羊奶粉生產(chǎn)中金黃色葡萄球菌分離鑒定及其分子特性和耐藥性檢測

張鵬飛，付雪婷，趙春花，劉心雨，張 杰，張 萌，寇明瑩，葛武鵬，王 新

（西北農(nóng)林科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，陜西 楊凌 712100）

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一種人畜共患的致病菌，可引發(fā)人和動物的中毒和感染。近年來由金黃色葡萄球菌引發(fā)的食物中毒（S. aureusfood poisoning，SFP）事件屢見不鮮，主要是人們食用了污染金黃色葡萄球菌腸毒素的食物[1]。研究表明腸毒素由一組熱穩(wěn)定性的蛋白質(zhì)組成，在100 ℃煮沸30 min后仍然具有生物活性和免疫活性[2]。目前根據(jù)腸毒素的催吐性，將金黃色葡萄球菌腸毒素劃分為腸毒素和類腸毒素[3-5]。在腸毒素/類腸毒素中，葡萄球菌腸毒素A（staphylococcal enterotoxin A，SEA）被認(rèn)為是SFP暴發(fā)的主要原因，其次是葡萄球菌腸毒素D（staphylococcal enterotoxin D，SED）、葡萄球菌腸毒素C（staphylococcal enterotoxin C，SEC）、葡萄球菌腸毒素B（staphylococcal enterotoxin B，SEB）和葡萄球菌腸毒素E（staphylococcal enterotoxin E，SEE）[6]。

近年來，羊奶粉作為一種新興的奶粉品種，規(guī)模在不斷擴(kuò)大。羊奶是乳制品中最接近母乳、營養(yǎng)成分最全、最易被人體吸收的奶品，常作為嬰幼兒配方奶粉的原料[1,7]。有研究報(bào)道，一些金黃色葡萄球菌存在于嬰幼兒配方奶粉中[1,8]。雖然羊奶粉在加工生產(chǎn)過程中，都會經(jīng)過巴氏殺菌殺死金黃色葡萄球菌等有害微生物，金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的腸毒素仍可以導(dǎo)致人類食源性疾病[9-10]。目前，對金黃色葡萄球菌在羊乳到乳制品生產(chǎn)鏈上污染情況的研究還比較少。了解羊乳加工到成品這一生產(chǎn)環(huán)節(jié)中金黃色葡萄球菌的污染情況，可以有效阻止其對乳制品的污染。

為了解羊奶粉在不同加工環(huán)節(jié)中受金黃色葡萄球菌的污染情況，實(shí)驗(yàn)室已于2012—2013年對某4 個奶廠的不同生產(chǎn)環(huán)節(jié)進(jìn)行樣本的收集，結(jié)果發(fā)現(xiàn)4 個奶廠不同環(huán)節(jié)都存在一定的污染，且主要集中在罐奶、加工設(shè)備、加工人員和落地粉[10]。為進(jìn)一步探明羊奶廠加工過程中受金黃色葡萄球菌污染的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，本研究于2016年再次對其中一家羊奶粉加工廠不同生產(chǎn)環(huán)節(jié)進(jìn)行金黃色葡萄球菌污染調(diào)查，并對分離菌株進(jìn)行毒素基因、耐藥性及葡萄球菌A蛋白（staphylococcal protein A，SPA）、多位點(diǎn)序列分型（multilocus sequence typing，MLST）和脈沖場凝膠電泳（pulsed field gel electrophpresis，PFGE）分型檢測。通過了解不同環(huán)節(jié)金黃色葡萄球菌的污染情況和菌株的耐藥性及分子特征，旨在確定金黃色葡萄球菌污染的關(guān)鍵環(huán)節(jié)及菌株特征，從而為有效防治羊奶粉加工過程中金黃色葡萄球菌污染提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 樣本來源

為了解羊奶粉加工過程中金黃色葡萄球菌的污染情況，隨機(jī)選取了一家羊奶粉加工廠進(jìn)行樣本的收集。其中，樣本的收集包括5 部分，分別為罐奶、加工設(shè)備、落地粉、加工人員以及成品。此次共采集樣本112 份，其中罐奶23 份，加工設(shè)備35 份，加工人員10 份，落地粉29 份和成品15 份。

