申亞輝,馬艷華

目前，生殖系統(tǒng)疾病(reproductive system diseases,RSD)已經(jīng)成為威脅女性生殖健康的重要病因。隨著科研工作的不斷深入，發(fā)現(xiàn)生殖系統(tǒng)細(xì)胞的增殖與分化失衡是引起RSD的重要機(jī)制。有研究表明G蛋白偶聯(lián)受體30(G protein coupled receptor 30,GPR30)/表皮生長(zhǎng)因子受體(epithelial growth factor receptor，EGFR)信號(hào)通路的異常會(huì)影響細(xì)胞的增殖與分化等生物學(xué)功能，因此GPR30/EGFR信號(hào)通路可能影響RSD的進(jìn)程，本文將對(duì)GPR30/EGFR信號(hào)通路近年的相關(guān)研究做一簡(jiǎn)要綜述。

1 G蛋白偶聯(lián)受體30/表皮生長(zhǎng)因子受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的結(jié)構(gòu)組成

雌激素調(diào)控了女性生殖系統(tǒng)和第二性征的發(fā)育過(guò)程，雌激素受體α(estrogen receptor，ERα)和雌激素受體β(estrogen receptor,ERβ)是雌激素經(jīng)典受體的兩種主要類型，兩者均屬于甾體激素受體，定位于細(xì)胞漿和細(xì)胞核內(nèi)。雌激素進(jìn)入細(xì)胞同ERα和ERβ發(fā)生特異性結(jié)合，在細(xì)胞核中通過(guò)調(diào)控目的基因的表達(dá)而產(chǎn)生相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)，該過(guò)程耗時(shí)較長(zhǎng)。雌激素也具備一種不依賴ERα和ERβ的快速非經(jīng)典基因組效應(yīng)，介導(dǎo)該過(guò)程的是一種位于細(xì)胞膜上的新型雌激素受體——GPR30分子[1]，當(dāng)雌激素與GPR30分子發(fā)生特異性結(jié)合后，可以通過(guò)GPR30/EGFR信號(hào)通路在數(shù)秒內(nèi)產(chǎn)生生理應(yīng)答效應(yīng)[2]。GPR30/EGFR信號(hào)通路的核心分子主要包括GPR30、EGFR、促分裂原活化的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPK)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)及絲氨酸/蘇氨酸激酶(serine/threonine kinase，Akt)。

1.1 G蛋白偶聯(lián)受體30的基本結(jié)構(gòu)和功能

人類的GPR30分子基因位于染色體7p22.3上，有4個(gè)轉(zhuǎn)錄剪接變體編碼，其蛋白結(jié)構(gòu)含有375個(gè)氨基酸分子，分子量約為40K～50KDa。通過(guò)嗜水性分析，結(jié)果顯示GPR30分子具有7次跨膜疏水區(qū)，屬于G蛋白偶聯(lián)跨膜受體家族中的一員。其跨膜區(qū)含有6個(gè)彼此交替的細(xì)胞內(nèi)外袢，該結(jié)構(gòu)由20～26個(gè)氨基酸殘基組成[3]。GPR30分子在人體的多個(gè)器官呈現(xiàn)為高表達(dá)狀態(tài)，例如卵巢、子宮、心臟和肺臟等。當(dāng)其與雌激素結(jié)合后可產(chǎn)生快速非經(jīng)典基因組效應(yīng)，傳遞外界信號(hào)分子與神經(jīng)信息，活化下游不同的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，產(chǎn)生相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)。

1.2 表皮生長(zhǎng)因子受體的基本結(jié)構(gòu)和功能

EGFR分子的編碼基因位于染色體7p12上，它是一種由1 186個(gè)氨基酸組成的受體型酪氨酸跨膜糖蛋白,EGFR分子是該蛋白家族中首個(gè)被發(fā)現(xiàn)的分子，其家族成員主要包括EGFR/ErbB1(HER1)、ErbB2(HER2)、ErbB3(HER3)和ErbB4(HER4)。這4種分子可以相互形成共28種同源或異源二聚體，其中較為特殊的是ErbB2，它的分子結(jié)構(gòu)不包含配體結(jié)合域，機(jī)體內(nèi)也不存在可以直接激活它的配體，但ErbB2卻是和其他分子形成異源二聚體的首選分子[4]。EGFR可以與表皮生長(zhǎng)因子(epithelial growth factor,EGF)、親肝素結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子(heparin-binding EGF-like growth factor,HB-EGF)、雙調(diào)蛋白(amphiregulin,AR)等11種配體分子相結(jié)合，形成同源或異源二聚體，隨后發(fā)生構(gòu)象改變并與腺嘌呤核苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)相結(jié)合，促進(jìn)胞內(nèi)酪氨酸激酶區(qū)的活化進(jìn)程，誘導(dǎo)下游多種信號(hào)通路的激活，將生物信號(hào)從細(xì)胞外轉(zhuǎn)化到細(xì)胞內(nèi)[5]。

