龔 亞，李 敏，樊 莉，曹 健

鹽酸達(dá)克羅寧為起效迅速、作用久、不良反應(yīng)小、安全系數(shù)高的局部麻醉藥[1-3]，臨床主要用于黏膜的表面麻醉、皮膚鎮(zhèn)痛和止癢等?，F(xiàn)行版軍隊(duì)制劑和醫(yī)院制劑規(guī)范均收載了鹽酸達(dá)克羅寧乳膏[4-5]，有研究表明，鹽酸達(dá)克羅寧乳膏在配制過(guò)程中鹽酸達(dá)克羅寧與輔料存在絡(luò)合情況[6-7]，但未有研究報(bào)道其在常用溶劑中的穩(wěn)定性。通過(guò)檢索近20年相關(guān)文獻(xiàn)，涉及鹽酸達(dá)克羅寧含量測(cè)定的39篇文獻(xiàn)中，常用5種溶劑制備試驗(yàn)溶液，以甲醇、乙腈、乙醇、水、磷酸鹽緩沖液為溶劑的文獻(xiàn)數(shù)量分別為10、1、6、11和11篇。預(yù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)鹽酸達(dá)克羅寧在甲醇中穩(wěn)定性差，文獻(xiàn)中仍存在以甲醇為溶劑的情況，且缺乏相關(guān)的系統(tǒng)性探究。本實(shí)驗(yàn)選取甲醇、乙腈、無(wú)水乙醇、水、不同pH值的0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液、鹽酸達(dá)克羅寧乳膏測(cè)定中的流動(dòng)相為反應(yīng)體系，測(cè)定鹽酸達(dá)克羅寧的含量變化情況，考察其在這6類(lèi)常用溶劑中的穩(wěn)定性，為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供參考[8-9]。鹽酸達(dá)克羅寧化學(xué)結(jié)構(gòu)式，見(jiàn)圖1。

圖1 鹽酸達(dá)克羅寧化學(xué)結(jié)構(gòu)式

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 安捷倫1260型HPLC儀（檢測(cè)器為G7114A VWD，操作工作站為Chemstation，美國(guó)安捷倫）；PHS-3C型精密pH計(jì)（上海雷磁）；精密電子天平（EX225DZH OHAUS美國(guó)，ME235S Sartorius德國(guó)）。

對(duì)照品鹽酸達(dá)克羅寧（批號(hào)：100423-201102，供HPLC法測(cè)定，按C18H27NO2·HCl計(jì)，含量99.8%）購(gòu)自中檢院。原料藥鹽酸達(dá)克羅寧（批號(hào)16110501）購(gòu)自揚(yáng)子江藥業(yè)。甲醇、乙腈均為色譜級(jí)，購(gòu)自霍尼韋爾；磷酸二氫鉀、無(wú)水乙醇、磷酸均為分析純，購(gòu)自重慶川東化工；水為純化水。

1.2 HPLC測(cè)定方法[4]采用菲羅門(mén)luna色譜柱（填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，序列號(hào)為00G-4252-E0，250 mm×4.6 mm，5μm），測(cè)定波長(zhǎng)選擇282 nm，以0.02 mol/L KH2PO4溶液（H3PO4調(diào)pH至3.0）為A相、乙腈為B相，以A∶B=55∶45(V/V)分析測(cè)定，流速設(shè)定為1.0 ml/min，取10μl進(jìn)樣。

1.3 實(shí)驗(yàn)溶液的制備 分別以流動(dòng)相、甲醇、乙腈、無(wú)水乙醇、不同pH值的0.02 mol/L KH2PO4溶液（pH1.0～6.0）、純化水這6類(lèi)溶劑制備鹽酸達(dá)克羅寧試驗(yàn)溶液，使各溶液每1 ml中約含0.2 mg的鹽酸達(dá)克羅寧。各實(shí)驗(yàn)用的儲(chǔ)存溶液均密塞，以封口膜封口后立即冷藏（2～10℃）保存，每次分析前均需放至室溫。

1.4 系統(tǒng)適用性考察試驗(yàn) 取“1.3實(shí)驗(yàn)溶液的制備” 項(xiàng)下流動(dòng)相溶解的鹽酸達(dá)克羅寧溶液，按“1.2 HPLC測(cè)定方法”項(xiàng)，取10μl進(jìn)樣，記錄鹽酸達(dá)克羅寧圖譜。

1.5 不同溶劑中鹽酸達(dá)克羅寧穩(wěn)定性考察 以“1.3實(shí)驗(yàn)溶液的制備”項(xiàng)下方法制備6類(lèi)常用溶劑的鹽酸達(dá)克羅寧原料藥溶液，按“1.2 HPLC測(cè)定方法”項(xiàng)分別于0、2、4、6、8、10、12 h時(shí)連續(xù)進(jìn)樣，分別計(jì)算平均峰面積，考察鹽酸達(dá)克羅寧峰面積變化情況。要求與零點(diǎn)比較，峰面積變化不＞2%（峰面積百分比=測(cè)試點(diǎn)峰面積/零點(diǎn)峰面積×100%），否則說(shuō)明在該溶劑中不穩(wěn)定。

1.6 鹽酸達(dá)克羅寧對(duì)照品在流動(dòng)相中的長(zhǎng)期穩(wěn)定性考察[8-12]取“1.3實(shí)驗(yàn)溶液的制備”項(xiàng)下流動(dòng)相溶解的鹽酸達(dá)克羅寧對(duì)照品溶液，按“1.2 HPLC測(cè)定方法”項(xiàng)在保存的0、1、4、7、10、14、21、28、35 d時(shí)進(jìn)樣，同時(shí)記錄當(dāng)天新鮮配制的對(duì)照品溶液峰面積值，以當(dāng)天新鮮配制的對(duì)照品溶液計(jì)算對(duì)照品儲(chǔ)存溶液的標(biāo)示量?；谙率龉竭M(jìn)行計(jì)算：