1.1.2 試劑

胰蛋白胨大豆瓊脂（tryptic soy agar，TSA）、胰蛋白胨大豆肉湯（tryptic soy broth，TSB）、甘露醇氯化鈉瓊脂、Baird-Parker（BP）基礎(chǔ)培養(yǎng)基、亞碲酸鹽卵黃增菌液、緩沖蛋白胨水（buffered peptone water，BPW）、7.5%氯化鈉肉湯、Mueller-Hinton瓊脂（Mueller-Hinton agar，MHA） 北京陸橋技術(shù)股份有限責(zé)任公司；Taq酶、Buffer（Mg2+-）、dNTP、MgCl2大連寶生物（TaKaRa）公司；藥敏實(shí)驗(yàn)16 種待測抗生素 北京索萊寶科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

移液槍、高速離心機(jī) 德國Eppendorf公司；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）擴(kuò)增儀、凝膠成像儀 美國伯樂公司；超凈工作臺 蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；恒溫培養(yǎng)振蕩搖床 上海智成分析儀器制造有限公司；超純水機(jī) 四川優(yōu)普超純科技術(shù)有限公司；隔水式恒溫培養(yǎng)箱 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；高壓滅菌鍋 上海申安高壓儀器設(shè)備有限公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品的采集

1.3.1.1 粉狀及液態(tài)樣本的采集

參照GB 4789.10—2016《食品微生物檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》方法進(jìn)行。將收集的樣品置于無菌袋中并記錄樣品相關(guān)信息，低溫運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室，其間隔不超過4 h。

1.3.1.2 加工設(shè)備及加工人員樣本的采集

涂抹樣品的采集和處理參照王倩寧等[11]方法。用無菌棉簽涂抹加工設(shè)備表面和加工人員手部或鞋子表面，將涂抹樣置于裝有30 mL新鮮BPW培養(yǎng)液的離心管中，并對涂抹區(qū)域進(jìn)行消毒處理，防止微生物滋生。

1.3.2 菌株的分離與鑒定

參照Wang Xin等[1]方法對樣本中金黃色葡萄球菌進(jìn)行分離鑒定。對于液態(tài)或固態(tài)樣本，稱取25 g液體或者粉末樣本于225 mL無菌BPW培養(yǎng)液中；涂抹樣本不做處理，然后將盛有樣本的BPW培養(yǎng)液至于恒溫培養(yǎng)振蕩搖床37 ℃、150 r/min培養(yǎng)18～24 h。將富集后的過夜培養(yǎng)液按照1∶10接種到30 mL 7.5%氯化鈉肉湯中，37 ℃、150 r/min培養(yǎng)24 h。接著將培養(yǎng)后的菌液用接種環(huán)三線劃法接種到BP平板上，37 ℃培養(yǎng)24 h。挑取可疑菌落接種在甘露醇平板中，做進(jìn)一步鑒定。最后挑取甘露醇變色平板單菌落純化在TSA平板37 ℃培養(yǎng)18～24 h。對純化后的菌落用煮沸法制得DNA模板，并用PCR擴(kuò)增nuc基因進(jìn)行最后一步驗(yàn)證，nuc陽性的菌株被確定為金黃色葡萄球菌。將nuc基因陽性的所有菌株用棉簽涮于50%的TSB-甘油管中，于-80 ℃冰箱保存。

1.3.3 毒素基因檢測

運(yùn)用PCR技術(shù)對所有的菌株進(jìn)行23 種毒素基因檢測。其中腸毒素基因21 種，包括：5 種經(jīng)典腸毒素基因（sea、seb、sec、sed和see）和16 種新型腸毒素基因（seg、seh、sei、sej、sek、sel、sem、sen、seo、sep、seq、ser、ses、set、seu和sev）；殺白細(xì)胞毒素基因（pvl）和中毒休克綜合征毒素基因（tsst-1）。