1.3 絲裂原活化蛋白激酶系統(tǒng)的基本結(jié)構(gòu)和功能

MAPK是一類普遍存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的蛋白激酶，它的底物磷酸化位點(diǎn)均為P/L-X-T/S-P。MAPK主要包括細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1(extracellular signal-regulated kinase 1,ERK1)和2、C-Jun N端激酶/應(yīng)激活化蛋白激酶(c-jun n-terminal kinase 1-3/stress activated protein kinases,JNK 1-3/SAPK)、p38 isoforms(p38)和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶5(extracellular signal-regulated kinase 5,ERK 5)。根據(jù)分子種類的不同，MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路主要被分為Ras/ERK信號(hào)通路、JNK信號(hào)通路與p38信號(hào)通路，其中ERK信號(hào)通路主要介導(dǎo)生長(zhǎng)因子相關(guān)刺激引發(fā)的細(xì)胞反應(yīng)，后兩者與細(xì)胞的應(yīng)激與炎癥反應(yīng)有關(guān)[6]。MAPK信號(hào)通路可以在生長(zhǎng)因子、炎癥及壓力等因素的刺激下被激活，而引發(fā)酶促級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最后可通過(guò)活化細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞骨架蛋白以及生物酶類等多種底物，對(duì)機(jī)體細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等周期以及炎癥反應(yīng)等過(guò)程發(fā)揮調(diào)控作用[7]。

1.4 磷脂酰肌醇-3-激酶/絲氨酸/蘇氨酸激酶的基本結(jié)構(gòu)和功能

作為原癌基因家族中的一員，PI3K是一種細(xì)胞內(nèi)的磷脂酞肌醇激酶。PI3K由一個(gè)p110催化亞單位和一個(gè)p85調(diào)節(jié)亞單位組成，兩者的相對(duì)分子質(zhì)量分別為110kDa和85kDa。P110具有磷脂酰肌醇激酶活性和蛋白激酶活性，依據(jù)脂質(zhì)底物的特異性和同源性將其分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 共3種亞型。當(dāng)機(jī)體在多種信號(hào)刺激下，可以激活PI3K分子，后者可將底物磷脂酰肌醇4、5-二磷酸(phosphatidylinositol 4、5-bisphosphate,PIP2)催化轉(zhuǎn)變?yōu)榱字＜〈?、4、5-三磷酸(phosphatidylinositol 3、4、5-trisphosphate,PIP3)。PIP3是一種細(xì)胞內(nèi)重要的第二信使，參與調(diào)控細(xì)胞下游多項(xiàng)生理活動(dòng)[8]。

Akt是PI3K信號(hào)通路下游一個(gè)重要的效應(yīng)分子靶點(diǎn)，相對(duì)分子質(zhì)量為60kDa，又稱為蛋白激酶B(protein kinase B，PKB)。在哺乳動(dòng)物的細(xì)胞內(nèi)，Akt蛋白家族包含Akt1/PKBα、Akt2/PKBβ、Akt3/PKBγ共3種亞型。雖然3者編碼基因不同，但是它們?cè)诎被崤帕猩嫌屑s80%的同源性，并且在結(jié)構(gòu)上均有3個(gè)不同的功能區(qū)，分別為蛋白氨基末端的血小板-白細(xì)胞C激酶底物同源結(jié)構(gòu)域(pleckstrin homology domain，PHD)、中心催化結(jié)構(gòu)域、蛋白羧基末端的調(diào)節(jié)區(qū)。蛋白羧基調(diào)節(jié)區(qū)包含約40個(gè)氨基酸序列，序列中的疏水基是蛋白激酶的重要特征。該區(qū)域中Ser124和Thr450磷酸化是Akt完全活化的必須條件，兩者的磷酸化可以引起級(jí)聯(lián)反應(yīng)，廣泛參與調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化、旁分泌和凋亡等多種生理病理過(guò)程[9]。

