白丹

（阜新市傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科 遼寧阜新 123000）

1 前言

肺結(jié)核是一種易傳染、病情較為嚴(yán)重的呼吸系統(tǒng)疾病，以低熱、咳嗽、咳血為主要臨床表現(xiàn)。 早期階段臨床癥狀不典型， 臨床診斷具有較大的難度。肺結(jié)核引發(fā)因素與結(jié)合分歧桿菌相關(guān)，因此臨床上將結(jié)核分枝桿菌的檢驗(yàn)作為肺結(jié)核診斷的一種輔助手段[1]。 結(jié)核分歧桿菌臨床診斷中主要采用的是痰涂片與快速培養(yǎng)法，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展和應(yīng)用，熒光PCR 技術(shù)也被應(yīng)用到結(jié)核分歧桿菌檢驗(yàn)中，為了探明不同檢驗(yàn)方法對肺結(jié)核患者痰液結(jié)核分枝桿菌的檢驗(yàn)價值，本次研究納入2019 年8 月～2020 年8月進(jìn)行痰液結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)的200 例肺結(jié)核患者為研究對象，比較了3 種檢驗(yàn)方法的檢驗(yàn)結(jié)果。 具體報(bào)告如下：

2 資料與方法

2.1 一般資料

回顧分析 2019 年 8 月～2020 年 8 月進(jìn)行痰液結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)的200 例肺結(jié)核患者臨床資料，所有患者均確診肺結(jié)核，接受胸部X 線片，檢查可見肺內(nèi)結(jié)核病灶，痰涂片抗酸染色顯示為陽性。 男性患者114 例，女性患者86 例，年齡最小為20 歲，最高為 69 歲，年齡平均為（45.62±8.33）歲，所有患者都知情同意，配合檢查和研究。

2.2 方法

采集所有患者痰液標(biāo)本，進(jìn)行痰液結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)，分別采用痰涂片、快速培養(yǎng)法、熒光定量PCR 法測定。

痰涂片法：將痰液標(biāo)本涂抹于載玻片，自然烘干后采用抗酸染色，然后放置在顯微鏡下進(jìn)行觀察。

快速培養(yǎng)法：痰液標(biāo)本用離心機(jī)1 000 r/min 離心，5 min 后，取沉淀后的痰液離心洗滌，使用吸管吸取0.5 ml 痰液標(biāo)本， 置于培養(yǎng)管接種并培養(yǎng)， 每隔1h，使用熒光強(qiáng)度記憶探測器探測培養(yǎng)管中熒光強(qiáng)度，觀察和記錄培養(yǎng)情況。 若42 d 內(nèi)未檢出，則判定結(jié)果為陰性。

熒光定量PCR 法： 痰液標(biāo)本中加入1%胰蛋白酶，混勻后取0.5 ml 標(biāo)本進(jìn)行離心處理，10 000 r/min，5 min， 然后將1 ml 生理鹽水沉淀進(jìn)行離心洗滌，離心洗滌 2 次， 痰液沉淀樣本量為 50 μl， 與試劑盒DNA 混合并煮沸，讓菌體靜置裂解6 h，然后進(jìn)行離心，模板上選擇上清液，2 μl 樣本量，進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。按照試劑盒反應(yīng)條件設(shè)置參數(shù)， 進(jìn)行DNA 分離擴(kuò)增，具體為：93℃預(yù)變性 2 min；93℃ 45 s、55℃ 120 s 10 個循環(huán)連續(xù)擴(kuò)增；93℃ 45 s、55℃ 120 s 30 個循環(huán)連續(xù)擴(kuò)增，根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行結(jié)果判斷，若拷貝數(shù)＞50，判定為陽性，同時設(shè)置陰性對照組。

2.3 觀察指標(biāo)

統(tǒng)計(jì)和比較3 種不同檢驗(yàn)方法的結(jié)核分枝桿菌陽性檢出率，以快速培養(yǎng)法的結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，比較痰涂片、熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法的檢測準(zhǔn)確度、靈敏度與特異度[2]。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和比較， 不同方法的陽性檢出率、準(zhǔn)確度、特異度、靈敏度等計(jì)數(shù)資料采用率用（%）表示，并采用 χ2檢驗(yàn)。 若 P＜0.05 則表示組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 3 種檢驗(yàn)方法對肺結(jié)核患者結(jié)核分枝桿菌陽性檢出率的比較