1.3.4 耐藥性檢測

根據(jù)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（Clinical and Laboratory Standard Institute，CLSI）推薦的瓊脂稀釋法，對分離到的6 株菌進(jìn)行16 種常用抗菌藥物的耐藥性測定，并在37 ℃培養(yǎng)18～24 h后評估結(jié)果。16 種常用抗生素及最低抑菌濃度為：青霉素（penicillin，PEN，0.25 μg/mL）、氨芐西林（ampicillin，AMP，0.5 μg/mL）、苯唑西林（oxacillin，OXA，4 μg/mL）、紅霉素（erythromycin，ERY，8 μg/mL）、四環(huán)素（tetracyclines，TET，16 μg/mL）、頭孢西?。╟efoxitin，F(xiàn)OX，8 μg/mL）、頭孢哌酮（cefoperazone，F(xiàn)OP，64 μg/mL）、氯霉素（chloramphenicol，CHL，32 μg/mL）、慶大霉素（gentamicin，GEN，16 μg/mL）、環(huán)丙沙星（ciprofloxacin，CIP，4 μg/mL）、利福平（rifampin，RIF，4 μg/mL）、萬古霉素（vancomycin，VAN，16 μg/mL）、阿米卡星（amikacin，AMK，64 μg/mL）、甲氧芐啶/磺胺甲惡唑（trimethoprim/sulfamethoxazole，T/S，4/76 μg/mL）、阿莫西林/克拉維酸（amoxicillin/clavulanic acid，A/C，8/4 μg/mL）和利奈唑胺（linezolid，LZD，8 μg/mL）。藥敏實(shí)驗(yàn)質(zhì)控菌株為金黃色葡萄球菌ATCC 29213和大腸桿菌ATCC 25922。此外，運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增mecA基因判斷菌株是否為“超級耐藥細(xì)菌”——耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin-resistantS. aureus，MRSA）。

1.3.5 分子分型

1.3.5.1 SPA分型

運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增spa基因，并將擴(kuò)增產(chǎn)物送至北京奧科鼎盛生物科技有限公司進(jìn)行測序。然后將測序結(jié)果進(jìn)行處理，在線提交至分析網(wǎng)站http://spaserver.ridom.de進(jìn)行分析，以此確定SPA類型。

1.3.5.2 MLST分型

運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增7 對管家基因，并進(jìn)行測序，將測序結(jié)果提交至MLST數(shù)據(jù)分析網(wǎng)站（http://www.MLST.net）進(jìn)行分析，得到每個管家基因的等位基因譜，再遞交至該網(wǎng)站，最終可獲得每個菌株的ST型。

1.3.5.3 PFGE分型

參照王新等[12]方法對分離株進(jìn)行PFGE分型，分型中以Salmonella braenderupH9812為標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌株，以SmaI和XbaI為內(nèi)切酶分別對金黃色葡萄球菌和H9812進(jìn)行酶切，采用BioMerics-3.00軟件進(jìn)行聚類分析。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及圖表繪制

所有數(shù)據(jù)采用Excel 2016軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，并運(yùn)用Word 2003繪制三線表。PFGE聚類圖采用BioMerics-3.00軟件進(jìn)行聚類分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 金黃色葡萄球菌分離情況

對112 份樣品進(jìn)行選擇培養(yǎng)和nuc基因鑒定，發(fā)現(xiàn)6 份樣品被金黃色葡萄球菌污染，污染率為5.4%（6/112）。每份陽性樣品分別分離出1 株金黃色葡萄球菌，其中1 株（4.3%，1/23）分離于罐奶，2 株（5.7%，2/35）分離于加工設(shè)備，2 株（20.0%，2/10）分離于加工人員，1 株（3.4%，1/29）分離于落地粉，結(jié)果如表1所示。

表 1 不同生產(chǎn)環(huán)節(jié)中金黃色葡萄球菌的流行情況Table 1 Prevalence of S. aureus in different production stages

2.2 菌株毒素基因攜帶情況

表 2 金黃色葡萄球菌毒素基因、耐藥性及mecA檢測情況Table 2 Virulence genes, antimicrobial susceptibility and mecA gene of S. aureus strains