2 G蛋白偶聯(lián)受體30/表皮生長(zhǎng)因子受體信號(hào)通路的調(diào)節(jié)機(jī)制

2.1 G蛋白偶聯(lián)受體30/表皮生長(zhǎng)因子受體/絲原活化蛋白激酶信號(hào)通路的調(diào)節(jié)機(jī)制

雌激素或其它刺激因子同GPR30分子發(fā)生特異性結(jié)合后，可以活化與該分子相偶聯(lián)的G蛋白。激活的G蛋白把位于膜內(nèi)的鳥(niǎo)嘌呤核苷二磷酸(guanosine diphosphate,GDP)交換成鳥(niǎo)嘌呤核苷三磷酸(guanosine triphosphate,GTP)，導(dǎo)致與GTP結(jié)合的Gβγ二聚體和Gα蛋白(Gα) 亞單位解離。游離于細(xì)胞中的Gβγ二聚體可以誘發(fā)其下游Src家族酪氨酸激酶(sarcoma family tyrosine kinases，SFKs)的活化過(guò)程，進(jìn)而促進(jìn)Src銜接蛋白的第317位酪氨酸殘基的磷酸化，后者可以激活間質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metallo proteinase,MMP)，而被激活的MMP可以切割肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子(heparin-binding EGF-like growth factor,HB-EGF)，促使其從細(xì)胞表面的釋放發(fā)生。被釋放的HB-EGF可作為配體反式激活EGFR使其形成異源二聚體。隨后EGFR發(fā)生自身活化，在與ATP發(fā)生特異性結(jié)合的情況下，快速激活MAPK系統(tǒng)，之后通過(guò)ERK分子途徑上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子c-fos的表達(dá)，調(diào)控細(xì)胞核中相應(yīng)基因的表達(dá)。該通路的持續(xù)激活可影響細(xì)胞增殖等生理活動(dòng)，甚至引發(fā)癌變的發(fā)生[10]。

2.2 G蛋白偶聯(lián)受體30/表皮生長(zhǎng)因子受體/磷脂酰肌醇-3-激酶信號(hào)通路的激活機(jī)制

活化的EGFR異源二聚體除了通過(guò)MAPK途徑發(fā)揮作用之外，也可以利用PI3K分子途徑影響細(xì)胞生理活動(dòng)。EGFR異源二聚體通過(guò)激活PI3K分子誘發(fā)PIP3在細(xì)胞膜上聚集，接著將具有抗凋亡和促進(jìn)細(xì)胞增殖作用的PKB/Akt通過(guò)PH結(jié)構(gòu)域募集到膜磷脂上活化?；罨腁kt對(duì)內(nèi)皮型一氧化氮合酶活性具有正相關(guān)作用，通過(guò)誘導(dǎo)一氧化氮(NO)的產(chǎn)生參與細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖，然而EGFR的反式激活是GPR30介導(dǎo)PI3K活化的前提[11]。隨著對(duì)分子機(jī)制研究的深入，發(fā)現(xiàn)活化的EGFR異源二聚體也可以動(dòng)員細(xì)胞內(nèi)游離的Ca2+，以Ca2+為介導(dǎo)參與到細(xì)胞的增殖發(fā)育過(guò)程。

