(tǒng)計學意義（χ2＝14.06，P＝0.001）；甲型流感的鼻拭子與咽拭子陽性檢出率比較差異無統(tǒng)計學意義（χ2＝0.50，P＝0.48)。

表2 不同類型流感病毒PCR 陽性標本中鼻拭子和咽拭子檢出陽性例數(shù)及分布

2.3 不同年齡段流感樣癥狀患兒的流感病毒抗原陽性檢出率比較 以鼻拭子的檢測結果為標準，比較3 組不同年齡段患兒的流感病毒抗原陽性檢出率。3 組間陽性率比較差異有統(tǒng)計學意義（χ2＝19.20，P＝0.001）；其中3～5 歲組的陽性檢出率最高（35.7%），6～17 歲組次之，為28.6%，0～2 歲組的陽性檢出率最低，為14.4%。見表3。

表3 不同年齡段流感樣病例患兒鼻拭子陽性檢出率比較

3 討論

流感發(fā)病急，傳染性強，部分病例可進展為重癥流感，患者甚至死于急性呼吸窘迫綜合征，5 歲以下兒童是重癥流感的高危人群［4］。流感主要表現(xiàn)為頭痛、肌痛、發(fā)熱、全身不適，患者體溫可達39～40 ℃，常有畏寒、寒戰(zhàn)、全身乏力、食欲減退等癥狀，兒童的發(fā)熱程度通常高于成人，消化道癥狀也較成人多見，尤其患乙型流感時。新生兒可表現(xiàn)為拒奶、嗜睡、呼吸暫停等［5］。2020 年流感診療方案指出，患者發(fā)病48 h 內給予抗病毒治療可降低并發(fā)癥的發(fā)生率和病死率，縮短住院時間，因此需要盡早明確診斷并給予相應治療。流感病毒抗原快速檢測因時間短（采樣后1 h即可出結果）而在臨床廣泛應用，該方法標本采集部位為鼻咽，常經(jīng)口或鼻取樣，比較兩種取樣方式對檢測結果的影響具有重要意義。

本研究顯示，鼻拭子流感病毒抗原的陽性檢出率明顯高于咽拭子，與何肖華等［6］研究結果一致。分析原因主要為多數(shù)呼吸道病毒最主要在后鼻咽部纖毛柱狀上皮細胞內復制，其次為前鼻孔和口咽部纖毛上皮細胞，因此鼻拭子的陽性檢出率較咽拭子高［7］；另外從采樣手法上來講，采集咽拭子時大多患兒配合度較低，不能充分暴露咽喉深部，樣本刷難以取到足量細胞，且易觸碰到舌部，沾取唾液而影響采樣結果；經(jīng)鼻取樣時家長只需固定患兒頭部，護士便很容易到達目標部位，采集足量細胞。

本研究中45 例患兒鼻拭子、咽拭子同時陽性，20 例患兒鼻拭子檢測為陽性，咽拭子為陰性，PCR驗證顯示，有2 例乙型流感未測出，推測原因可能為樣本保存和處理不當，導致核酸降解。本研究結果顯示，乙型流感的鼻拭子陽性檢出率較高，與陳麗萍［8］研究結果一致。不同流感病毒對定植部位有一定嗜性，導致不同型別檢出率在不同采樣部位有差別。本研究結果提示，乙型流感病毒多定植在患兒鼻腔底部。此外，本研究甲型流感病毒在鼻拭子和咽拭子中檢出率比較差異無統(tǒng)計學意義，雖然我們并未對甲型流感進行分型，但根據(jù)國家流感中心發(fā)布的2020 年2 月流感監(jiān)測情況，甲型流感病毒主要類型為H3N2。有研究顯示，H1N1 的咽拭子陽性率較高，而H3N2 的鼻拭子、咽拭子陽性檢出率比較差異無統(tǒng)計學意義［8］。

本研究結果顯示，流感病毒的陽性檢出率在不同年齡組患兒中比較差異有統(tǒng)計學意義，以3～5 歲組患兒檢出率最高，這與梁大立等［9］研究結果一致，其次為6～17 歲組患兒，分析原因為相比嬰幼兒，6～17 歲兒童活動范圍更廣，接觸人群更多，因此受感染的概率更大；3～5 歲患兒的免疫力相對中小學生較弱，因此感染率最高。孫樹梅等［4］研究表明，預防流感及其并發(fā)癥的最有效手段是接種疫苗。

本研究同時收集流感樣病例患兒的鼻拭子和咽拭子，能較好地比較鼻拭子和咽拭子在流感病毒檢出方面的差異，但也存在一定局限性：① 本研究在2020 年2 月中上旬進行，處于流感季尾聲，流感病毒以乙型流感為主，需要在新的流感季節(jié)擴大時間范圍研究；② 本研究結果僅針對廣州萬孚生物技術股份有限公司生產(chǎn)的甲型/乙型流感快速抗原檢測試劑盒有意義，不同品牌的膠體金試劑由于敏感度和特異度存在差異，需要分別進行驗證。

綜上所述，在兒童流感病毒篩查過程中，特別是乙型流感病毒流行時期，優(yōu)先選擇鼻拭子對提高病毒的陽性檢出率具有重要意義。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突