對23 種毒素基因進(jìn)行檢測，結(jié)果如表2所示。所有的菌株至少攜帶1 種毒素基因，包括sea、sec、sed、see、seg、seh、sei、sej、sek、sem、seo、seq、ser和pvl基因。其中pvl基因的檢出率最高為100.0%（6/6）；其次為sea、sec、see、seh、sek和seq50.0%（3/6），seg、sej和ser33.3%（2/6），sed、sei、sem和seo16.7%（1/6）；此外8 個腸毒素基因（seb、sel、sen、sep、ses、set、seu和sev）和中毒休克綜合征毒素基因（tsst-1）沒有檢出。從23 種毒素基因的檢出情況看，菌株攜帶殺白細(xì)胞素基因（pvl）比率較高，為100.0%（6/6），其次攜帶經(jīng)典腸毒素基因的比率為33.3%（10/30）和攜帶新型腸毒素基因的比率為18.8%（18/96）。此外，在本研究中6 株金黃色葡萄球菌共有4 種不同的毒素基因譜，每株菌株攜帶1～7 種毒素基因不等，其中最常見的基因譜是sea-sec-see-seh-sek-seqpvl50.0%（3/6）。綜上結(jié)果表明，此次羊奶廠分離的金黃色葡萄球菌都攜帶較多的毒素基因，且經(jīng)典腸毒素基因的攜帶率較高，不僅增加了羊奶粉加工污染的概率，而且還會加重對嬰幼兒健康的威脅。

2.3 菌株耐藥情況

如表2所示，所有的菌株都表現(xiàn)為多重耐藥，都至少耐3 種抗生素。其中，對AMP、FOP、T/S和PEN的耐藥性最為普遍，耐藥率達(dá)100.0%（6/6），其次對ERY和A/C的耐藥率為83.3%（5/6），對TET的耐藥率為50.0%（3/6）和對GEN的耐藥率為16.7%（1/6）。所有菌株均對OXA、FOX、CHL、CIP、RIF、VAN、AMK和LZD敏感。在本研究中6 株分離株共有4 種不同的耐藥譜，其中最常見的耐藥譜是AMP-ERY-TET-FOP-T/S-A/C-PEN，檢出率為50.0%（3/6）。此外，所有的菌株mecA基因檢測都為陰性。

2.4 分子分型

圖 1 6 株金黃色葡萄球菌PFGE、SPA、MLST和PT分型Fig. 1 Dendrograms of PFGE, SPA, MLST and PT typing for the six S. aureus strains

對所有的分離株進(jìn)行SPA、MLST和PFGE分型，結(jié)果如圖1所示。6 株分離株共有4 種SPA分型和3 種MLST分型。對于SPA分型，主導(dǎo)分子型為t127 50.0%（3/6），其次為t002、t548和t189 16.7%（1/6）。對于MLST分型，主導(dǎo)分子型為ST1 50.0%（3/6），其次為ST5 33.3%（2/6）以及ST188為16.7%（1/6）。6 株分離株P(guān)FGE分型結(jié)果發(fā)現(xiàn)，所有的菌株均能被SmaI切開，共分為4 個脈沖型（pulsotypes，PT）（A、B、C和D），當(dāng)使用90.01%的相似性聚簇時，可分為3 個不同的簇（I、II和III簇）。其中，2 株來源于加工設(shè)備和1 株來源于落地粉的ST1-t127菌株在相同的簇中且具有相同的PT。此外，來源于加工人員的2 株菌在相同的簇中，但PT不同。

3 討 論

隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人們生活水平的提高，越來越多的人解決溫飽之余，更注重產(chǎn)品的營養(yǎng)價值。羊奶以豐富的營養(yǎng)及不含過敏源，深受人們的喜愛[13]。在奶山羊飼養(yǎng)過程中，乳房炎是奶山羊疾病中發(fā)病率最高、影響范圍最廣的疾病之一，而金黃色葡萄球菌是引起奶山羊乳房感染的主要病原微生物之一[14]。被金黃色葡萄球菌感染引發(fā)乳房炎的奶山羊，在擠奶時很有可能將金黃色葡萄球菌帶入羊奶中，進(jìn)而增加了羊乳制品中金黃色葡萄球菌的污染。目前，對羊乳粉加工環(huán)節(jié)中金黃色葡萄球菌污染狀況鮮有報(bào)道。

本研究結(jié)果表明羊奶粉加工環(huán)節(jié)受金黃色葡萄球菌污染率較低（5.4%，6/112），這與實(shí)驗(yàn)室前期的研究結(jié)果一致（7.2%，61/848）[10]，說明羊奶粉加工過程中長期存在金黃色葡萄球菌污染的情況。雖然分離率較低，不能忽視金黃色葡萄球菌可能通過生產(chǎn)鏈進(jìn)行傳播的可能。此外，本研究從罐奶、加工設(shè)備、加工人員和落地粉樣本中分離到金黃色葡萄球菌，該結(jié)果與Xing Xiaonan[10]和Papadopoulos[15]等報(bào)道比較一致，表明這四大環(huán)節(jié)是國內(nèi)外在乳粉加工過程中被金黃色葡萄球菌污染的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。眾所周知，乳粉在加工過程中都會采用巴氏殺菌殺死有害微生物，本研究在乳粉成品中也未檢測到金黃色葡萄球菌，表明巴氏殺菌可以有效殺死有害微生物，但不能有效滅活金黃色葡萄球菌分泌的一些耐熱毒素[16]。因此，應(yīng)該加強(qiáng)乳制品中耐熱毒素（如腸毒素等）的檢測，可以減少金黃色葡萄球菌引發(fā)食物中毒的風(fēng)險。