3 G蛋白偶聯(lián)受體30/表皮生長(zhǎng)因子受體信號(hào)通路對(duì)生殖系統(tǒng)的影響

3.1 G蛋白偶聯(lián)受體30/表皮生長(zhǎng)因子受體信號(hào)通路與卵巢

卵巢是雌性動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生卵細(xì)胞與分泌性激素的一對(duì)性腺體。在對(duì)倉(cāng)鼠卵巢發(fā)育的研究中發(fā)現(xiàn)，倉(cāng)鼠卵巢中顆粒細(xì)胞和支持細(xì)胞的細(xì)胞膜表面存在著大量的GPR30分子，并且其表達(dá)過(guò)程受促性腺激素的調(diào)節(jié)；當(dāng)敲除雌性倉(cāng)鼠的GPR30基因之后，小鼠的始基卵泡無(wú)法成熟，說(shuō)明GPR30/EGFR信號(hào)通路可能參與了倉(cāng)鼠始基卵泡的形成過(guò)程[12]。大多數(shù)雌性哺乳動(dòng)物在胎兒時(shí)期，卵母細(xì)胞就進(jìn)入了減數(shù)分裂周期，之后停滯于減數(shù)分裂第一次中期(雙線期)。當(dāng)機(jī)體進(jìn)入青春期后，在促性腺激素、主要為黃體生成素(luteinizing hormone，LH)的調(diào)節(jié)下，卵泡內(nèi)被阻滯的卵母細(xì)胞重新進(jìn)入分裂周期。Fan等[13]在重啟分裂周期的研究中，發(fā)現(xiàn)卵巢中顆粒細(xì)胞內(nèi)的MAPK信號(hào)通路介導(dǎo)了促性腺激素的生理功能，調(diào)控了卵母細(xì)胞的成熟和排卵的過(guò)程。作為對(duì)比，該實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)敲除了新生小鼠的ERK1/2基因，之后發(fā)現(xiàn)此類小鼠的卵母細(xì)胞減數(shù)分裂恢復(fù)、排卵等生理過(guò)程均存在重大缺陷。學(xué)者們對(duì)不同物種的卵母細(xì)胞減數(shù)分裂過(guò)程進(jìn)行研究，證實(shí)GPR30/EGFR信號(hào)通路參與了維持哺乳動(dòng)物、斑馬魚(yú)的卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯的發(fā)育過(guò)程，然而其具體機(jī)制仍不明朗[14-15]。直到近段時(shí)間，研究發(fā)現(xiàn)GPR30/EGFR信號(hào)通路在雌二醇(estradiol,E2)刺激下活化后，會(huì)引發(fā)MAPK激酶依賴的連接蛋白43(connexin 43,CX 43)磷酸化，后者引起山羊卵冠丘復(fù)合體縫隙連接通透性下降，從而調(diào)節(jié)山羊卵母細(xì)胞減數(shù)分裂的生理過(guò)程，然而該活動(dòng)的具體機(jī)制還需進(jìn)一步深入研究[16]。

3.2 G蛋白偶聯(lián)受體30/表皮生長(zhǎng)因子受體信號(hào)通路與子宮

子宮作為女性產(chǎn)生月經(jīng)和孕育胎兒的器官，GPR30/EGFR信號(hào)通路在子宮的發(fā)育和功能作用中發(fā)揮了十分重要的作用。Dennis等[17]利用GPR30選擇性激動(dòng)劑(G-1)處理小鼠，結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)小鼠的子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞增殖效率明顯提高；在對(duì)比實(shí)驗(yàn)中，使用GPR30選擇性抑制劑(G-15)處理小鼠，結(jié)果發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)小鼠的子宮內(nèi)膜上皮增殖的效應(yīng)降低了50%，該實(shí)驗(yàn)證明了GPR30/EGFR信號(hào)通路參與了雌激素誘發(fā)小鼠子宮內(nèi)膜上皮增殖的生理學(xué)效應(yīng)。子宮作為孕育胎兒的器官，子宮容受性是指子宮內(nèi)膜接納胚胎進(jìn)行定位、黏附以及侵入子宮內(nèi)膜的能力。Dymara-Konopka[18]研究發(fā)現(xiàn)在雌激素介導(dǎo)下，被激活的GPR30/EGFR信號(hào)通路可以通過(guò)PI3K-Akt途徑促進(jìn)NO的合成。NO是一種血管舒張劑，可以通過(guò)調(diào)節(jié)胎盤血管反應(yīng)性，降低其血管阻力和強(qiáng)化滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)能力等生理過(guò)程，在促進(jìn)胚胎存活和胎盤營(yíng)養(yǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)等方面發(fā)揮著十分重要的作用[19]。因此可以推斷GPR30/EGFR信號(hào)通路以NO為介導(dǎo)來(lái)舒張子宮血管，促進(jìn)子宮內(nèi)膜螺旋小動(dòng)脈的形成與植入，誘發(fā)子宮內(nèi)膜的蛻膜化改變，提高子宮內(nèi)膜的容受性。Feng等[20]對(duì)滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)使用G-1激活GPR30/EGFR信號(hào)通路，能夠強(qiáng)化妊娠滋養(yǎng)層細(xì)胞的增殖、侵襲能力，同時(shí)可以抑制滋養(yǎng)細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)胚胎植入，影響機(jī)體妊娠結(jié)局。