痰涂片法、快速培養(yǎng)法與熒光定量PCR 法檢驗(yàn)結(jié)核分枝桿菌陽性檢出率分別為34.0%、52.0%和56.0%，快速培養(yǎng)法、熒光定量PCR 法分別與痰涂片法陽性檢出率比較差異， 均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05，結(jié)果見表1。

表1 肺結(jié)核患者結(jié)核分枝桿菌陽性檢出率

3.2 分析肺結(jié)核患者的結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)結(jié)果

以快速培養(yǎng)法為標(biāo)準(zhǔn)， 分析肺結(jié)核患者的結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)結(jié)果顯示， 痰涂片法準(zhǔn)確度為77.0%（154/200），靈敏度與特異度分別為 60.6%（63/104）、94.8%（91/96）； 熒光定量 PCR 法準(zhǔn)確度為 94.0%（188/200），靈敏度與特異度分別為 98.1%（102/104）、89.6%（86/96）；可見熒光定量PCR 法準(zhǔn)確度與靈敏度均顯著高于痰涂片法 （χ2=23.3112，44.5903，P＜0.05）。 具體見表2。

表2 3 種檢驗(yàn)方法的結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)結(jié)果

4 討論

肺結(jié)核是一種比較常見且治療難度大的傳染性疾病，發(fā)病率高、傳染性強(qiáng)。 主要是因結(jié)核分枝桿菌入侵導(dǎo)致的肺部結(jié)核性病變，患者發(fā)病后，其免疫機(jī)制發(fā)生功能障礙，致使機(jī)體抵抗力下降，呼吸道感染幾率顯著增高，甚至引起呼吸衰竭等現(xiàn)象，嚴(yán)重可危及生命[3]。 因此，臨床上針對肺結(jié)核患者的早期診斷和治療具有重要的意義。 肺結(jié)核患者在疾病早期并無顯著的癥狀，因此診斷存在困難。常用的診斷方式也容易出現(xiàn)誤診和漏診情況。

由于肺結(jié)核的發(fā)生主要是因結(jié)核分枝桿菌入侵造成的，因此，臨床上多采用痰涂片、痰培養(yǎng)等方法，進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌檢測來輔助診斷肺結(jié)核。 痰涂片方法操作簡單， 只需要采用抗酸染色便能夠進(jìn)行觀察統(tǒng)計(jì)，但是該方法的靈敏度較低[4]。 痰培養(yǎng)方法則主要是培養(yǎng)痰液標(biāo)本的菌株，然后根據(jù)結(jié)核分枝桿菌的生長情況作出判斷， 但仍然存在著誤診的情況[5]。熒光定量PCR 法檢測是近年來用于結(jié)核分枝桿菌檢測的一種新手段，通過運(yùn)用PCR 反應(yīng)技術(shù)與熒光定量技術(shù)，進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌基因檢測進(jìn)行判定，具有精確度、靈敏度高等優(yōu)勢。 并且熒光定量PCR 法在檢測期間僅僅是在單管中進(jìn)行， 并不需要將管蓋打開，因此可以有效地規(guī)避交叉感染[6]。 本次研究結(jié)果顯示，痰涂片法、快速培養(yǎng)法與熒光定量PCR 法檢驗(yàn)結(jié)核分枝桿菌陽性檢出率分別為34.0%、52.0%和56.0%，快速培養(yǎng)法、熒光定量PCR 法陽性檢出率顯著更高； 以快速培養(yǎng)法為標(biāo)準(zhǔn)， 痰涂片法準(zhǔn)確度、靈敏度與特異度分別為77.0%、60.6%、94.8%；熒光定量PCR 法準(zhǔn)確度、 靈敏度與特異度分別為94.0%，98.1%、89.6%；可見熒光定量PCR 法準(zhǔn)確度與靈敏度均顯著高于痰涂片法。

綜上所述，痰涂片、快速培養(yǎng)法、熒光定量PCR反應(yīng)法3 種檢驗(yàn)方法用于肺結(jié)核患者痰液結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)均有一定的臨床價值，并且熒光定量PCR法用于肺結(jié)核患者痰液結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性顯著更優(yōu)。