式中，AN和CN表示測(cè)定當(dāng)天新鮮配制對(duì)照品溶液的峰面積和濃度；AT和CT表示測(cè)定當(dāng)天對(duì)照品儲(chǔ)存溶液的峰面積和濃度。要求對(duì)照品溶液外觀性狀無(wú)異?，F(xiàn)象，且與新鮮配制的一致；色譜圖中均未出現(xiàn)雜質(zhì)峰；每個(gè)分析測(cè)試點(diǎn)，對(duì)照品儲(chǔ)存溶液的標(biāo)示量與0 d的差異≤2.0%。

2 結(jié)果

2.1 系統(tǒng)適用性考察試驗(yàn)結(jié)果 鹽酸達(dá)克羅寧圖譜見(jiàn)圖2，鹽酸達(dá)克羅寧出峰不存在干擾，理論塔板數(shù)符合要求，陰性樣品溶液無(wú)相同色譜峰，連續(xù)進(jìn)樣5次，R SD≤2%，符合要求。

圖2 系統(tǒng)適用性HPLC圖

2.2 不同溶劑中鹽酸達(dá)克羅寧穩(wěn)定性考察結(jié)果室溫下，鹽酸達(dá)克羅寧在不同溶劑中的含量隨時(shí)間變化情況見(jiàn)圖3，由圖可以看出鹽酸達(dá)克羅寧在甲醇中8 h、無(wú)水乙醇中6 h，其降解＞2%，不穩(wěn)定；在流動(dòng)相、乙腈、純化水、不同pH值的0.02 mol/L K2PO4溶液（pH1.0～6.0）這4類(lèi)溶劑中12 h的變化量≤2%，均穩(wěn)定。考察結(jié)果表明，在方法學(xué)建立時(shí)，建議以酸性的流動(dòng)相進(jìn)行樣品制備，從而保證鹽酸達(dá)克羅寧的穩(wěn)定性。

圖3 鹽酸達(dá)克羅寧在不同溶劑中的穩(wěn)定性

2.3 鹽酸達(dá)克羅寧對(duì)照品在流動(dòng)相中的長(zhǎng)期穩(wěn)定性考察結(jié)果 鹽酸達(dá)克羅寧對(duì)照品溶液在冷藏（2～10℃）條件下密封儲(chǔ)存35 d，對(duì)照品儲(chǔ)存溶液外觀與新鮮配制的一致，未出現(xiàn)渾濁、沉淀等異常現(xiàn)象；色譜中均未出現(xiàn)雜質(zhì)峰，每個(gè)分析測(cè)試點(diǎn)，對(duì)照品溶液的含量變化見(jiàn)圖4。結(jié)合含量標(biāo)準(zhǔn)要求，在冷藏（2～10℃）條件下，鹽酸達(dá)克羅寧對(duì)照品儲(chǔ)存溶液效期可定義為35 d。

圖4 鹽酸達(dá)克羅寧對(duì)照品溶液穩(wěn)定性

3 討論

不同溶劑中鹽酸達(dá)克羅寧穩(wěn)定性考察項(xiàng)下，以甲醇、乙腈、無(wú)水乙醇為溶劑時(shí)，原有流動(dòng)相比例（水相∶有機(jī)相=55∶45）不能完成測(cè)定，出現(xiàn)雜質(zhì)峰干擾主成分的測(cè)定。《中國(guó)藥典》2020年版四部[13]規(guī)定，流動(dòng)相的各組分比例、色譜柱（除填充劑種類(lèi)不可改變外）允許改變，以滿足測(cè)定要求。調(diào)整流動(dòng)相比例時(shí)，最小比例的組分X可在70%～130%或X±2%內(nèi)調(diào)整（兩者之間選擇最大值）。根據(jù)前述要求，甲醇、乙腈和無(wú)水乙醇為溶劑的情況下，分別以流動(dòng)相比例（水相∶有機(jī)相）60∶40、60∶40、65∶35可完成測(cè)定，測(cè)得鹽酸達(dá)克羅寧含量的變化情況，其中以無(wú)水乙醇為溶劑時(shí)，鹽酸達(dá)克羅寧12 h降解量＞4%，測(cè)定時(shí)采用安捷倫EC色譜柱（填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，699975-902，50 mm×4.6 mm，2.7μm）可排除干擾。

實(shí)驗(yàn)中以純化水為溶劑的情況下，鹽酸達(dá)克羅寧溶解性差，需超聲溶解。在測(cè)定過(guò)程中，偶有基線不平的干擾，導(dǎo)致主峰峰型差，無(wú)法正常積分。通過(guò)探究發(fā)現(xiàn)，以水為溶劑時(shí)，在保留時(shí)間58 min左右出現(xiàn)扁平的雜峰，推測(cè)該峰是干擾的主要原因。因此在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中保證60 min以上的洗脫時(shí)間，即可避免干擾。

通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，鹽酸達(dá)克羅寧在甲醇、無(wú)水乙醇中不穩(wěn)定，在乙腈、純化水、不同pH值的0.02 mol/L KH2PO4溶液（pH 1.0～6.0）、0.02 mol/L KH2PO4溶液（H3PO4調(diào)pH至3.0）-乙腈（V/V，55∶45）中穩(wěn)定，建議以酸性的流動(dòng)相進(jìn)行樣品制備，從而保證鹽酸達(dá)克羅寧的穩(wěn)定性。