3.3 G蛋白偶聯(lián)受體30/表皮生長(zhǎng)因子受體信號(hào)通路與胚胎

Yu等[21]使用G-15處理妊娠小鼠的胚胎，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其囊胚與子宮壁的親和力發(fā)生顯著下降，影響小鼠的胚胎著床率，因此可以得出結(jié)論：GPR30/EGFR信號(hào)通路介導(dǎo)的雌激素快速效應(yīng)可能影響了小鼠囊胚著床過(guò)程。Zhang等[22]在后續(xù)的研究中發(fā)現(xiàn)，GPR30/EGFR信號(hào)通路對(duì)小鼠胚胎發(fā)育的影響主要與細(xì)胞骨架蛋白的聚集有關(guān)。后者可以誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)整合素活性發(fā)生變化以及誘發(fā)小鼠囊胚在子宮內(nèi)膜中的精確著床，從而調(diào)節(jié)胚胎的發(fā)育過(guò)程。在正常妊娠中，滋養(yǎng)層細(xì)胞發(fā)揮著侵入子宮內(nèi)膜的作用，其數(shù)量和功能與維持胚胎正常發(fā)育密切相關(guān)。在滋養(yǎng)細(xì)胞的發(fā)育過(guò)程中，胞內(nèi)的B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)蛋白參與了維持其增殖-凋亡平衡的調(diào)節(jié)過(guò)程。研究者利用雌激素或G-1來(lái)激活滋養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)GPR30/EGFR信號(hào)通路，然后使用Western blot分析技術(shù)監(jiān)測(cè)，結(jié)果顯示Bcl-2蛋白的表達(dá)效率明顯升高，同時(shí)滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖與侵襲能力得到極大促進(jìn)；而在對(duì)比實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)GPR30/EGFR信號(hào)通路受到抑制時(shí)，Bcl-2蛋白的轉(zhuǎn)錄效率也顯著降低，后續(xù)引發(fā)滋養(yǎng)細(xì)胞的大量凋亡，不僅引發(fā)胚胎侵襲能力下降，而且還破壞了胎盤絨毛屏障完整性，導(dǎo)致胚胎停育[23-25]。然而針對(duì)GPR30/EGFR信號(hào)通路在胚胎發(fā)育中的具體分子機(jī)制，以及其在人類生殖系統(tǒng)中的作用還需要更深入的研究。

4 G蛋白偶聯(lián)受體30/表皮生長(zhǎng)因子受體信號(hào)通路與女生殖系統(tǒng)疾病

4.1 G蛋白偶聯(lián)受體30/表皮生長(zhǎng)因子受體信號(hào)通路與卵巢癌

卵巢癌是所有婦科惡性腫瘤中最常見(jiàn)的一種，該病在發(fā)病前期幾乎無(wú)明顯癥狀，因此大多數(shù)患者幾乎是在晚期才被確診，這嚴(yán)重影響了卵巢癌患者的治療。在GPR30/EGFR信號(hào)通路對(duì)卵巢癌影響的研究中發(fā)現(xiàn)，GPR30分子在卵巢癌早期的表達(dá)活性顯著高于晚期，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；并且在對(duì)不同惡性程度的卵巢癌患者的統(tǒng)計(jì)中也顯示，GPR30分子在惡性程度高的卵巢癌組織中的表達(dá)活力低于良性和非惡性卵巢腫瘤組織。人卵巢腺癌細(xì)胞-3(ovarian adenocarcinoma cell-3，OVCAR-3)是一種ERα(-)/GPR30(+)人卵巢癌細(xì)胞系，具有高表達(dá)GPR30分子的能力，當(dāng)使用G-1處理此系細(xì)胞，結(jié)果顯示其細(xì)胞增殖周期被阻滯于亞G1期，其生物活性受到顯著抑制，以上研究表明GPR30/EGFR信號(hào)通路對(duì)于卵巢癌的發(fā)生與發(fā)展起到負(fù)相關(guān)效應(yīng)[26]。