對分離株進(jìn)行毒素基因檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)較多金黃色葡萄球菌攜帶1 個或多個腸毒素基因（83.3%），這一比例高于實(shí)驗(yàn)室之前的研究（63.2%，38/61）[10]。有研究報(bào)道，sea單獨(dú)或與其他葡萄球菌腸毒素基因一起，是引發(fā)食物中毒的主要原因，其次是sed、sec、seb和see[6]。在本研究中，經(jīng)典腸毒素基因sea、sec和see（50.0%）最常被檢測到，其次是sed（16.7%）。本研究還發(fā)現(xiàn)經(jīng)典腸毒素基因sea、sec和see在同一株菌株中被檢測到，且這些菌株具有相同的分子型（ST1-t127）。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室前期的研究發(fā)現(xiàn)攜帶sea基因的菌株一般均攜帶see基因[17]，本研究結(jié)果與前期研究相似。但不同的是本研究中攜帶sea和see的菌株同時也攜帶sec基因，同時攜帶3 種經(jīng)典腸毒素基因的菌株的報(bào)道還比較少。此外，也有研究報(bào)道稱sec是羊源金黃色葡萄球菌中最常見的腸毒素基因[18-19]，本研究也證實(shí)了這一點(diǎn)。在中國，攜帶經(jīng)典腸毒素基因的菌株大多與葡萄球菌食物中毒事件相關(guān)，本研究從羊奶粉加工環(huán)節(jié)中分離出的所有菌株中，只有1 株分離株不攜帶任何經(jīng)典腸毒素基因，因此有必要對生產(chǎn)設(shè)備及生產(chǎn)環(huán)境做深度清潔，減少攜帶毒素基因的金黃色葡萄球菌在生產(chǎn)環(huán)境中的長期定植，進(jìn)而減少對乳粉原料的污染。目前，已經(jīng)證明腸毒素和類腸毒素基因可以在移動遺傳元件上編碼和傳播[20]。如sed和sej基因通常同時位于質(zhì)粒pIB485上[21]，這與本研究的結(jié)果一致，在加工人員樣本中分離到的ST5-t548菌株同時攜帶這2 種基因。除此之外，在加工人員樣本中還發(fā)現(xiàn)1 株攜帶不完整egc基因簇基因（seg-sei-sem-seo）的菌株。因此，建議不僅要重視產(chǎn)經(jīng)典腸毒素菌株造成的污染，而且要重視新型腸毒素對乳粉的污染[22-24]。加工人員與工廠環(huán)境來源的菌株攜帶毒素基因情況不同，說明工廠環(huán)境的菌株來源比較廣泛，需要進(jìn)一步對工廠環(huán)境來源菌株進(jìn)行溯源研究。在本研究中還發(fā)現(xiàn)所有的分離株均攜帶pvl基因，研究結(jié)果高于其他報(bào)道[12,25]。有報(bào)道稱，pvl與人類感染和山羊乳腺炎有關(guān)[26-27]。因此及時對感染乳房炎的產(chǎn)奶羊進(jìn)行治療或淘汰可以從根源上減少羊奶的污染。大量研究發(fā)現(xiàn)，在中國pvl基因與社區(qū)獲得性MRSA（community-associated MRSA，CA-MRSA）相關(guān)性較高，攜帶pvl基因的CAMRSA感染性更強(qiáng)[28]。本研究沒有檢測到mecA陽性的菌株，但要防止耐藥基因的轉(zhuǎn)移，一旦在生產(chǎn)環(huán)節(jié)中檢測出MRSA菌株，將加重對人類健康的威脅尤其是免疫力較低的嬰幼兒。