然而,另外的一些研究得到不同的結(jié)論，馬焱等[27]研究證實(shí)，GPR30異常表達(dá)與卵巢癌病理類型和卵巢腫瘤的分期也存在關(guān)聯(lián)，例如，在卵巢上皮腫瘤(epithelial ovarian cancers,EOCs)中，漿液性腫瘤中GPR30表達(dá)強(qiáng)度明顯高于黏液性。Smith等[28]在對(duì)89例卵巢癌患者的研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，GPR30分子在“高風(fēng)險(xiǎn)”的EOCs內(nèi)的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于“低風(fēng)險(xiǎn)”的EOCs；并且GPR30分子高表達(dá)的EOCs患者5年生存率為33.3%，與GPR30分子低表達(dá)的EOCs患者5年生存率(72.4%)存在著明顯差異。為了解其內(nèi)在分子調(diào)節(jié)機(jī)制，在卵巢癌細(xì)胞株(OVCAR 5)的體外實(shí)驗(yàn)中，研究者使用E2和G-1處理此類細(xì)胞，經(jīng)過(guò)監(jiān)測(cè)證實(shí)，E2和G-1可以通過(guò)GPR30/EGFR/MAPK途徑，激活轉(zhuǎn)錄因子c-fos，促進(jìn)癌細(xì)胞株的增殖、遷移與侵襲[29]。關(guān)于此類矛盾的研究結(jié)果，仍需進(jìn)一步深入研究。

此外在GPR30分子對(duì)卵巢癌預(yù)后的監(jiān)測(cè)功能的研究中表明，細(xì)胞核中的GPR30預(yù)測(cè)卵巢癌患者的總體生存率和5年無(wú)進(jìn)展生存率較差，而且細(xì)胞質(zhì)中GPR30的表達(dá)無(wú)法預(yù)測(cè)卵巢癌患者的預(yù)后。研究還表明，GPR30的表達(dá)是影響卵巢癌患者整體生存的獨(dú)立預(yù)后因素，而對(duì)于患者5年無(wú)進(jìn)展生存率無(wú)預(yù)測(cè)性[30]。對(duì)此種結(jié)果仍有兩個(gè)主要問(wèn)題需要解答：GPR30在核內(nèi)聚集的機(jī)制和細(xì)胞核中GPR30的功能。

4.2 G蛋白偶聯(lián)受體30/表皮生長(zhǎng)因子受體信號(hào)通路與子宮內(nèi)膜癌

根據(jù)子宮內(nèi)膜癌(endometrial cancer,EC)的組織學(xué)分類和肌層浸潤(rùn)程度，可以將其分I型(雌激素依賴型)和Ⅱ型(雌激素非依賴型)。I型EC發(fā)病的最重要因素是持續(xù)暴露于內(nèi)源性或外源性雌激素刺激，與I型EC相比，Ⅱ型EC的主要發(fā)病原因是基因突變，并且其臨床表現(xiàn)和預(yù)后都較差。但是也有研究發(fā)現(xiàn)，一些Ⅱ型的EC可能部分依賴雌激素，同I型EC可能具有相似的發(fā)病機(jī)制[31]。當(dāng)雌激素與GPR30分子發(fā)生特異性結(jié)合后，可以通過(guò)活化GPR30/EGFR信號(hào)通路，參與EC的病理調(diào)節(jié)過(guò)程[32]。

Zhang等[33]通過(guò)活檢發(fā)現(xiàn)，GPR30分子在EC組織中的表達(dá)活力明顯高于正常子宮內(nèi)膜，并且其表達(dá)效率同病程分期、病理學(xué)分級(jí)和肌層浸潤(rùn)深度有關(guān)。該分子在Ⅰ型和Ⅱ型EC中的表達(dá)相似，且絕經(jīng)期間無(wú)差異。2,2′,4,4′-四溴二苯醚(2,2′,4,4′-tetrabromodiphenyl ether,BDE-47)是一種雌激素干擾物，具有GPR30激動(dòng)劑的作用。Zhang等[34]在其分子機(jī)制的研究中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)使用E2或者BDE-47處理GPR30(+)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株(ishikawa-BDE-47、HEC-1B-BDE-47)，通過(guò)免疫染色技術(shù)監(jiān)測(cè)顯示，被激活的GPR30分子通過(guò)MMP-EGFR途徑來(lái)活化MAPK(ERK)系統(tǒng)，結(jié)果出現(xiàn)ishikawa-BDE-47、HEC-1B-BDE-47的增殖與浸潤(rùn)能力得到極大地強(qiáng)化。

磷酸酶及張力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homologuedeleted on chromosome ten,PTEN)是一種抑癌基因，它也參與了EC的發(fā)病過(guò)程，在對(duì)EC細(xì)胞株的(HEC-1A、ishikawa)研究中，利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示PTEN下調(diào)對(duì)人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系-1A(human endometrial carcinoma-1A,HEC-1A)和ishikawa細(xì)胞的凋亡有明顯的抑制作用，而PTEN的過(guò)度表達(dá)則促進(jìn)了細(xì)胞的凋亡[35]。Ignatov等[36]發(fā)現(xiàn)木黃酮(gankyrin)也能夠激活GPR30分子，從而影響GPR30/EGFR信號(hào)通路對(duì)EC的調(diào)控效用。在近期的研究中證實(shí)，木黃酮在EC組織中高表達(dá)，并且與PTEN表達(dá)模式呈負(fù)相關(guān)；當(dāng)木黃酮蛋白發(fā)生過(guò)表達(dá)時(shí)，通過(guò)PI3K/AKT途徑促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白D1的轉(zhuǎn)錄過(guò)程，從而提高EC細(xì)胞的增殖效率，研究提示該過(guò)程與E2驅(qū)動(dòng)GPR30/EGFR信號(hào)通路有關(guān)[36]。綜上所述，GPR30/EGFR信號(hào)通路調(diào)節(jié)了EC發(fā)生與發(fā)展的病理過(guò)程，其可能成為未來(lái)治療EC的重要靶向因子。

4.3 G蛋白偶聯(lián)受體30/表皮生長(zhǎng)因子受體信號(hào)通路與子宮肌瘤

子宮肌瘤是女性生殖系統(tǒng)中最為常見(jiàn)的一種良性腫瘤，其病理機(jī)制主要是子宮平滑肌細(xì)胞的異常增生，臨床癥狀以經(jīng)期延長(zhǎng)、經(jīng)量增多、下腹疼痛甚至出現(xiàn)貧血為主，嚴(yán)重者還可能喪失生育能力。學(xué)者Tian[37]通過(guò)利用免疫組化染色技術(shù)，對(duì)正常的子宮平滑肌組織和子宮肌瘤組織進(jìn)行對(duì)比測(cè)定，結(jié)果顯示后者中的GPR30表達(dá)顯著高于前者，表明過(guò)表達(dá)的GPR30分子引起子宮局部高雌激素狀態(tài)，促進(jìn)子子宮肌瘤的發(fā)生。

Liu等[38]從41～49歲女性體內(nèi)提取出子宮肌瘤細(xì)胞(ht-utLM)和正常的子宮平滑肌細(xì)胞，利用氯化鎘(CdCl2，金屬雌激素)和G-15處理以上被提出的細(xì)胞，使用Western blot分析技術(shù)與免疫組化技術(shù)監(jiān)測(cè)GPR30與其下游各分子表達(dá)情況，并且觀察平滑肌細(xì)胞的增殖與分裂情況。通過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：雌激素依賴GPR30對(duì)子宮肌瘤增殖的促進(jìn)作用可能是通過(guò)GPR30/EGFR信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的，活化的GPR30分子可以促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)Src的磷酸化，后者通過(guò)激活MMP2/9-EGFR-MAPK/ERK途徑增強(qiáng)子宮平滑肌瘤的增殖效應(yīng)，促進(jìn)肌瘤的生長(zhǎng)與浸潤(rùn)。

由于環(huán)境污染不斷加重，近些年關(guān)于環(huán)境雌激素引發(fā)癌癥的病例報(bào)道屢見(jiàn)不鮮。作為具有代表性的環(huán)境雌激素之一，雙酚A(bishpenol A，BPA)廣泛存在于塑料等制品中，人群攝入的概率不斷增加，嚴(yán)重威脅人類的身體健康。學(xué)者Li 等[39]使用BPA處理子宮肌瘤細(xì)胞，隨后通過(guò)Western blot法和Real-time PCR法監(jiān)測(cè)細(xì)胞內(nèi)GPR30/EGFR信號(hào)通路分子蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果顯示組織中GPR30和EGFR的表達(dá)水平明顯升高，并且在BPA作用下子宮平滑肌瘤細(xì)胞的增殖效應(yīng)顯著強(qiáng)化，研究者認(rèn)為這種效應(yīng)可能與GPR30/EGFR信號(hào)通路以及其下游MAPK/ERK/c-fos分子途徑的激活有關(guān)，說(shuō)明其與E2誘發(fā)子宮肌瘤可能具有相同的分子機(jī)制。

4.4 G蛋白偶聯(lián)受體30與子宮內(nèi)膜異位癥

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，EMT)是指具有生長(zhǎng)活性的子宮內(nèi)膜細(xì)胞侵入子宮內(nèi)膜以外的組織中而形成的一種的婦科疾病，最常見(jiàn)的部位為卵巢與宮底韌帶，臨床主要以進(jìn)行性加重痛經(jīng)和性交痛為癥狀。根據(jù)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，大約40%～50%的EMT患者存在生育問(wèn)題[40]。