據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國每年約有10萬 t抗菌藥物用于養(yǎng)殖業(yè)[29]。隨著抗生素在動物養(yǎng)殖中的大量使用，細(xì)菌為適應(yīng)新的環(huán)境，耐藥性不斷增強(qiáng)。在本研究中，100.0%的菌株都至少耐受4 種抗生素，都表現(xiàn)為多重耐藥，該結(jié)果高于Xing Xiaonan[10]和Papadopoulos[15]等的報(bào)道。因此，相關(guān)部門要嚴(yán)格控制抗生素的使用，防止濫用現(xiàn)象。本研究從罐奶分離的菌株耐藥性比較單一，除對β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥外，對其他抗生素均敏感。該結(jié)果提示在抗生素使用時，要防止同種抗生素的重復(fù)使用，以免長期使用造成細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生。除此之外，分離于工廠設(shè)備和落地粉的菌株有相同的耐藥譜，且有相同的分子型。因此懷疑可能由于設(shè)備定植金黃色葡萄球菌，進(jìn)而造成乳粉污染。而這3 株分離株除了對β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥外，對ERY和TET抗生素有較強(qiáng)的耐藥性。ERY和TET這2 種抗生素在動物養(yǎng)殖及人類治療中的大量使用[30-31]，可能是造成菌株耐藥性的關(guān)鍵。此外，分離于加工人員的2 株菌，有不同的耐藥譜。研究表明，20%的人群是金黃色葡萄球菌的持續(xù)攜帶者，而30%左右的人群是間歇性的攜帶者[32]。因此，加工設(shè)備和加工人員工作服定期的消毒清洗及加工人員的規(guī)范操作是保障乳粉不被污染的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

對分離株進(jìn)行SPA、MLST和PFGE分型發(fā)現(xiàn)，所有的菌株共表現(xiàn)為4 種分型，主要為ST1-D-t127（50.0%，3/6，ST-PT-SPA分型），其次為ST5-A-t002，ST5-B-t548和ST188-C-t189（16.7%，1/6）。其中3 株ST1-D-t127型菌株，2 株來自加工設(shè)備，1 株來自落地粉，且這3 株菌在同一聚簇中，說明在羊奶粉加工過程中，存在不同操作環(huán)節(jié)的交叉污染。此外，有研究報(bào)道稱ST1-t127型菌株是乳品中最常見的分子型菌株[15]，本研究也證實(shí)了這一點(diǎn)。本研究在加工人員樣本中分離到1 株ST5-t002型菌株，根據(jù)現(xiàn)有報(bào)道ST5-t002型菌株主要定植于醫(yī)院和社區(qū)中[33]，很少有在乳粉中分離的報(bào)道，但其高耐藥和攜帶較多的新型腸毒素基因，一旦該類型菌株在乳粉中傳播，將會給嬰幼兒健康造成巨大威脅。本研究在加工人員中也其分離到1 株ST5型菌株，但該菌株SPA型為t548，該類型菌株主要存在動物食品中[34]，該結(jié)果也說明在乳粉的加工過程中可能存在動物源菌株的入侵。此外，在罐奶中分離到1 株ST188-t189型菌株，該類型菌株主要分離于食品及食物中毒樣本中[35]。綜上所述，需要注意對人源和動物源菌株的防治。重要的是，有研究顯示一些經(jīng)巴氏殺菌處理的金黃色葡萄球菌在乳粉保質(zhì)期內(nèi)可以恢復(fù)活性[1]，這可能會對消費(fèi)者構(gòu)成巨大威脅。因此，羊乳粉在加工過程中，一定要注意加工設(shè)備的清洗以及加工人員的消毒。

本次檢測結(jié)果顯示，羊乳粉加工過程中的罐奶、加工設(shè)備、落地粉及加工人員依舊是加工鏈條中金黃色葡萄球菌的重要來源。此外，分離到的金黃色葡萄球菌耐藥性較強(qiáng)，分子型單一且毒素基因攜帶率較高。雖然在成品中沒有分離到金黃色葡萄球菌，不能忽視其產(chǎn)生的耐熱毒素對乳粉的污染。因此，加強(qiáng)奶源地、加工環(huán)節(jié)及加工人員的規(guī)范管理，有針對地對關(guān)鍵污染環(huán)節(jié)進(jìn)行金黃色葡萄球菌的清除非常必要。