Plante等[41]對(duì)GPR30/EGFR信號(hào)通路在EMT中的調(diào)控作用進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)GPR30分子在子宮內(nèi)膜中呈現(xiàn)周期性表達(dá)，其中子宮內(nèi)膜增殖期表達(dá)最高。此外，相比起正常人的子宮內(nèi)膜，EMT患者的正常內(nèi)膜和異位的子宮內(nèi)膜中GPR30的表達(dá)均明顯過(guò)高。根據(jù)已知GPR30/EGFR信號(hào)通路具有促細(xì)胞增殖效應(yīng)，這些信息提示GPR30/EGFR信號(hào)通路參與了EMT的發(fā)病過(guò)程。

在其分子機(jī)制的研究中，許多學(xué)者都把研究重點(diǎn)集中在低氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)上，認(rèn)為GPR30/EGFR信號(hào)通路參與調(diào)控了機(jī)體內(nèi)HIF-1α的動(dòng)態(tài)平衡，該分子可以誘發(fā)EMT的內(nèi)膜異位與異常血管生成[42]。HIF-1α分子對(duì)于氧氣濃度高度敏感，當(dāng)氧氣濃度正常時(shí)，HIF-1α在蛋白酶作用下會(huì)發(fā)生大量降解；反之，當(dāng)氧氣濃度大幅度降低時(shí)，HIF-1α分子就出現(xiàn)穩(wěn)定聚集，進(jìn)入細(xì)胞核從而啟動(dòng)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和MMP-9靶基因的大量轉(zhuǎn)錄，其表達(dá)產(chǎn)物是EMT細(xì)胞病理侵襲和血管生成的關(guān)鍵[43]。而在GPR30/EGFR信號(hào)通路與HIF-1α分子間聯(lián)系的研究中，研究者通過(guò)收集正常和異位內(nèi)膜標(biāo)本，隨后將收集到的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞(endometrial stromal cells,ESCs)在體外分離培養(yǎng)。在實(shí)驗(yàn)中分別利用E2或G-1處理ESCs，之后利用RT-PCR技術(shù)監(jiān)測(cè)GPR30和HIF-1α分子的表達(dá)情況，結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)細(xì)胞中這兩種分子表達(dá)顯著增加，并且ESCs的遷移和血管生成能力得到極大強(qiáng)化。作為對(duì)比，當(dāng)使用G-15之后，這種效應(yīng)則被阻滯[44]。然而在GPR30/EGFR信號(hào)通路如何激活HIF-1α分子的具體機(jī)制仍不明朗，仍需要進(jìn)一步深入研究。

5 總結(jié)與展望

近年來(lái)，隨著科研工作者的不斷努力，GPR30/EGFR信號(hào)通路相關(guān)結(jié)構(gòu)、功能以及調(diào)節(jié)機(jī)制的研究得以不斷深入。研究證實(shí)生殖系統(tǒng)發(fā)育和RSD與GPR30/EGFR信號(hào)通路及其調(diào)解網(wǎng)絡(luò)之間存在密切聯(lián)系，這也更加深刻說(shuō)明了GPR30/EGFR信號(hào)通路在機(jī)體正常發(fā)育與疾病進(jìn)程中的重要性。然而我們也不得不意識(shí)到GPR30/EGFR信號(hào)通路仍然存在著諸多的研究難題：GPR30/EGFR信號(hào)通路的具體生理活化機(jī)制；各類生物化學(xué)因子如何影響GPR30/EGFR信號(hào)通路的活性；GPR30/EGFR信號(hào)通路如何調(diào)控生殖系統(tǒng)的發(fā)生與發(fā)育過(guò)程；GPR30/EGFR信號(hào)通路在RSD的病程中所發(fā)揮的作用。這些疑難問(wèn)題的解決，對(duì)于希望經(jīng)由GPR30/EGFR信號(hào)通路而治愈RSD的治療策略至關(guān)重要。相信伴隨著每一名醫(yī)學(xué)科研人員與臨床工作者的不斷努力，RSD嚴(yán)重影響女性生殖健康的困境一定會(huì)被打破，從而能夠?yàn)楦囡柺懿⊥凑勰サ幕颊邘?lái)康復(fù)的曙光。